【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、成簇规律间隔短回文重复序列(crispr)和crispr相关(cas)基因(统称为crispr-cas或crispr/cas系统)是古细菌和细菌中针对外来遗传元件而防御特定物种的适应性免疫系统。
技术实现思路
1、正是在上述背景下，本专利技术提供了优于现有技术的某些优点和进步。
2、尽管本文披露的本专利技术不限于特定的优点或功能，但本专利技术提供了变体多肽和/或包含变体多肽的组合物，其中相对于亲本多肽，该变体多肽包含改变，其中该亲本多肽包含seq id no:3，其中该变体多肽能够与rna指导物和靶核酸结合，并且其中相对于亲本多肽或包含亲本多肽的复合物，该变体多肽或包含变体多肽的复合物表现出增强的酶活性、增强的结合活性、增强的结合特异性、和/或增强的稳定性。
3、在一些实施例中，本专利技术的变体多肽包含与seq id no:3具有50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％但非100％同一性的多肽序列。
4、在一方面，本披露提供了变体多肽，其中相对于seq id no:3的氨基酸序列，该变体多肽包含改变，其中该改变包含d509r、s511r、i521r、d535g、q514g、l516r、l516g、e198r、s527r、d509k、d509g、l580g、v359r、d535k、y381r、r354g、m380k、m380r、v383r、
5、在一方面，本披露提供了变体多肽，其中相对于seq id no:3的氨基酸序列，该变体多肽包含改变，其中该改变包含d509r、s511r、i521r、d535g、q514g、l516r、l516g、e198r、s527r、d509k、d509g、l580g、v359r、d535k、y381r、r354g、m380k、m380r、v383r、l580r、e367r、i521k、e367g、e507r、i521g、w350r、d535r、r528k、s527k、l385g、w350g、l516k、y381g、h532r、d129r、p615r、g578r、m380g、v595g、r531g、d129g、r531k、d158g、n476g、g578k、a512r、p618r、v595r、v595k、v383g、a597g、y381k、p618g、e198k、t288r、e507k、l385r、c538g、p615g、d386r、s511k、或c371g、k136g、n220r、s78k、k141g、k240r、d277r、t165r、或k374r，并且其中该变体多肽与seq id no:3的氨基酸序列相差1-20个氨基酸残基。
6、在一些实施例中，变体多肽与seq id no:3的氨基酸序列相差1至50个氨基酸残基(例如，1至45、1至35、1至25、1至15和10、以及1至5、5至50、5至40、5至30、5至20、5至10、10至50、10至40、10至30、10至20、10至15、15至50、15至40、15至30、15至20、20至50、20至40、20至30、20至35、25至50、25至40、25至30、30至50、30至40、30至35、或40至50个氨基酸残基)。在一些实施例中，变体多肽与seq id no:3的氨基酸序列相差50、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、或1个氨基酸残基。
7、在一些实施例中，相对于seq id no:3的氨基酸序列，变体多肽进一步包含第二改变。在某些实施例中，
8、i)改变包含l580g并且第二改变包含l385g
9、ii)改变包含d509r并且第二改变包含m380r；
10、iii)改变包含l580g并且第二改变包含a512r；
11、iv)改变包含s527r并且第二改变包含c538g；
12、v)改变包含d129r并且第二改变包含p618r；或
13、vi)改变包含q514g并且第二改变包含a512r。
14、在一些实施例中，相对于seq id no:3的氨基酸序列，变体多肽进一步包含第三改变。在一些实施例中，
15、i)改变包含d535g，第二改变包含l516r，并且第三改变包含i521r；
16、ii)改变包含l516r，第二改变包含q514g，并且第三改变包含i521r；
17、iii)改变包含d509r，第二改变包含l516r，并且第三改变包含i521r；
18、iv)改变包含d535g，第二改变包含l516r，并且第三改变包含q514g；
19、v)改变包含d535g，第二改变包含q514g，并且第三改变包含i521r；
20、vi)改变包含k136g，第二改变包含n220r，并且第三改变包含m380r
21、vii)改变包含s78k，第二改变包含e198r，并且第三改变包含r354g；
22、viii)改变包含k141g，第二改变包含n220r，并且第三改变包含m380r；
23、ix)改变包含k141g，第二改变包含k240r，并且第三改变包含m380r；以及
24、x)改变包含k141g，第二改变包含d277r，并且第三改变包含m380r。
