【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物浓度监测，尤其涉及一种检测干血斑中镇静类药物浓度的方法。
技术介绍
1、劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮在临床上均属于镇静类药物，能够有效的治疗睡眠问题，缓解紧张焦虑情绪。在临床上广泛应用于睡眠障碍、焦虑障碍等身心疾病。但不同药物针对不同个体，会产生一定的副作用，如过量的劳拉西泮可以引起嗜睡和宿醉反应，长期服用劳拉西泮也可能会引起药物依赖。扎来普隆用药过量有中枢神经系统抑制作用的表现，轻微的症状有：瞌睡、昏睡及意识模糊等。严重的症状有：共济失调、肌张力减退、低血压、有时昏迷甚至死亡。而奥沙西泮的副作用有头昏、恶心、胃部不适、面部水肿，甚至出现白细胞减少、过敏反应、肝功受损、记忆障碍、兴奋等，肾功能不全（或受损）者慎用，需用时注意调整剂量。
2、治疗药物监测（therapeutic drug monitoring，tdm）是通过对生物样本中的药物进行分析，了解人体内治疗药物的浓度水平，以获得最佳疗效和最小不良反应，并实现个体化治疗的技术。tdm应用于患者个体化治疗能够通过优化药物治疗方案提高疗效，降低不良反应，也可以为临床合理用药提供依据，确定个体化服药剂量，有助于缩短住院时长，节省治疗费用。
3、目前检测劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的方法有液相色谱法，气相色谱法，气质联用技术以及液相色谱串联质谱法，如cn115754033a公开的一种劳拉西泮血药浓度检测方法、cn111812225a公开的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗焦虑和催眠药物浓度的方法，cn107192788a公开的一种血
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种基于液相色谱串联质谱法检测干血斑中镇静类药物浓度的方法，以干血斑为检测样本，采用蛋白沉淀法对待测物进行分离提取，解决偏远地区样本运输问题，以及样本检测时间长、操作复杂、准确度不高等问题，可满足临床对于劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮三种镇静类药物的检测需求。
2、本专利技术是采用如下技术方案实现的：
3、一种基于液相色谱串联质谱法检测干血斑中镇静类药物浓度的方法，包括如下步骤：
4、s1、前处理：
5、s1a、将标准曲线、质控品和采集到的血清分别滴在干血采集卡上，室温下晾干，分别得到标准曲线干血斑样本、质控品干血斑样本和待测干血斑样本；所述标准曲线是指将含有劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的甲醇溶液加入空白血清中，配制成不少于6个具有浓度梯度的混合液；所述质控品是指将含有劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的甲醇溶液加入空白血清中，配制成3个具有不同浓度的混合液；
6、s1b、取步骤s1a得到的干血斑样本分别置于样品管中；
7、s1c、分别加入内标沉淀剂；
8、s1d、将样品管置于多管涡旋混合器上，以1000-2000rpm震荡混合5-15min，超声5-15min，然后以1000-2000rpm震荡混合5-15min，12000-18000 rpm离心3-10min；
9、s1e、取上清液，分别得到标准曲线样本上清液、质控品样本上清液和待测样本上清液；
10、s2、质谱检测：
11、s2a、样品检测：取标准曲线样本上清液、质控品样本上清液和待测样本上清液注入液相色谱-串联质谱仪进行检测，记录待测样本上清液中3种血药，即劳拉西泮、扎来普隆、奥沙西泮的峰面积响应；
12、s2b、标准曲线图绘制：以不少于6个不同浓度的标准曲线的浓度为横坐标x，以各标准曲线的实际检测峰面积与各自内标峰面积的比值为纵坐标y，绘制标准曲线图；
13、s2c、标准曲线方程拟合：以各标准曲线的峰面积比值y对标示浓度x进行线性回归，可获得回归方程：y=a+bx，其中y为纵坐标，x为横坐标，a为截距，b为斜率，并计算相关系数r，要求r应不低于0.990；
14、s2d、样本检测结果计算：将待测样本上清液中3种血药的峰面积与内标峰面积的比值分别代入上述各自的标准曲线回归方程，分别计算得到待测样本上清液中各药物的浓度。
15、所述内标沉淀剂是含劳拉西泮-d4、扎来普隆-d5和奥沙西泮-d5浓度均为2ng/ml的甲醇乙腈溶液，其中甲醇的体积比占总溶剂体积的50-100%。
16、步骤s1a中所述浓度梯度，是指在这些混合液中，劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮各自的浓度按照一定的梯度顺序从大到小依次降低，从而可以在后续的质谱检测中绘制标准曲线图。优选的，所述浓度梯度以不小于一倍的取值从大到小依次降低。进一步优选的，所述标准曲线包含6个具有浓度梯度的含有劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的混合液。
17、例如，在一个实施例中，标准曲线包括6个具有浓度梯度的混合液，劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮三种药物的浓度分别为第一组1000ng/ml、1200ng/ml和8000ng/ml，第二组500ng/ml、600ng/ml和4000ng/ml，第三组250ng/ml、300ng/ml和2000ng/ml，第四组125ng/ml、150ng/ml和1000ng/ml，第五组31.25ng/ml、40ng/ml和250ng/ml，第六组15ng/ml、15ng/ml和100ng/ml。
