【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体，尤其是涉及一种与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段及其应用。
技术介绍
1、在整个肿瘤浸润区域，巨噬细胞在肿瘤组织约占50％，巨噬细胞的数量同肿瘤的预后呈现反向联系，表明巨噬细胞在肿瘤中具有重要的作用。
2、巨噬细胞发挥吞噬效应需要两个信号同时起作用：一个是靶向细胞表面的“吞噬”信号的激活，另一个是相同目标表面“不吞噬”信号的失活。任何一个信号的缺少都不足以引发吞噬效应的发生。研究表明cd47是一类“不吞噬”信号，cd47通过与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα，sirpα)相互结合抑制巨噬细胞的吞噬作用。
3、cd47也称为整联蛋白相关蛋白(iap)，是具有氨基末端免疫球蛋白结构域和羧基末端多重跨膜区的50kda膜蛋白。cd47与多种配体相互作用，包括但不限于单调节蛋白α(sirpα)，sirpγ，整联蛋白和血小板反应蛋白-1(tsp-1)。sirpα主要在骨髓细胞上表达，包括巨噬细胞，骨髓树突细胞(dc)，粒细胞，肥大细胞及其前体，包括造血干细胞。
4、肿瘤细胞也可以通过cd47的表达逃避巨噬细胞吞噬作用(例如参见ep2242512及其中引用的相关文献)。cd47/sirpα能够相互作用传递“不吞噬”信号，阻止自体吞噬作用。研究显示肿瘤细胞相比于邻近的非肿瘤细胞cd47蛋白过表达，过表达cd47蛋白能够有效地帮助肿瘤逃避先天免疫监视和消除。阻断cd47-sirpα与抗cd47抗体的相互作用已经显示出有效诱导体外肿瘤细
5、癌症免疫疗法是近年来生物科学领域的研究热点，但是目前癌症免疫疗法主要围绕如何提高获得性免疫系统能力，例如基于t细胞的ctla4抗体、pd-1抗体、pd-l1抗体等的免疫检查点抑制剂疗法和car-t、tcr-t等细胞疗法。但是以免疫检查点(checkpoint)为靶点，激活t细胞功能，从而提高获得性免疫系统能力来攻克癌症这一道路仍充满曲折。然而固有免疫系统在肿瘤免疫治疗中的作用，却长期没有得到发挥。cd47是癌症治疗的有效靶标，并且需要其适当的拮抗剂来制备人类治疗剂。在针对各种肿瘤和/或癌症的治疗中，仍然急需开发具有良好的靶点特异性、疗效优异(例如改善巨噬细胞的吞噬作用，抑制肿瘤生长)，且副作用较小的抗cd47抗体。
6、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，该抗原或其抗原结合片段与人cd47抗原和猴cd47抗原均具有良好的特异性结合能力；并且该cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段在促进巨噬细胞的吞噬作用时，不会引起血红细胞凝结。基于本专利技术提供的与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，本专利技术的目的还在于提供其应用。
2、为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
3、根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，包括轻链可变区和/或重链可变区；
4、所述轻链可变区具有由cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3组成的轻链cdrs，cdr-l1的氨基酸序列如seq_35或36所示，cdr-l2的氨基酸序列如seq_37所示，cdr-l3的氨基酸序列如seq_38所示；
5、所述轻链可变区的骨架区包括fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4；
6、fr-l1的氨基酸序列如seq_1所示；
7、fr-l2的氨基酸序列如seq_2、seq_3或seq_4所示；
8、fr-l3的氨基酸序列如seq_5、seq_6或seq_7所示；
9、fr-l4的氨基酸序列如seq_8所示；
10、所述重链可变区具有由cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3组成的重链cdrs，cdr-h1的氨基酸序列如seq_32所示，cdr-h2的氨基酸序列如seq_33所示，cdr-h3的氨基酸序列如seq_34所示；
11、所述重链可变区的骨架区包括fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4；
12、fr-h1的氨基酸序列如seq_12或seq_13所示；
13、fr-h2的氨基酸序列如seq_14、seq_15或seq_16所示；
14、fr-h3的氨基酸序列如seq_17、seq_18、seq_19、seq_20或seq_21所示；
15、fr-h4的氨基酸序列如seq_22所示。
16、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种生物材料，该生物材料包括编码与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，携带所述多核苷酸的载体，或细胞，所述细胞携带所述多核苷酸，或含有所述载体的细胞，或能够表达上述与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段。
17、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种免疫偶联物，该免疫偶联物由上述与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段与至少一种诊断剂和/或治疗剂偶联以形成免疫偶联物。
18、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了药物组合物，该药物组合物含有上述与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段、上述生物材料或上述免疫偶联物。