25、在一些实施例中，改变包含d535g，第二改变包含l516r，并且第三改变包含i521r。在一些实施例中，改变包含l516r，第二改变包含q514g，并且第三改变包含i521r。在一些实施例中，改变包含d509r，第二改变包含l516r，并且第三改变包含i521r。在一些实施例中，改变包含d535g，第二改变包含l516r，并且第三改变包含q514g。在一些实施例中，改变包含d535g，第二改变包含q514g，并且第三改变包含i521r。在一些实施例中，改变包含d509r，第二改变包含d535g，并且第三改变包含l516r。在一些实施例中，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种变体多肽，其中相对于SEQ ID NO:3的氨基酸序列，该变体多肽包含改变，其中该改变包含D509R、S511R、I521R、D535G、Q514G、L516R、L516G、E198R、S527R、D509K、D509G、L580G、V359R、D535K、Y381R、R354G、M380K、M380R、V383R、L580R、E367R、I521K、E367G、E507R、I521G、W350R、D535R、R528K、S527K、L385G、W350G、L516K、Y381G、H532R、D129R、P615R、G578R、M380G、V595G、R531G、D129G、R531K、D158G、N476G、G578K、A512R、P618R、V595R、V595K、V383G、A597G、Y381K、P618G、E198K、T288R、E507K、L385R、C538G、P615G、D386R、S511K、C371G、K136G、N220R、S78K、K141G、K240R、D277R、T165R、或K374R，其中该变体多肽与该SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有
2.一种变体多肽，其中相对于SEQ ID NO:3的氨基酸序列，该变体多肽包含改变，其中该改变包含D509R、S511R、I521R、D535G、Q514G、L516R、L516G、E198R、S527R、D509K、D509G、L580G、V359R、D535K、Y381R、R354G、M380K、M380R、V383R、L580R、E367R、I521K、E367G、E507R、I521G、W350R、D535R、R528K、S527K、L385G、W350G、L516K、Y381G、H532R、D129R、P615R、G578R、M380G、V595G、R531G、D129G、R531K、D158G、N476G、G578K、A512R、P618R、V595R、V595K、V383G、A597G、Y381K、P618G、E198K、T288R、E507K、L385R、C538G、P615G、D386R、S511K、或C371G、K136G、N220R、S78K、K141G、K240R、D277R、T165R、或K374R，并且其中该变体多肽与该SEQ ID NO:3的氨基酸序列相差1-20个氨基酸残基。
3.如权利要求1或2所述的变体多肽，其中该改变选自包含以下的组：
4.如权利要求1-3中任一项所述的变体多肽，其中相对于该SEQ ID NO:3的氨基酸序列，该变体多肽进一步包含第二改变。
5.如权利要求4所述的变体多肽，其中
6.如权利要求4所述的变体多肽，其中相对于该SEQ ID NO:3的氨基酸序列，该变体多肽进一步包含第三改变。
7.如权利要求6所述的变体多肽，其中
8.如权利要求6所述的变体多肽，其中该变体多肽进一步包含第四改变。
9.如权利要求8所述的变体多肽，其中该改变包含Q514G，该第二改变包含I521R，该第三改变包含L580G，并且该第四改变包含E198R。
10.如权利要求8所述的变体多肽，其中该变体多肽进一步包含第五改变。
11.如权利要求10所述的变体多肽，其中该改变包含D509R，该第二改变包含D535G，该第三改变包含L516R，该第四改变包含Q514G，并且该第五改变包含I521R。
12.如权利要求10所述的变体多肽，其中该变体多肽进一步包含第六改变，并且任选地进一步包含第七、第八、第九和第十改变。
13.如权利要求4所述的变体多肽，其中该第二改变包含取代、插入或缺失。
14.如权利要求6所述的变体多肽，其中该第三改变包含取代、插入或缺失。
15.如权利要求8所述的变体多肽，其中该第四改变包含取代、插入或缺失。
16.如权利要求10所述的变体多肽，其中该第五改变包含取代、插入或缺失。
17.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中该变体多肽能够与RNA指导物结合。
18.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中相对于SEQ ID NO 3的多肽，该变体多肽或包含该变体多肽的复合物表现出增强的酶活性和/或增强的稳定性。
19.如权利要求18所述的变体多肽，其中该增强的酶活性是增强的核酸酶活性。
20.如任一项前述权利要求所述的变体多肽，其中该变体多肽或包含该变体多肽的复合物包含相对于SEQ ID NO:3的多肽至少1.5倍、2倍、2.5倍或3倍的增强的酶活性，例...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种变体多肽，其中相对于seq id no:3的氨基酸序列，该变体多肽包含改变，其中该改变包含d509r、s511r、i521r、d535g、q514g、l516r、l516g、e198r、s527r、d509k、d509g、l580g、v359r、d535k、y381r、r354g、m380k、m380r、v383r、l580r、e367r、i521k、e367g、e507r、i521g、w350r、d535r、r528k、s527k、l385g、w350g、l516k、y381g、h532r、d129r、p615r、g578r、m380g、v595g、r531g、d129g、r531k、d158g、n476g、g578k、a512r、p618r、v595r、v595k、v383g、a597g、y381k、p618g、e198k、t288r、e507k、l385r、c538g、p615g、d386r、s511k、c371g、k136g、n220r、s78k、k141g、k240r、d277r、t165r、或k374r，其中该变体多肽与该seq id no:3的氨基酸序列具有至少90％同一性。
