【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫治疗领域，具体涉及一种trpm3抗体、制备其的方法及应用。
技术介绍
1、trpm3(trp(瞬时受体电位)间弹性蛋白3)是离子通道trp家族中研究最少的蛋白质之一，异源表达的trpm3通道具有组成性活性，具有向外整流的电流-电压关系，并受到细胞内mg2+的抑制，除了这些相当常见的特征，其中trpm3通道类似于与其密切相关的通道trpm6和trpm7，trpm3通道有几个独特的特征，使它们与这个多元化家族的其他成员区分开来。trpm3基因编码了大量主要由选择性剪接产生的亚型。只有(至少)八个产生序列多样性的位点中的两个已经阐明了功能后果，一个导致非功能通道，另一个深刻影响离子选择性。
2、trpm3是一个同源四聚体通道，在蛋白质的细胞质n末端具有独特的～700个氨基酸长的trpm特异性结构域。与trpv1一样，trpm3是一种具有相对高ca2+的非选择性阳离子通道磁导率和具有较强的向外整流电流-电压关系，在神经系统中，目前已报道trpm3在cns和pns，包括drg神经元，以及各种非神经元组织中表达。
3、trpm3是近年来确定的trp家族中除trpv1和trpa1外另一疼痛感受通道。trpm3可被热和化学配体如神经甾体孕烯醇酮硫酸盐(pregs)和合成配体cim0216激活，激活后对钙离子有较大的通透性。另一重要发现是：吗啡等阿片类药物激活μ受体后可以强烈抑制trpm3活性，这表明trpm3可能是阿片类镇痛药物的外周镇痛靶点。因而，trpm3有望成为开发镇痛药物的新靶点。
5、由于小分子药物的副作用比较大，而大分子药物具有其限制中枢神经系统(cns)渗透性(当靶向外周治疗时)、低免疫原性、高选择性和有利的半衰期的等优势，急需开发抗体药物代替小分子药物。
技术实现思路
1、为解决以上问题，本专利技术主要提供一种trpm3单克隆抗体的制备方法，所使用的免疫原为去垢剂纯化的蛋白，抗体的制备采用杂交瘤技术，亲和力的筛选主要是elisa(酶联免疫吸附法)和facs(流式细胞术)，再结合flexstation3(多模式微孔板读取器)读取细胞通过离子通道流入胞内的钙离子引起的荧光强度变化，筛选出既有亲和力又有功能性的抗体。
2、此外，本专利技术提供了一种抗trpm3抗体的应用，用于在抑制通过激动剂激活tprm3通路中使用，所述trpm3的激动剂为pregnenolone sulfate(孕烯醇酮硫酸盐，简称pregs)，能够特异性激活trpm3的机制，而本专利技术筛选的抗体发现其具体抑制trpm3通路的作用。
3、具体来说：
4、本专利技术的第一方面提供一种trpm3抗体，所述trpm3抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:25、38、39所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:28、29、40所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
5、所述重链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:5-7所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:8-10所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
6、所述重链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:15-17所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:18-20所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
7、本专利技术的一些具体实施方案中，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如seq idno:25-27所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如seqid no:28-30所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
8、所述重链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:25、35、36所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:28、29、37所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
9、本专利技术的一些具体实施方案中，所述重链可变区还包括重链可变区框架区hfwr，和/或，所述轻链可变区还包括轻链可变区框架区lfwr，其中，所述hfwr为人源或小鼠源的重链可变区框架区，所述lfwr为人源或小鼠源抗体的轻链可变区框架区。
10、本专利技术的一些具体实施方案中，所述重链可变区包含如seq id no:3所示的氨基酸序列或与如seq id no:3所示的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；和/或，所述轻链可变区包含如seq id no:4所示的氨基酸序列或与如seq idno:4所示的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；或，
11、所述重链可变区包含如seq id no:13所示的氨基酸序列或与如seq id no:13所示的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；和/或，所述轻链可变区包含如seq id no:14所示的氨基酸序列或与如seq id no:14所示的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；或，
