【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学领域，具体是基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建。
技术介绍
1、据全球癌症统计报告显示，确诊食管鳞癌(escc)的患者越来越多，且临床就诊时约40％的食管鳞癌患者发现时已为晚期，晚期食管鳞癌的5年生存率不足15％，食管鳞癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，相关专家对食管鳞癌的诊断治疗进行了深入研究。
2、由于食管癌患者早期临床症状较为隐匿，临床就诊时多数患者均处于局部晚期或晚期，从而失去直接手术切除的机会，且放疗治疗的预后较低，免疫联合治疗模式成为了多数不能进行手术的食管癌患者的主要治疗手段。
3、在患者进行免疫联合治疗后，仍有不少患者癌症复发或转移，其原因在于癌症治疗后，体内残留有少量对治疗无反应或耐药的癌细胞，其数量较少，传统方法(活检组织检测方法)难以检测到，容易导致患者癌症复发或转移，因此，本方案提出了基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，以解决活检组织检测方法在进行癌症治疗后的预后阶段难以检测出mrd，容易使患者癌症复发或转移的问题。
2、为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，包括如下步骤：
3、步骤一，筛选和收集食管鳞癌患者；
4、步骤二，对患者进行三段式联合治疗，并在治疗前、治疗期间、治疗后和随访期间采
5、步骤三，根据tcr克隆注释构建tcr免疫组库；
6、步骤四，耦合ctdna突变图谱，获取其相关性和突变点，构建放疗-免疫治疗敏感模型。
7、进一步，步骤二中，三段式联合治疗包括新辅助免疫联合化疗治疗、免疫联合放化疗根治性治疗和免疫巩固性治疗。
8、进一步，步骤二中，在新辅助免疫联合化疗治疗前，采集患者内镜活检组织和外周血标本，分别进行t细胞免疫组库检测和外周血ctdna-mrd检测，获得第一次tcr克隆注释和第一次ctdna突变图谱。
9、进一步，步骤二中，新辅助免疫联合化疗治疗后、免疫联合放化疗根治性治疗前，采集患者的外周血标本，进行外周血ctdna-mrd检测，获得第二次ctdna突变图谱。
10、进一步，步骤二中，免疫联合放化疗根治性治疗后、免疫巩固性治疗前，在放疗剂量为50gy时，采集患者的外周血标本，进行外周血ctdna-mrd检测，获得第三次ctdna突变图谱。
11、进一步，步骤二中，免疫巩固性治疗后，在3个月内采集患者内镜活检组织和外周血标本，分别进行t细胞免疫组库检测和外周血ctdna-mrd检测，获得第二次tcr克隆注释和第四次ctdna突变图谱。
12、进一步，步骤二中，免疫巩固性治疗后，在第6和12个月采集患者的外周血标本，进行外周血ctdna-mrd检测，获得第五次和第六次ctdna突变图谱。
13、进一步，外周血ctdna-mrd检测包括：分别从组织、血液样本中提取ctdna和阴性对照dna，基于目标序列捕获二代测序技术，生物信息学分析组织dna和ctdna高通量测序数据信息，对患者组织dna和ctdna点进行全景式检测，绘制ctdna突变图谱。
14、进一步，全景式检测包括但不限于对患者组织dna和ctdna点突变、插入/缺失、重排和扩增的多种变异类型进行检测。
15、进一步，t细胞免疫组库检测包括：分别从组织、血液样本中分选t细胞，通过illumina hiseq x ten检测平台对t细胞受体编码基因的vj区域进行检测，经过测序数据质控后对数据进行比对分析，获得tcr克隆注释。
16、采用上述方案的原理及有益效果：
17、1.本方案通过mrd的动态监测来绘制ctdna突变图谱，并建立tcr免疫组库，根据突变点可以预测患者对放化疗和免疫治疗的敏感性，便于选择合适的治疗方案，探索放疗、化疗和免疫治疗的最佳组合模式，实现个体化治疗，及时去除mrd，减小患者复发风险，提高疗效。
18、2.通过对患者进行mrd动态监测，根据突变曲线的规律，可以获取免疫联合治疗时期的最佳放疗剂量，便于减少患者在放疗时因使用剂量不佳产生的不适。
19、3.通过外周血进行基于ctdna检测的mrd评估有望取代有创的活检组织标本检测，有效解决了部分患者的检查所带来的困难，也大大缓解了部分患者活检所带来的伤害，减轻了医疗负担。由此解决了活检组织检测方法在进行癌症治疗后的预后阶段难以检测出mrd，容易使患者癌症复发或转移的问题。
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1.基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，三段式联合治疗包括新辅助免疫联合化疗治疗、免疫联合放化疗根治性治疗和免疫巩固性治疗。