18、优选的，所述标准曲线中劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的浓度范围依次为：劳拉西泮12.5-1250ng/ml、扎来普隆12.5-1250ng/ml和奥沙西泮75-7500ng/ml。
19、在一个优选实施例中，所述标准曲线包括6个具有浓度梯度的混合液，其中，劳拉西泮在6个混合液中的浓度分别为：1250ng/ml、625ng/ml、312.5ng/ml、125ng/ml、31.25ng/ml、12.5ng/ml；扎来普隆在6个混合液中的浓度分别为：1250ng/ml、625ng/ml、312.5ng/ml、125ng/ml、31.25ng/ml、12.5ng/ml；奥沙西泮在6个混合液中的浓度分别为7500ng/ml、3750ng/ml、1875ng/ml、750ng/ml、187.5ng/ml、75ng/ml。
20、所述质控品是本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于液相色谱串联质谱法检测干血斑中镇静类药物浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标沉淀剂是含劳拉西泮-D4、扎来普隆-D5和奥沙西泮-D5浓度均为2ng/mL的甲醇乙腈溶液。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述内标沉淀剂中甲醇的体积占总溶剂体积的50-100%。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浓度梯度以不小于一倍的取值从大到小依次降低。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线包含6个具有浓度梯度的含有劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的混合液。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线中劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的浓度范围依次为：劳拉西泮12.5-1250ng/mL、扎来普隆12.5-1250ng/mL和奥沙西泮75-7500ng/mL。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线包括6个具有浓度梯度的混合液，其中，劳拉西泮在6个混合液中的浓度分别为：1250ng/mL、625ng/mL、312.
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质控品中劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的浓度范围依次为：劳拉西泮50-1000ng/mL、扎来普隆50-1000ng/mL和奥沙西泮200-7000ng/mL。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质控品中，劳拉西泮在3个混合液中的浓度分别为：937.5ng/mL、500ng/mL、62.5ng/mL；扎来普隆在3个混合液中的浓度分别为：937.5ng/mL、500ng/mL、62.5ng/mL；奥沙西泮在3个混合液中的浓度分别为5625ng/mL、3000ng/mL、375ng/mL。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S2质谱检测中采用如下的流动相：流动相A是超纯水，流动相B是纯乙腈。
...【技术特征摘要】
1.一种基于液相色谱串联质谱法检测干血斑中镇静类药物浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标沉淀剂是含劳拉西泮-d4、扎来普隆-d5和奥沙西泮-d5浓度均为2ng/ml的甲醇乙腈溶液。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述内标沉淀剂中甲醇的体积占总溶剂体积的50-100%。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浓度梯度以不小于一倍的取值从大到小依次降低。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线包含6个具有浓度梯度的含有劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的混合液。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线中劳拉西泮、扎来普隆和奥沙西泮的浓度范围依次为：劳拉西泮12.5-1250ng/ml、扎来普隆12.5-1250ng/ml和奥沙西泮75-7500ng/ml。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准曲线包括6个具有浓度梯度的混合液，其中，劳拉西泮在6个混合液中的浓度分别为：1250ng/ml、625ng/ml、312.5ng/ml、125ng/ml、31.25...
【专利技术属性】
技术研发人员：何熲，李广林，孙鑫，
申请(专利权)人：上海康黎医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：
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