【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种诱导多发性骨髓瘤细胞衰老的方法和应用。
技术介绍
1、细胞衰老是一种稳定的细胞周期停滞状态，是防止肿瘤细胞增殖的重要机制[1-3]。细胞衰老与造血干细胞(hsc)功能和多发性骨髓瘤(mm)进展相关[4-6]。据报道，衰老反应是影响血液恶性肿瘤化疗敏感性和治疗结果的关键因素。例如，aki603通过诱导衰老克服了慢性髓系白血病细胞对伊马替尼的耐药性[7]。因此，阐明mm的细胞衰老的机制可能是克服复发/难治性mm治疗障碍的关键。
2、最近，关于癌基因诱导的衰老(ois)越来越多[8-10]。ois是一种持续的抗增殖反应，可作为防止恶性转化的屏障。衰老相关异染色质病灶(sahf)是以浓缩的异染色质核心为中心的多层结构，可被检测为dna/染色质密集病灶，并可以通过各种触发因素诱导。通常，ois伴有明显的sahf，而其他形式的dna损伤反应诱导的衰老显示较少的sahf[11]。线粒体功能障碍也是衰老的典型标志[11-13]。正常的嵴对线粒体功能至关重要[14]，而衰老样本中的线粒体失去了典型的嵴结构[15]。
3、zeste基因增强子同源物2(ezh2)是多梳抑制复合体2(prc2)的一个催化亚基，通过组蛋白h3中lys-27的三甲基化(h3k27me3)在mm的表观遗传重塑中发挥关键作用[16-18]。最近的研究表明表观遗传修饰在细胞衰老中有重要作用[11]。此外，靶向ezh2的抑制剂最近显示出对各种肿瘤的治疗效果[19,20]。ezh2的高表达与血液系统恶性肿瘤(骨髓瘤和慢
4、lamin b1(lamin b1)是核膜(ne)的主要结构成分。核纤层紧密附着在核膜的内膜上，决定着细胞核的大小、形状和机械稳定性。lamin b1(lb1)水平的变化影响细胞衰老[36,37]。lamin b1缺乏是细胞衰老的常见标志[11,38]。lamin b1的分布与衰老过程中sahf的形成密切相关[39]。细胞外信号调节蛋白激酶(erk1/2)是一种具有典型级联信号特征的丝裂原活化蛋白激酶(mapk)家族蛋白，在信号转导途径和转录因子的功能中发挥重要作用。在大多数情况下，erk1/2是细胞增殖的调节因子；然而，已经发现erk1/2还可以促进衰老[40-42]。
5、近年来，一系列针对细胞衰老的治疗策略逐渐发展起来，包括诱导细胞衰老和消除衰老细胞[41,43]。但关于mm细胞的衰老机制还不清楚，诱导mm细胞衰老的药物也少有报道，因此需要进一步的研究来寻找针对mm更多更有效的治疗药物和策略。本专利技术的发现可能为探索mm患者耐药机制及建立衰老相关治疗策略提供重要参考。
技术实现思路
1、为了解决关于mm细胞的衰老机制还不清楚，诱导mm细胞衰老的药物也少有报道。因此需要进一步的研究来寻找针对mm更多更有效的治疗药物和策略的技术问题，本专利技术提供一种诱导多发性骨髓瘤细胞衰老的方法和应用，本专利技术对多发性骨髓瘤细胞(mm)的衰老机制进行了研究，创造性的发现核糖核苷酸还原酶调节亚单位m2(rrm2)过表达或者使用gsk126能诱导mm细胞衰老，以衰老相关异染色质灶(sahf)的形成和p21的积累，以及衰老相关β半乳糖苷酶活性增加为特征。此外，本专利技术发现这里的衰老机制是不同寻常的，laminb1在衰老细胞中通常是减少的，但rrm2过表达通过促进erk1/2的磷酸化和lamin b1的异常积累及异常分布，从而诱导细胞衰老。特异性抑制erk1/2磷酸化反过来部分恢复lamin b1水平并缓解衰老。此外，rrm2过表达抑制ezh2的甲基转移酶功能，并促进ezh2通过泛素-蛋白酶体途径降解。用gsk126直接靶向抑制ezh2也诱导mm细胞发生了与rrm2过表达类似的衰老。
2、以下为本专利技术涉及的名词缩写：
3、chx：环己酰亚胺；cq：氯喹；dapi：4',6-二脒基-2-苯基吲哚；erk1/2：细胞外信号调节蛋白激酶；ev：空载体；ezh2：zeste增强子同源物2；h3k27me3：组蛋白h3中lys-27的三甲基化；mm：多发性骨髓瘤；oe：过表达；ois：癌基因诱导的衰老；prc2：多梳抑制复合体2；rrm2：核糖核苷酸还原酶调节亚单位m2；sa-β-gal：衰老相关的β半乳糖苷酶；sahf：衰老相关异染色质病灶；tem：透射电子显微镜。
4、本专利技术第一方面公开了一种非治疗目的的诱导多发性骨髓瘤细胞衰老的方法，其中，通过抑制多发性骨髓瘤细胞中的ezh2诱导细胞衰老，包括过表达rrm2实现抑制ezh2，或者使用gsk126实现抑制ezh2。
5、在某一较佳实施方案中，过表达rrm2使ezh2被抑制的表现包括以下一种或多种：促进多发性骨髓瘤细胞中sahf的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-rb的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中erk1/2的磷酸化，导致多发性骨髓瘤细胞中lamin b1异常增多。
6、在某一具体实施方案中，过表达rrm2使ezh2被抑制还表现为多发性骨髓瘤细胞中sa-b-gal活性增高。
7、在某一较佳实施方案中，使用gsk126抑制ezh2的表现包括以下一种或多种：促进多发性骨髓瘤细胞中sahf的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-rb的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中erk1/2的磷酸化，导致多发性骨髓瘤细胞中lamin b1异常增多。在某一具体实施方案中，用gsk126抑制ezh2还表现为多发性骨髓瘤细胞中sa-b-gal活性增高。
8、在某一较佳实施方案中，所述多发性骨髓瘤细胞为oci-my5细胞或rpmi-8226细胞。
9、本专利技术第二方面提供一种抑制ezh2在制备诱导多发性骨髓瘤细胞衰老的药物中的应用，其中，过表达rrm2实现抑制ezh2，或者使用gsk126实现抑制ezh2。