3.根据权利要求2的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，在新辅助免疫联合化疗治疗前，采集患者内镜活检组织和外周血标本，分别进行T细胞免疫组库检测和外周血ctDNA-MRD检测，获得第一次TCR克隆注释和第一次ctDNA突变图谱。
4.根据权利要求3的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，新辅助免疫联合化疗治疗后、免疫联合放化疗根治性治疗前，采集患者的外周血标本，进行外周血ctDNA-MRD检测，获得第二次ctDNA突变图谱。
5.根据权利要求4的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，免疫联合放化疗根治性治疗后、免疫巩固性治疗前，在放疗剂量为50Gy时，采集患者的外周
6.根据权利要求5的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，免疫巩固性治疗后，在3个月内采集患者内镜活检组织和外周血标本，分别进行T细胞免疫组库检测和外周血ctDNA-MRD检测，获得第二次TCR克隆注释和第四次ctDNA突变图谱。
7.根据权利要求6的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，免疫巩固性治疗后，在第6和12个月采集患者的外周血标本，进行外周血ctDNA-MRD检测，获得第五次和第六次ctDNA突变图谱。
8.根据权利要求7的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：外周血ctDNA-MRD检测包括：分别从组织、血液样本中提取ctDNA和阴性对照DNA，基于目标序列捕获二代测序技术，生物信息学分析组织DNA和ctDNA高通量测序数据信息，对患者组织DNA和ctDNA点进行全景式检测，绘制ctDNA突变图谱。
9.根据权利要求8的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：全景式检测包括但不限于对患者组织DNA和ctDNA点突变、插入/缺失、重排和扩增的多种变异类型进行检测。
10.根据权利要求9的基于MRD指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：T细胞免疫组库检测包括：分别从组织、血液样本中分选T细胞，通过Illumina HiSeq XTen检测平台对T细胞受体编码基因的VJ区域进行检测，经过测序数据质控后对数据进行比对分析，获得TCR克隆注释。
...【技术特征摘要】
1.基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1的基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，三段式联合治疗包括新辅助免疫联合化疗治疗、免疫联合放化疗根治性治疗和免疫巩固性治疗。
3.根据权利要求2的基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，在新辅助免疫联合化疗治疗前，采集患者内镜活检组织和外周血标本，分别进行t细胞免疫组库检测和外周血ctdna-mrd检测，获得第一次tcr克隆注释和第一次ctdna突变图谱。
4.根据权利要求3的基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，新辅助免疫联合化疗治疗后、免疫联合放化疗根治性治疗前，采集患者的外周血标本，进行外周血ctdna-mrd检测，获得第二次ctdna突变图谱。
5.根据权利要求4的基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，免疫联合放化疗根治性治疗后、免疫巩固性治疗前，在放疗剂量为50gy时，采集患者的外周血标本，进行外周血ctdna-mrd检测，获得第三次ctdna突变图谱。
6.根据权利要求5的基于mrd指导食管鳞癌放疗-免疫治疗敏感模型的构建，其特征在于：步骤二中，免疫巩固性治疗后，在3个月内采集患者内镜活...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈文斌，高红梅，祝淑钗，赵小涵，许元基，李曙光，温士旺，宋春洋，邓文钊，
申请(专利权)人：河北医科大学第四医院河北省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：
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