【技术实现步骤摘要】
本申请涉及茶叶细胞外囊泡用途的，更具体地说，它涉及一种茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途。
技术介绍
1、特异性皮炎(ad)是一种伴随严重瘙痒的炎症性皮肤病，其具有发病机制复杂、发病率高以及病情易反复等特点。目前常使用保湿剂、外用皮质类固醇和免疫抑制剂等对该类皮肤病变进行抗炎治疗，这些局部治疗可以缓解ad的症状；但长期使用会使得局部皮肤出现皮疹、刺痛以及萎缩等副作用。因此，我们迫切需要开发更好的ad治疗药物，且无全身暴露和相关副作用的药物。
2、其中，植物来源的细胞外囊泡(pdevs)引起了科学界越来越大的兴趣。其原因在于：一些研究表明，植物来源的细胞外囊泡含有功能性生物分子，如蛋白质、rna、代谢产物和脂质等，且pdevs可能影响着哺乳动物细胞。越来越多的研究表明，pdevs具有抗癌、抗炎和抗氧化等活性，使其在治疗疾病方面具有吸引力。
3、而茶叶是由山茶科山茶属(camellia)植物幼嫩的叶或芽加工而成，茶作为一种健康饮料，具有悠久的饮用历史。茶叶中含有多种生物学活性物质，如茶多酚、儿茶素以及茶黄素等均具抗氧化、抗肿瘤、抑菌消炎等诸多生物学功能，其中茶叶抗炎活性尤为显著。
4、因此，开发茶叶细胞外囊泡对特异性皮炎的治疗用途是必要的，其将提供一种副作用小的治疗特异性皮炎产品。
技术实现思路
1、本申请提供一种茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，研究表明茶叶细胞外囊泡具有治疗特异性皮炎的效果。
2、本申请提供的茶叶细胞外囊泡的特异
3、茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，所述茶叶细胞外囊泡来源于茶叶叶片和茎叶中的任意一种或两种。
4、通过采用上述技术方案，本申请通过动物实验发现，以涂抹0.5wt％dnfb溶液至小鼠的背部以及右耳，以诱发小鼠患有特异性皮炎。随后在该基础上立即对小鼠灌胃200μl本申请的茶叶细胞外囊泡液，浓度为0.5μg/μl(乙醇：生理盐水＝1:99)，结果发现，造模后10min内施用本申请茶叶细胞外囊泡的小鼠和仅仅造模组(仅仅诱发特异性皮炎但是不施用任何具有治疗效果药物)小鼠的搔抓次数相比显著减少，耳部肿胀厚度显著减低，背部评分指数也显著降低；以上均说明本申请的茶叶细胞外囊泡具有治疗特异性皮炎的用途。而相关组织的h&e染色实验也证明了类似的效果。而本申请的茶叶细胞外囊泡和常规的特异性皮炎治疗药物相比，例如地塞米松，针对特异性皮炎的治疗效果类似的同时又具有原料天然、副作用低的优势。
5、可选的，所述茶叶细胞外囊泡的制备方法包括以下步骤：
6、步骤一、取茶叶叶片和茎叶中的任意一种或两种，粉碎后酶解，固液分离后收集上清，得到茶叶汁液；
7、步骤二、将所述茶叶汁液经过滤、透析和微滤后，收集滤液；
8、步骤三、将所述滤液经浓缩、纯化以及超速离心后得到茶叶细胞外囊泡。
9、通过采用上述技术方案，在制备茶叶细胞外囊泡时，茶叶细胞包括细胞壁和细胞膜，通过酶解后以破坏细胞壁，以使得细胞中的细胞外囊泡释放出来。茶叶汁液经过步骤二的处理后，得到的是含有较多杂质的茶叶细胞外囊泡，进一步经步骤三处理后，得到纯化后茶叶细胞外囊泡，以提高其对炎症性肠病的治疗效果。
10、可选的，步骤一中酶解包括以下步骤：将粉碎后的茶叶样本以乙醇溶液浸泡后，除去乙醇溶液，加入酶液在45-55℃下酶解5-7h即可。
11、通过采用上述技术方案，乙醇溶液的浸泡处理一方面可以破坏茶叶细胞结构，改变其通透性；另一方面还可以溶解脂质等杂质。
12、可选的，所述酶液的组分包括：1.5-2.5wt％果胶酶，3-5wt％纤维素酶，0.4-0.8mol/l甘露醇。
13、在一些实施方案中，果胶酶含量为1.5-1.8wt％、1.7-2.1wt％、1.9-2.4wt％以及2.5-2.5wt％；在一个实施例中，果胶酶的含量可以为1.5wt％、1.64wt％、1.82wt％、1.93wt％、2.06wt％、2.32wt％以及2.47wt％。
14、在一些实施方案中，纤维素酶含量为3-3.8wt％、3.6-4.2wt％、4.1-4.7wt％以及4.6-5.0wt％；在一个实施例中，纤维素酶的含量可以为3.1wt％、3.64wt％、3.92wt％、4.21wt％、4.52wt％、4.82wt％以及5.0wt％。
15、在一些实施方案中，甘露醇含量为0.4-0.51mol/l、0.48-0.59mol/l、0.52-0.67mol/l、0.64-0.79mol/l、0.76-0.84mol/l以及0.81-0.9mol/l；在一个实施例中，甘露醇含量可以为0.41mol/l、0.46mol/l、0.57mol/l、0.62mol/l、0.74mol/l以及0.89mol/l。
16、可选的，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70-80％。
17、可选的，步骤二中所述过滤包括以250-350目孔径范围的滤网或滤袋过滤，收集滤液；所述透析包括100-200nm孔径的膜过滤，收集透析液；所述微滤包括0.4-0.55μm孔径的膜过滤，收集滤液。
18、通过采用上述技术方案，以逐渐缩小的膜孔径逐步将大颗粒杂质脱除，以富集和纯化茶叶细胞外囊泡。
19、可选的，步骤三中所述纯化包括以尺寸排阻色谱柱过柱纯化并收集洗脱液的步骤。