2.一种变体多肽，其中相对于seq id no:3的氨基酸序列，该变体多肽包含改变，其中该改变包含d509r、s511r、i521r、d535g、q514g、l516r、l516g、e198r、s527r、d509k、d509g、l580g、v359r、d535k、y381r、r354g、m380k、m380r、v383r、l580r、e367r、i521k、e367g、e507r、i521g、w350r、d535r、r528k、s527k、l385g、w350g、l516k、y381g、h532r、d129r、p615r、g578r、m380g、v595g、r531g、d129g、r531k、d158g、n476g、g578k、a512r、p618r、v595r、v595k、v383g、a597g、y381k、p618g、e198k、t288r、e507k、l385r、c538g、p615g、d386r、s511k、或c371g、k136g、n220r、s78k、k141g、k240r、d277r、t165r、或k374r，并且其中该变体多肽与该seq id no:3的氨基酸序列相差1-20个氨基酸残基。
3.如权利要求1或2所述的变体多肽，其中该改变选自包含以下的组：
4.如权利要求1-3中任一项所述的变体多肽，其中相对于该seq id no:3的氨基酸序列，该变体多肽进一步包含第二改变。
5.如权利要求4所述的变体多肽，其中
6.如权利要求4所述的变体多肽，其中相对于该seq id no:3的氨基酸序列，该变体多肽进一步包含第三改变。
7.如权利要求6所述的变体多肽，其中
8.如权利要求6所述的变体多肽，其中该变体多肽进一步包含第四改变。
9.如权利要求8所述的变体多肽，其中该改变包含q514g，该第二改变包含i521r，该第三改变包含l580g，并且该第四改变包含e198r。
10.如权利要求8所述的变体多肽，其中该变体多肽进一步包含第五改变。
11.如权利要求10所述的变体多肽，其中该改变包含d509r，该第二改变包含d535g，该第三改变包含l516r，该第四改变包含q514g，并且该第五改变包含i521r。
12.如权利要求10所述的变体多肽，其中该变体多肽进一步包含第六改变，并且任选地进一步包含第七、第八、第九和第十改变。
13.如权利要求4所述的变体多肽，其中该第二改变包含取代、插入或缺失。
14.如权利要求6所述的变体多肽，其中该第三改变包含取代、插入或缺失。
15.如权利要求8所述的变体多肽，其中该第四改变包含取代、插入或缺失。
16.如权利要求10所述的变体多肽，其中该第五改变包含取代、插入或缺失。
17.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中该变体多肽能够与rna指导物结合。
18.如前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中相对于seq id no 3的多肽，该变体多肽或包含该变体多肽的复合物表现出增强的酶活性和/或增强的稳定性。
19.如权利要求18所述的变体多肽，其中该增强的酶活性是增强的核酸酶活性。
20.如任一项前述权利要求所述的变体多肽，其中该变体多肽或包含该变体多肽的复合物包含相对于seq id no:3的多肽至少1.5倍、2倍、2.5倍或3倍的增强的酶活性，例如通过插入缺失活性测量的，例如，如实例9和10中所述。
21.如任一项前述权利要求所述的变体多肽，其中相对于亲本多肽，该变体多肽表现出增强的与该rna指导物的结合活性。
22.如任一项前述权利要求所述的变体多肽，其中相对于该亲本多肽，该变体多肽表现出增强的与该rna指导物的结合特异性。
23.如任一项前述权利要求所述的变体多肽，其中该变体多肽包含ruvc结构域或拆分型ruvc结构域。
24.如任一项前述权利要求所述的变体多肽，其中该变体多肽包含一个或多个催化残基(例如，天冬氨酸或谷氨酸)。
25.如任一项前述权利要求所述的变体多肽，其中该一个或多个催化残基包含d345和e506。
26.如权利要求1-23中任一项所述的变体多肽，其具有降低的核酸酶活性或是核酸酶失活型多肽。
27.如任一项前述权利要求所述的变体多肽或系统，其中该第二改变包含多肽结构域的插入，其中任选地该插入位于该seq id no:3的序列的n末端、c末端或内部。
28.如任一项前述权利要求所述的变体多肽，其中该变...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·重，Q·N·韦斯塞尔，R·兹布拉特，N·M·贾基莫，A·J·加里蒂，L·E·阿方斯，
申请(专利权)人：阿伯生物技术公司，
类型：发明
国别省市：
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