【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学分析鉴定，尤其涉及一种基于硫代葡萄糖苷的西藏自治区高原地区芫根的鉴定方法。
技术介绍
1、芫根(brassica rapa l.)是一种药食两用植物，又被称为妞玛、芜菁、蔓菁，为十字花科芸薹属两年生草本植物。研究表明，芫根富含多糖，且钙、磷、铁等微量元素含量高，经常食用对人体有益，可用于食用、入药，以及作为饲料，有广阔的食用及药用价值。
2、硫代葡萄糖苷(glucosinolates，gls，简称硫苷)是芫根中的主要活性成分之一，其是一类含硫的次级代谢产物，硫苷可被植物中的黑芥子酶或人体肠道内的微生物降解为异硫氰酸酯、氰酸盐和腈类化合物，其中硫苷的水解产物异硫氰酸酯具有高度的生物学活性、极强的抗氧化、抗癌和抑菌功效，能够有效防止多种致癌物质引起的损伤和癌症。尤其是在高海拔(3000米以上)的西藏自治区高原地区生长的芫根较其他地区生长的芫根，次生代谢产物高，其滋补增氧、抗癌抑菌的健康功效明显优于其他地区，贩售价格也远高于其他地区。
3、然而，芫根产地众多，目前主要采用形态比较、基因测序等方法进行植物产地鉴别，前者鉴别准确度低，对鉴别人员的要求高；特别对于粉碎后的芫根粉，更是难以筛选出来自西藏自治区高原地区的芫根；后者操作复杂，检测成本较高。因此，有必要研发一种西藏自治区高原地区芫根的鉴定方法。
技术实现思路
1、本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种基于硫代葡萄糖苷的西藏自治区高原地区芫根的鉴定方法，该方法操作简单，鉴定成本低
2、本专利技术提供了一种基于硫代葡萄糖苷的西藏自治区高原地区芫根的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
3、(1)制备西藏自治区高原地区芫根的待测液，利用超高效液相色谱-串联四极杆/线性离子阱质谱联用技术进行定性分析，测定西藏自治区高原地区芫根的待测液中的化合物，对西藏自治区高原地区芫根待测液中的硫代葡萄糖苷化合物进行二级质谱分析，确定不同硫代葡萄糖苷化合物的特征碎片离子，以确定西藏自治区高原地区芫根的硫代葡萄糖苷化合物种类；
4、(2)制备其他地区芫根的待测液，将其他地区芫根的待测液进行靶向分析，与西藏自治区高原地区芫根的待测液中检测到的硫代葡萄糖苷化合物的特征离子碎片进行比对，选择西藏自治区高原地区芫根的硫代葡萄糖苷化合物中离子丰度最强的子离子片段为定量离子片段，建立不同特征硫代葡萄糖苷化合物的定量离子片段丰度与内标黑芥子硫代葡萄糖苷浓度含量的标准曲线，确定西藏自治区高原地区芫根的特征硫代葡萄糖苷化合物种类和含量，确定与其他地区芫根的区别；
5、(3)制备未知地区芫根的待测液，将未知地区待测液中含有的硫代葡萄糖苷化合物与西藏自治区高原地区芫根的特征硫代葡萄糖苷化合物的特征离子碎片中离子丰度最强的片段进行比匹配，得到未知样品中含有的西藏自治区高原地区芫根的特征硫代葡萄糖苷化合物的种类和含量，鉴定是否为西藏自治区高原地区芫根。
6、本专利技术提供的基于硫代葡萄糖苷的西藏自治区高原地区芫根的鉴定方法通过测量西藏自治区高原地区芫根中的主要物质，并利用超高效液相色谱-串联四极杆/线性离子阱质谱(uplc-qtrap-ms)联用技术进行定性分析，通过物质的母离子和特定碰撞能量下的子离子精准定性和定量，可精确检测西藏自治区高原地区芫根中的主要物质的种类和含量，检测高效、准确、灵敏。
7、进一步地，通过对比西藏自治区高原地区与其他地区芫根的主要物质，专利技术人发现了西藏自治区高原地区的特征硫代葡萄糖苷化合物，并建立了不同特征硫代葡萄糖苷化合物的不同浓度及其对应定量离子的离子丰度之间的标准曲线，利用所述特征硫代葡萄糖苷化合物可鉴定出未知地区的芫根是否为西藏自治区高原地区芫根，为西藏自治区高原地区芫根的鉴定提供了方法，该方法准确性高，灵敏度强。
8、在一些本专利技术的实施例中，所述步骤(2)中西藏自治区高原地区芫根的特征硫代葡萄糖苷化合物包括6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷、4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷、4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯、4-(甲基磺酰基)丁基硫苷、5-苯甲酸基戊基硫苷。
9、在一些本专利技术的实施例中，所述步骤(3)的鉴定方法为：将未知样品的硫苷化合物种类与西藏自治区高原地区芫根的特征硫苷化合物种类对比，若至少含有西藏自治区高原地区芫根的特征硫苷化合物中的一种，同时含量高于对应特征硫苷化合物的鉴定标准，则鉴定为西藏自治区高原地区芫根。
10、在一些本专利技术的实施例中，所述鉴定标准为：所述西藏自治区高原地区芫根中6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷的含量大于或等于0.3mg/l、4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷的含量大于或等于0.07mg/l、4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯的含量大于或等于6mg/l、4-(甲基磺酰基)丁基硫苷的含量大于或等于0.32mg/l、5-苯甲酸基戊基硫苷的含量大于或等于0.15mg/l。
11、在一些本专利技术的实施例中，所述步骤(2)中的硫代葡萄糖苷化合物的二级质谱分析条件为：正离子模式检测，6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷的碰撞电压为30±3ev，4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷的碰撞电压为33±3ev，4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯的碰撞电压为25±3ev，4-(甲基磺酰基)丁基硫苷的碰撞电压为31±3ev，5-苯甲酸基戊基硫苷的碰撞电压为33±3ev。
12、在一些本专利技术的实施例中，所述步骤(2)中的硫代葡萄糖苷化合物的特征离子对信息为：6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷的子离子碎片为45、136*、239、268，4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷的子离子碎片为67、168*、182、245，4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯的子离子碎片为103、169*、224，4-(甲基磺酰基)丁基硫苷的子离子碎片为88、192*、201，5-苯甲酸基戊基硫苷的子离子碎片为51、140*、182、250，其中，带*的子离子为定量离子。
13、在一些本专利技术的实施例中，制备芫根待测液的具体步骤为：将采集到的未知地区芫根处理后，真空干燥并粉碎，过筛得到芫根干粉，按照一定料液比例加入预冷甲醇/乙腈/水溶液涡旋混合，超声后离心分离上清液并浓缩干燥，再加入乙腈/水溶液搅拌得到未知样品待测液。
