【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测试剂盒，具体的涉及一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒及其制备方法与应用。
技术介绍
1、血液凝固是一系列复杂的化学连锁反应过程，参与各连锁反应的多种物质组成的系统称为凝血。凝血主要分为三个阶段：凝血因子生成凝血酶；凝血酶使血液中的可溶性纤维蛋白转变成稳定性纤维蛋白网；然后吸附血红细胞、血小板形成凝血块。血液凝固作用完成后，形成的纤维蛋白被分解液化叫纤维蛋白溶解，简称纤溶。血纤维蛋白溶酶作用于纤维蛋白原或纤维蛋白，能将其多肽链的赖氨酸结合部位切断使之溶解。此凝血纤溶系统异常将导致血栓及dic疾病，弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation；dic)是许多疾病在进展过程中产生凝血功能障碍的共同途径，是一种临床病理综合征，与白血病、败血症、肿瘤等基础疾病相关，何种蛋白溶解过程(凝血或纤溶)处于优势，将在很大程度上决定临床表现的特征，导致出血、血管栓塞、休克、各脏器功能受损等病症。
2、传统凝血项目都属于血栓形成后的被动检测、晚期筛查项目，对血栓前状态、pre-dic等不敏感，同时对溶栓治疗监测未能第一时间反馈效果。纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(plasmin-α2-antiplasmin complexes；pic)直接反应纤溶酶的形成，是纤溶系统早期标志物，可第一时间、更加敏感、可靠的向临床反馈血栓的发生与形成、术后血栓与出血情况的监控、pre-dic的状态、溶栓疗效、血管内皮系统损伤等情况。目前检测的方法主要是酶联免疫吸附法
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有的缺陷，提供了一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒及其制备方法与应用。
2、为了实现以上目的及其他目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、本专利技术首先提供了一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒，其特征在于，包括纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包被链霉亲和素磁珠、标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2、校准品、清洗液、稀释液、发光底物液a、发光底物液b。将抗原抗体免疫反应、吖啶化学发光体系与链霉亲和素磁珠载体结合起来，具有灵敏度高，试剂盒操作简单，重复性和稳定性好，抗干扰能力强的特点。
4、在一实施例中，所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包被链霉亲和素磁珠通过生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与链霉亲和素磁珠偶联，所述生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与所述链霉亲和素磁珠的质量比为1：1～30：1(μg/mg)。生物素即维生素h，与链霉亲和素有较高亲和性和结合力。链霉亲和素是四聚体蛋白，可紧紧地结合四分子生物素，其结合力是已知自然界中最强的非共价作用，使得生物素化抗体具有信号放大和灵敏度增加的优点。
5、在一实施例中，所述链霉亲和素磁珠包括高分子聚合物内核和磁性纳米材料层壳。
6、在一实施例中，所述高分子聚合物内核中的高分子聚合物为聚氯乙烯、葡聚糖、聚丙烯酸、聚乙烯、聚苯乙烯、明胶和乙基纤维素中的任意一种；所述磁性纳米材料层壳中的磁性纳米材料为三氧化二铁、铁钴合金、钴铂合金和四氧化三铁中的任意一种。
7、在一实施例中，所述生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包括纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与生物素酯，所述生物素酯是nhs-biotin、nhs-lc-biotin、nhs-lc-lc-biotin中的任意一种。通过生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与链霉亲和素磁珠偶联，具有级联放大的作用。亲和力强不易裂解，能够提高试剂盒稳定和灵敏度，并且不会增加非特异性的干扰。
8、在一实施例中，所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1和所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2为单克隆抗体，所述单克隆抗体来源鼠、兔、羊或者山羊。
9、在一实施例中，所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2被发光标记物标记，所述发光标记物是吖啶类标记物nsp-dmae-nhs、dmae-nhs或者nsp-sa-nhs。nsp-sa-nhs比常规吖啶酯具有更高的发光效率，与辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶相比，发光体系更简单，无需催化反应，在碱性双氧水溶液中瞬时发光，半衰期在1s以内，省略催化反应时间，不易受到干扰，并且提高了发光效率，降低发光本底，提高了灵敏度。
10、其次，本专利技术还提供了一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒的制备方法，用于制备上述任一项所述的纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：
11、步骤s1：生物素酯标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1，
12、向纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1中加入生物素酯，反应结束后脱除游离小分子，制备获得生物素化纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1；
13、步骤s2：纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包被链霉亲和素磁珠，
14、将所述生物素化纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与链霉亲和素磁珠混合均匀，反应后制备获得纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包被链霉亲和素磁珠；
15、步骤s3：吖啶盐标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2，
16、向所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2加入吖啶盐发光标记物，反应后脱除游离小分子，制备得到吖啶标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2。
17、步骤s4：制备纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物校准品：