12、所述重链可变区包含如seq id no:23所示的氨基酸序列或与如seq id no:23所示的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；和/或，所述轻链可变区包含如seq id no:24所示的氨基酸序列或与如seq id no:24所示的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；或，
13、所述重链可变区包含如seq id no:33所示的氨基酸序列或与如seq id no:33所示的氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性；和/或，所述轻链可变区包含如seq id no:34所示的氨基酸序列或与如se本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种TRPM3抗体，其特征在于，所述TRPM3抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:25、38、39所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28、29、40所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或，
2.如权利要求1所述的TRPM3抗体，其特征在于，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:25-27所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28-30所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或，
3.如权利要求1或2所述的TRPM3抗体，其特征在于，所述重链可变区还包括重链可变区框架区HFWR，和/或，所述轻链可变区还包括轻链可变区框架区LFWR，其中，所述HFWR为人源或小鼠源的重链可变区框架区，所述LFWR为人源或小鼠源抗体的轻链可变区框架区；
4.如权利要求1-3任一项所述的TRPM3抗体，其特征在于，所述的TRPM3抗体为以下任何一种抗体
5.一种嵌合抗原受体，其特征在于，其包含如权利要求1-4任一项所述的TRPM3抗体。
6.一种分离的核酸，其编码如权利要求1-4中任一项所述的TRPM3抗体、或如权利要求5所述的嵌合抗原受体；
7.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含如权利要求6所述的核酸；
8.一种转化体，其特征在于，所述转化体在宿主细胞中包含如权利要求7所述的重组表达载体；
9.一种制备TRPM3抗体的方法，其特征在于，其包括培养如权利要求8所述的转化体，从培养物中获得所述抗体。
10.一种抗体药物偶联物，其特征在于，所述抗体药物偶联物包含细胞毒性剂，以及如权利要求1-4任一项所述的TRPM3抗体。
11.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含如权利要求1-4任一项所述的TRPM3抗体、如权利要求5所述的嵌合抗原受体或如权利要求10所述的抗体药物偶联物，以及药学上可接受的载体。
12.如权利要求1-4任一项所述的TRPM3抗体、如权利要求5所述的嵌合抗原受体、如权利要求6所述的核酸、如权利要求7所述的重组表达载体、如权利要求8所述的转化体、如权利要求10所述的抗体药物偶联物或如权利要求11所述的药物组合物在制备治疗疼痛的药物中的应用；
13.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1-4任一项所述的TRPM3抗体、如权利要求5所述的嵌合抗原受体、如权利要求10所述的抗体药物偶联物或如权利要求11所述的药物组合物。
14.一种检测TRPM3的方法，其包括使用如权利要求1-4中任一项所述的TRPM3抗体、如权利要求5所述的嵌合抗原受体、如权利要求10所述的抗体药物偶联物、如权利要求11所述的药物组合物和/或如权利要求13所述的试剂盒与样品接触；
...【技术特征摘要】
1.一种trpm3抗体，其特征在于，所述trpm3抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:25、38、39所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:28、29、40所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
2.如权利要求1所述的trpm3抗体，其特征在于，所述重链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:25-27所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和/或，所述轻链可变区包含氨基酸序列分别如seq id no:28-30所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
3.如权利要求1或2所述的trpm3抗体，其特征在于，所述重链可变区还包括重链可变区框架区hfwr，和/或，所述轻链可变区还包括轻链可变区框架区lfwr，其中，所述hfwr为人源或小鼠源的重链可变区框架区，所述lfwr为人源或小鼠源抗体的轻链可变区框架区；
4.如权利要求1-3任一项所述的trpm3抗体，其特征在于，所述的trpm3抗体为以下任何一种抗体形式：
5.一种嵌合抗原受体，其特征在于，其包含如权利要求1-4任一项所述的trpm3抗体。
6.一种分离的核酸，其编码如权利要求1-4中任一项所述的trpm3抗体、或如权利要求5所述的嵌合抗原受体；
7.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含如权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：张进，李健，张雨婷，徐婷婷，周澄杰，郑卓萍，曾舒淇，冼翠玲，
申请(专利权)人：深圳晶蛋生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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