14、在一些本专利技术的实施例中，真空干燥的温度为5～15℃。
15、在一些本专利技术的实施例中，所述料液比例为1:(8～10)(w/v)。
16、在一些本专利技术的实施例中，甲醇/乙腈/水溶液比例为(1～2)：(1～2)：1(v/v/v)。
17、在一些本专利技术的实施例中，超声处理的时间为20～30min；所述乙腈/水溶液比例为(3～5)：1(v/v)。
18、通过实施上述技术方案，本专利技术具有如下的有益效果：
19、本专利技术提供的西藏自治区高原地区芫根的鉴定方法通过测量西藏自治区高原地区芫根中的主要物质，并利用超高效液相色本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于硫代葡萄糖苷的西藏自治区高原地区芫根的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中西藏自治区高原地区芫根的特征硫代葡萄糖苷化合物包括6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷、4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷、4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯、4-(甲基磺酰基)丁基硫苷、5-苯甲酸基戊基硫苷。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)的鉴定方法为：将未知样品的硫苷化合物种类与西藏自治区高原地区芫根的特征硫苷化合物种类对比，若至少含有西藏自治区高原地区芫根的特征硫苷化合物中的一种，同时含量高于对应特征硫苷化合物的鉴定标准，则鉴定为西藏自治区高原地区芫根。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述鉴定标准为：所述西藏自治区高原地区芫根中6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷的含量大于或等于0.3mg/L、4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷的含量大于或等于0.07mg/L、4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯的含量大于或等于6mg/L、4-(甲基磺酰基)丁基硫苷的含量大于
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的硫代葡萄糖苷化合物的二级质谱分析条件为：正离子模式检测，6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷的碰撞电压为30±3eV，4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷的碰撞电压为33±3eV，4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯的碰撞电压为25±3eV，4-(甲基磺酰基)丁基硫苷的碰撞电压为31±3eV，5-苯甲酸基戊基硫苷的碰撞电压为33±3eV。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的硫代葡萄糖苷化合物的特征离子对信息为：6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷的子离子碎片为45、136*、239、268，4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷的子离子碎片为67、168*、182、245，4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯的子离子碎片为103、169*、224，4-(甲基磺酰基)丁基硫苷的子离子碎片为88、192*、201，5-苯甲酸基戊基硫苷的子离子碎片为51、140*、182、250，其中，带*的子离子为定量离子。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，制备芫根待测液的具体步骤为：将采集到的芫根处理后，真空干燥并粉碎，过筛得到芫根干粉，按照一定料液比例加入预冷甲醇/乙腈/水溶液涡旋混合，超声后离心分离上清液并浓缩干燥，再加入乙腈/水溶液搅拌得到待测液。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，真空干燥的温度为5～15℃。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述料液比例为1:(8～10)(W/V)。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，甲醇/乙腈/水溶液比例为(1～2)：(1～2)：1(V/V/V)。
...【技术特征摘要】
1.一种基于硫代葡萄糖苷的西藏自治区高原地区芫根的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中西藏自治区高原地区芫根的特征硫代葡萄糖苷化合物包括6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷、4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷、4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯、4-(甲基磺酰基)丁基硫苷、5-苯甲酸基戊基硫苷。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)的鉴定方法为：将未知样品的硫苷化合物种类与西藏自治区高原地区芫根的特征硫苷化合物种类对比，若至少含有西藏自治区高原地区芫根的特征硫苷化合物中的一种，同时含量高于对应特征硫苷化合物的鉴定标准，则鉴定为西藏自治区高原地区芫根。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述鉴定标准为：所述西藏自治区高原地区芫根中6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷的含量大于或等于0.3mg/l、4-(2-胺基-3-羧基乙硫基)丁基硫苷的含量大于或等于0.07mg/l、4-羟基-3-吲哚-基甲基芥子油酸酯的含量大于或等于6mg/l、4-(甲基磺酰基)丁基硫苷的含量大于或等于0.32mg/l、5-苯甲酸基戊基硫苷的含量大于或等于0.15mg/l。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的硫代葡萄糖苷化合物的二级质谱分析条件为：正离子模式检测，6-(甲基亚磺酰基)己基硫苷的碰撞电压为30±3ev，4-(2-胺基-3-羧...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。