18、将纤溶酶和α2纤溶酶抑制物混合均匀后，加入催化剂，催化反应制备获得纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物；用校准品储存液将所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物稀释，制备获得校准品。
19、在一实施例中，所述步骤s2中的所述链霉亲和素磁珠的制备方法包括：
20、步骤s21：制备高分子聚合物内核，
21、将苯乙烯单体加入高分子聚合物溶液中，形成水相混悬液，加入聚合引发剂引发聚合反应，制备获得到高分子聚合物内核悬液。
22、步骤s2 2：制备磁性纳米材料壳层，
23、将磁性纳米材料和聚乙二醇加入乙二醇中，溶解后加入醋酸钠溶液中，反应得到磁性纳米材料磁流体混合液；将混合液和引发剂加入到所述高分子聚合物内核悬液中，制备获得纳米磁微粒。
24、步骤s23：制备链霉亲和素包被磁微粒，
25、向磁微粒混合液中加入戊二醛溶液进行表面基团修饰得到磁微粒混合液；向所述磁微粒混合液中加入链霉亲和素和交联剂引发交联反应，制备获得到链霉亲和素磁微粒。
26、在一实施例中，所述步骤s22中的所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒，其特征在于，包括纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包被链霉亲和素磁珠、标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2、校准品、清洗液、稀释液、发光底物液A、发光底物液B。
2.根据权利要求1所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒，其特征在于，所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包被链霉亲和素磁珠通过生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与链霉亲和素磁珠偶联，所述生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与所述链霉亲和素磁珠的质量比为1：1～30：1(μg/mg)。
3.根据权利要求2所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠包括高分子聚合物内核和磁性纳米材料层壳。
4.根据权利要求3所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒，其特征在于，所述高分子聚合物内核中的高分子聚合物为聚氯乙烯、葡聚糖、聚丙烯酸、聚乙烯、聚苯乙烯、明胶和乙基纤维素中的任意一种；所述磁性纳米材料层壳中的磁性纳米材料
5.根据权利要求2所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包括纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与生物素酯，所述生物素酯是NHS-Biotin、NHS-LC-Biotin、NHS-LC-LC-Biotin中的任意一种。
6.根据权利要求1所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒，其特征在于，所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1和所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2为单克隆抗体，所述单克隆抗体来源鼠、兔、羊或者山羊。
7.根据权利要求6所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒，其特征在于，所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2被发光标记物标记，所述发光标记物是吖啶类标记物NSP-DMAE-NHS、DMAE-NHS或者NSP-SA-NHS。
8.一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒的制备方法，用于制备如权利要求1～7任一项所述的纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒，其特征在于，包括：
9.根据权利要求8所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中的所述链霉亲和素磁珠的制备方法包括：
10.根据权利要求9所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤S22中的所述引发剂是氧化苯甲酰；所述步骤S23中的所述交联剂为EDC和Sulfo-NHS。
11.一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒的应用，利用如权利要求1～7任一项所述的纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)检测试剂盒检测纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(PIC)，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒，其特征在于，包括纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包被链霉亲和素磁珠、标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体2、校准品、清洗液、稀释液、发光底物液a、发光底物液b。
2.根据权利要求1所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒，其特征在于，所述纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包被链霉亲和素磁珠通过生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与链霉亲和素磁珠偶联，所述生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与所述链霉亲和素磁珠的质量比为1：1～30：1(μg/mg)。
3.根据权利要求2所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠包括高分子聚合物内核和磁性纳米材料层壳。
4.根据权利要求3所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒，其特征在于，所述高分子聚合物内核中的高分子聚合物为聚氯乙烯、葡聚糖、聚丙烯酸、聚乙烯、聚苯乙烯、明胶和乙基纤维素中的任意一种；所述磁性纳米材料层壳中的磁性纳米材料为三氧化二铁、铁钴合金、钴铂合金和四氧化三铁中的任意一种。
5.根据权利要求2所述的一种纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物(pic)检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1包括纤溶酶-α2纤溶酶抑制物复合物抗体1与生物素酯，所述生物素酯是nhs-biotin、nhs-lc-biotin、nhs-lc-l...
【专利技术属性】
技术研发人员：方旭，马丽利，邵建辉，
申请(专利权)人：成都达思嘉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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