19、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了上述与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段、上述生物材料、上述免疫偶联物或药物组合物在如下(a)～(d)中任意一种的应用：(a)制备治疗cd47阳性肿瘤的药物；(b)制备预防cd47阳性肿瘤的药物；(c)制备检测cd47的试剂盒；(d)制备诊断cd47相关疾病的试剂盒。
20、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种检测cd47或诊断cd47相关疾病的试剂盒，该试剂盒包括上述抗cd47抗体或其抗原结合片段、上述生物材料、上述免疫偶联物或上述药物组合物。
21、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
22、本专利技术提供的与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段通过优化了轻链可变区和重链可变区的骨架区，具有亲和力高、特异性强，且能够有效降低其免疫原性的优势；该抗体或其抗原结合片段的重要优点在于能强结合于肿瘤细胞，并阻断人sirpa与人cd47信号，可以促进巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，降低红细胞凝集，且与rbc、血小板表现出极弱的结合，安全性好。因此该抗体或其抗原结合片段能够在人类肿瘤治疗方面发挥强有力作用，广泛应用于制备治疗和/或预防cd47阳性肿瘤的药物，以及制备检测cd47或诊断cd47相关疾病的试剂盒。
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1.一种与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括轻链可变区和/或重链可变区；
2.根据权利要求1所述的与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4的氨基酸序列分别如Seq_1、Seq_2、Seq_5和Seq_8所示；
3.根据权利要求1所述的与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4的氨基酸序列分别如Seq_12、Seq_14、Seq_17和Seq_22所示；
4.根据权利要求1-3任一项所述的与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区和重链可变区；
5.根据权利要求1-3任一项所述的与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体具有恒定区，重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD中的任一种；轻链恒定区为κ或λ链；优选地，所述抗体为CDR移植抗体、多聚体抗体
6.生物材料，其特征在于，包括多核苷酸、载体或细胞；
7.免疫偶联物，其特征在于，权利要求1～5任一权利要求所述的与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段与至少一种诊断剂和/或治疗剂偶联以形成免疫偶联物；
8.药物组合物，其特征在于，所述组合物含有权利要求1～5任一项所述的与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段、权利要求6所述生物材料或权利要求7所述免疫偶联物。
9.权利要求1～5任一项所述的与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段、权利要求6所述的生物材料、权利要求7所述的免疫偶联物或权利要求8所述的药物组合物在如下(a)～(d)中任意一种的应用；
10.检测CD47或诊断CD47相关疾病的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～5任一所述与CD47特异性结合的抗体或其抗原结合片段、权利要求6所述的生物材料、权利要求7所述的免疫偶联物或权利要求8所述的药物组合物；
...【技术特征摘要】
1.一种与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括轻链可变区和/或重链可变区；
2.根据权利要求1所述的与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述轻链可变区fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4的氨基酸序列分别如seq_1、seq_2、seq_5和seq_8所示；
3.根据权利要求1所述的与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4的氨基酸序列分别如seq_12、seq_14、seq_17和seq_22所示；
4.根据权利要求1-3任一项所述的与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区和重链可变区；
5.根据权利要求1-3任一项所述的与cd47特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体具有恒定区，重链恒定区选自igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige或igd中的任一种；轻链恒...
【专利技术属性】
技术研发人员：霍永庭，芦迪，符俊，
申请(专利权)人：广东菲鹏制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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