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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及外泌体提取,具体涉及一种细胞培养基提取外泌体的方法。
技术介绍
1、目前,细胞培养基外泌体的常见的分离提取方法主要有:超速离心、免疫磁珠、超滤法或尺寸色层分析法等方法。超速离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受欢迎,但须需购买价格高昂的低温超速离心机,且回收率不稳定;此外,重复离心操作还有可能对囊泡造成损害,从而降低其质量。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点,但是磁珠价格贵,每次作用的体积小效率不高,进行大批量生产困难度高,不利生产。利用peg沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多,以及于人体使用时要将peg去除干净不易等问题。
2、近几年来,出现各种商业化的外泌体提取试剂盒,有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分,有的则采用空间排阻色谱法(sec)进行分离纯化,也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。但购买这些商用试剂盒仍面临成本高,无法大量提取的问题。现有技术中的这些方案对于从大量的细胞培养基中提取外泌体都面临需要购买贵重的高速离心设备或是滤膜管柱,成本较高。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种细胞培养基提取外泌体的方法,解决现有技术中对于从大量的细胞培养基中提取外泌体都面临需要购买贵重的高速离心设备或是滤膜管柱,成本较高的技术问题。
2、本专利技术公开了一种细胞培养基提取外泌体的方法,包括以下步骤:
3、s1.将细胞培养基溶液进行预处理得到含外泌体的细胞培养液;
< ...【技术保护点】
1.一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤S1中预处理为将细胞或是破碎的细胞器进行初步移除。
3.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤S2中初滤为过0.22-0.45μm滤膜过滤除菌。
4.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤S3中透析袋外面的透析液为高渗透压高分子溶液。
5.根据权利要求4所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述高渗透压高分子溶液为聚乙二醇、丙烯酸、CH3CONH2、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯或甲基纤维素,所述高渗透压高分子溶液的分子量为1~4K,质量浓度为50%-80%。
6.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤S3中透析时间为12-24小时透析,过程中置换透析液3~5次。
7.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤S4中二次透析的透析液为0.9
8.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤S4中二次透析的时间为12-24小时,浓缩后的滤液体积会随透析过程自动增加,体积变为110~200%,过程中置换透析液3~5次。
9.根据权利要求7所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:15-50万分子量的高分子溶液为聚乙二醇, 丙烯酸,CH3CONH2、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯或甲基纤维素的溶液。
10.根据权利要求7所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:15-50万分子量的高分子溶液溶于生理食盐水后质量浓度为10%-20%。
...【技术特征摘要】
1.一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤s1中预处理为将细胞或是破碎的细胞器进行初步移除。
3.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤s2中初滤为过0.22-0.45μm滤膜过滤除菌。
4.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤s3中透析袋外面的透析液为高渗透压高分子溶液。
5.根据权利要求4所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述高渗透压高分子溶液为聚乙二醇、丙烯酸、ch3conh2、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯或甲基纤维素,所述高渗透压高分子溶液的分子量为1~4k,质量浓度为50%-80%。
6.根据权利要求1所述的一种细胞培养基提取外泌体的方法,其特征在于:所述步骤s3...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨明嘉,李荣,王鹏,刘洪,周鼎堃,魏宇佩,刘锐,朱欣婷,田书萍,付咏雪,
申请(专利权)人:四川天府亨特生命科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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