20、可选的，步骤三中所述超速离心具体包括以下步骤：
21、将纯化时的洗脱液经1500-2500g离心25-35min；上清液再经8000-12000g离心40-50min后微滤；滤液经80000-120000g离心65-75min；沉淀以pbs缓冲液重悬后再经80000-120000g离心65-75min，即得茶叶细胞外囊泡。
22、通过采用上述技术方案，洗脱液经1500-2500g离心25-35min后大分子沉淀，茶叶细胞外囊泡留在上清液中；进一步提高离心转速，在8000-12000g离心40-50min后，进一步去除粒径更小的杂质，使之沉淀，而茶叶细胞外囊泡依然留在上清液中；微滤后滤液经80000-120000g离心65-75min，此时茶叶细胞外囊泡被沉淀，而更小分子量的杂质被留在上清液，将沉淀以pbs缓冲液重悬后再经80000-120000g离心65-75min，进一步去除小分子沉淀后即得茶叶细胞外囊泡。
23、可选的，所述茶叶细胞外囊泡用于特异性皮炎时，所述茶叶细胞外囊泡是发挥治疗效果的药物原料或药物原料之一；
24、所述药物的剂型选自微针剂、外用液体剂、外用固体剂、外用半固体剂、贴膏剂、贴剂以及外用气体制剂中的任意一种或多种。
25、通过采用上述技术方案，根据实际药物的需要将茶叶细胞外囊泡制备成便于外敷、外涂等方式的药物。
26、进一步的，所述外用液体剂可以是溶液剂、洗剂、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述茶叶细胞外囊泡来源于茶叶叶片和茎叶中的任意一种或两种。
2.根据权利要求1所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述茶叶细胞外囊泡的制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，步骤一中酶解包括以下步骤：将粉碎后的茶叶样本以乙醇溶液浸泡后，除去乙醇溶液，加入酶液在45-55℃下酶解5-7h即可。
4.根据权利要求3所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述酶液的组分包括：1.5-2.5wt%果胶酶，3-5wt%纤维素酶，0.4-0.8mol/L甘露醇。
5.根据权利要求3所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70-80%。
6.根据权利要求2所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，步骤二中所述过滤包括以250-350目孔径范围的滤网或滤袋过滤，收集滤液；所述透析包括100-200nm孔径的膜过滤，收集透析液；所述微
7.根据权利要求2所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，步骤三中所述纯化包括以尺寸排阻色谱柱过柱纯化并收集洗脱液的步骤。
8.根据权利要求2所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，步骤三中所述超速离心具体包括以下步骤：
9.根据权利要求1所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述茶叶细胞外囊泡用于特异性皮炎时，所述茶叶细胞外囊泡是发挥治疗效果的药物原料或药物原料之一；
10.根据权利要求1所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述药物还包括其他辅助组分，所述其他辅助组分选自益生菌、辅料、赋形剂、助剂、分散剂和药品添加剂中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述茶叶细胞外囊泡来源于茶叶叶片和茎叶中的任意一种或两种。
2.根据权利要求1所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述茶叶细胞外囊泡的制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，步骤一中酶解包括以下步骤：将粉碎后的茶叶样本以乙醇溶液浸泡后，除去乙醇溶液，加入酶液在45-55℃下酶解5-7h即可。
4.根据权利要求3所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述酶液的组分包括：1.5-2.5wt%果胶酶，3-5wt%纤维素酶，0.4-0.8mol/l甘露醇。
5.根据权利要求3所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征在于，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70-80%。
6.根据权利要求2所述的茶叶细胞外囊泡的特异性皮炎的治疗用途，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：张志荣，陈亮，杨奕霖，
申请(专利权)人：福建省祥兰茶业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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