10、在某一较佳实施方案中，过表达rrm2使ezh2被抑制的表现包括以下一种或多种：促进多发性骨髓瘤细胞中sa本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种非治疗目的的诱导多发性骨髓瘤细胞衰老的方法，其特征在于，通过抑制多发性骨髓瘤细胞中的EZH2诱导细胞衰老，包括过表达RRM2实现抑制EZH2，或者使用GSK126实现抑制EZH2。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，过表达RRM2使EZH2被抑制的表现包括：促进多发性骨髓瘤细胞中SAHF的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-RB的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中ERK1/2的磷酸化，和/或，导致多发性骨髓瘤细胞中Lamin B1异常增多。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，使用GSK126抑制EZH2的表现包括：促进多发性骨髓瘤细胞中SAHF的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-RB的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中ERK1/2的磷酸化，和/或，导致多发性骨髓瘤细胞中Lamin B1异常增多。
4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述多发性骨髓瘤细胞为OCI-MY5细胞或RPMI-8226细胞。
5.抑制EZH2在制备诱导多发性骨髓瘤细胞衰老的药物
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，过表达RRM2使EZH2被抑制的表现包括：促进多发性骨髓瘤细胞中SAHF的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-RB的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中ERK1/2的磷酸化，和/或，导致多发性骨髓瘤细胞中Lamin B1异常增多。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，使用GSK126抑制EZH2的表现包括：促进多发性骨髓瘤细胞中SAHF的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-RB的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中ERK1/2的磷酸化，和/或，导致多发性骨髓瘤细胞中Lamin B1异常增多。
8.如权利要求5-7任一项所述的应用，其特征在于，所述多发性骨髓瘤细胞为OCI-MY5细胞或RPMI-8226细胞。
9.一种非治疗目的的促进多发性骨髓瘤细胞中SAHF的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-RB的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中ERK1/2的磷酸化，和/或，促进多发性骨髓瘤细胞中Lamin B1异常增多的方法，其包括过表达RRM2抑制EZH2的步骤，和/或，使用GSK126抑制EZH2的步骤。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述多发性骨髓瘤细胞为OCI-MY5细胞或RPMI-8226细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种非治疗目的的诱导多发性骨髓瘤细胞衰老的方法，其特征在于，通过抑制多发性骨髓瘤细胞中的ezh2诱导细胞衰老，包括过表达rrm2实现抑制ezh2，或者使用gsk126实现抑制ezh2。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，过表达rrm2使ezh2被抑制的表现包括：促进多发性骨髓瘤细胞中sahf的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-rb的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中erk1/2的磷酸化，和/或，导致多发性骨髓瘤细胞中lamin b1异常增多。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，使用gsk126抑制ezh2的表现包括：促进多发性骨髓瘤细胞中sahf的形成，上调多发性骨髓瘤细胞中p21水平，降低多发性骨髓瘤细胞中p-rb的水平，增加多发性骨髓瘤细胞中erk1/2的磷酸化，和/或，导致多发性骨髓瘤细胞中lamin b1异常增多。
4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述多发性骨髓瘤细胞为oci-my5细胞或rpmi-8226细胞。
5.抑制ezh2在制备诱导多发性骨髓瘤细胞衰老的药物中的应用，其中，过表达rrm2实现抑制ezh2，或者使用gsk126实现抑制ezh2。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，过表...
【专利技术属性】
技术研发人员：施菊妹，郭姝杉，吴慧群，吴晓松，
申请(专利权)人：上海市东方医院同济大学附属东方医院，
类型：发明
国别省市：
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