与人结肠癌相关的基因和多肽制造技术

本申请提供了新的人基因ＲＮＦ４３，该基因在结肠癌中的表达显著提高，本申请还提供了新的人基因ＣＸＡＤＲＬ１和ＧＣＵＤ１，与相应的非－癌组织相比，所述基因在胃癌中的表达显著提高。所述基因和由其编码的多肽可用于例如诊断细胞增殖性疾病，并用作开发针对所述疾病的药物的靶分子。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物科学领域，更具体地涉及癌症研究领域。本专利技术具体 涉及与细胞增殖机制有关的新基因i A/FW， CX4Di Z7和GCD/以及由这些 基因编码的多肽。本专利技术的基因和多肽可用于例如诊断细胞增殖性疾病， 以及用作革巴分子来开发针对所述疾病的药物。
技术介绍
胃癌和结直肠癌是世界范围内癌症死亡的诱因。尽管最近在诊断和治 疗策略方面取得了进步，但晚期癌症患者的预后仍然很差。尽管分子研究 揭示出肺瘤抑制基因和/或癌基因的改变与癌症发生有关，但其精确的机理 仍有待阐明。cDNA微阵列技术使人们能够获得正常和恶性细胞中基因表达的全面 分布图，并能比较恶性和相应正常细胞中的基因表达(Okabe et al., Cancer Res 61: 2129-37(2001); Lin et al.， Oncogene 21: 4120-8 (2002); Hasegawa et al Cancer Res 62: 7012-7(2002))。该方法能披露癌症细胞的复杂性质，并有助 于人们了解癌症发生的机理。鉴定出肺瘤中的失控基因能够更准确地诊断 个体癌症，并可开发新的治疗靶(Bienz and Clevers， Cell 103: 311-20(2000))。为了从整个基因组的角度揭示肿瘤发生的机理，并且找出用于 诊断和新型治疗药开发的靶分子，本专利技术人使用23040个基因的的cDNA微 阵列来分析肿瘤细胞的基因表达分布图(Okabe et al., Cancer Res 61: 2129-37(2001); Kitahara et al Cancer Res 61: 3544-9(2001); Lin et al Oncogene 21: 4120-8(2002); Hasegawa et al,， Cancer Res 62: 7012-7(2002))。被设计用于揭示癌症发生机理的研究推动了抗-肿瘤药剂分子靶的鉴 定。例如，最初被开发用于抑制与Ras有关的生长-信号传导途径、其激活 依赖于翻译后法尼基化的法尼基转移酶抑制剂(FTI)能在动物模型中有效治8疗Ras-依赖型肺瘤(He et al.， Cell 99: 335-45(1999))。联合使用抗癌药物和 抗-HER2单克隆抗体trastuzumab对人进行了临床试验，以抵销原癌基因受 体HER2/neu的作用；在乳腺癌患者身上已获得改善的临床反应和整体存活 率(Lin et al Cancer Res 61: 6345-9(2001))。选择性失活bcr-abl融合蛋白的 酪氨酸激酶抑制剂STI-571被开发用于治疗慢性骨髓性白血病，其中bcr-abl 酪氨酸激酶的组成型激活对白细胞转化起决定性作用。这些类型的药剂4史 设计用于抑制特定基因产物的致癌活性(Fujita et al.， Cancer Res 61: 7722-6(2001))。因此，通常在癌细胞中^L上调的基因产物可用作开发新抗癌药 剂所用的潜在靶。已阐明CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)能识别MHC I类分子上呈递的肿 瘤-相关抗原(TAA)所衍生的表位肽，并能裂解肿瘤细胞。由于MAGE家族 是作为第一例TAA被发现的，因此，使用免疫学方法已发现了多种其它的 TAA (Boon, Int J Cancer 54: 177-80(1993); Boon and van der Bruggen, J Exp Med 183: 725-9(1996); van der Bruggen et al.， Science 254: 1643-7(1991); Brichard et al., J Exp Med 178: 489-95(1993); Kawakami et al., J Exp Med 180: 347-52 (1994))。目前， 一些已发现的TAA作为免疫治疗的靶正处于临床研 发阶段。迄今为止已发现的TAA包括MAGE(van der Bruggen et al Science 254: 1643-7 (1991)) 、 gplOO(Kawakami et al., J Exp Med 180: 347-52 (1994》、SART (Shichijo et al J Exp Med 187: 277-88 (1998))和NY-ESO-l(Chen et al., Proc Natl Acad Sci USA 94: 1914-8 (1997))。另 一方面，已证实 在胂瘤细胞中特异性过表达的基因产物能作为诱导细胞免疫应答的靶被识 别。所述基因产物包括p53(Umano et al., Brit J Cancer 84: 1052-7(2001))、 HER2/neu(Tanaka et al., Brit J Cancer 84: 94-9(2001))、 CEA(Nukaya et al., Int JCancer80:92-7(1999))等。尽管已在与TAA有关的基础和临床研究中取得了显著进步(Rosenbeg et al., Nature Med 4: 321-7(1998); Mukherji et al Proc Natl Acad Sci USA 92: 8078-82(1995); Hu et al Cancer Res 56: 2479-83(1996))，但仅有少量候选 TAA可用于治疗腺癌，包括结直肠癌。能在癌细胞中大量表达，同时其表 达也仅局限于癌细胞的TAA是理想的免疫治疗候选靶。另外，鉴定能诱导 强有力的特异性抗肿瘤免疫应答的新TAA有望促进肽免疫策略在多种类型 的癌症中的临床使用(Boon and can der Bruggen， J Exp Med 183: 725-9(1996);van der Bruggen et al Science 254: 1643-7(1991》Brichard et al J Exp Med 178: 489-95(1993); Kawakami et alJ Exp Med 180: 347-52(1994); Shichijo et al., J Exp Med 187: 277-88(1998); Chen et al., Proc Natl Acad Sci USA 94: 1914-8 (1997); Harris, J Natl Cancer Inst 88: 1442-5(1996); Butterfield et al Cancer Res 59: 3134-42(1999); Vissers et al Cancer Res 59: 5554-9(1999); van der Burg et al J Immunol 156: 3308-14(1996); Tanaka et al., Cancer Res 57: 4465-8(1997); Fujie et al., Int J Cancer 80: 169-72(1999); Kikuchi et al., Int J Cancer 81: 459-66(1999); Oiso et al., Int J Cancer本文档来自技高网...

【技术保护点】
选自下列的基本上纯的多肽：　（ａ）多肽，其含有氨基酸序列ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２，４或６；　（ｂ）多肽，其含有氨基酸序列ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２，４或６且其中的一个或多个氨基酸被取代、缺失、插入和／或添加，并且所述多肽具有与 由氨基酸序列ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２，４或６组成的蛋白质等同的生物活性；和　（ｃ）多肽，其由能在严紧条件下与由核苷酸序列ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１，３或５组成的多核苷酸杂交的多核苷酸编码，其中所述多肽具有与由ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： ２，４或６中任一氨基酸序列组成的多肽等同的生物活性。

【技术特征摘要】
US 2002-6-6 60/386,985;US 2002-9-30 60/415,209;US 1.选自下列的基本上纯的多肽(a)多肽，其含有氨基酸序列SEQ ID NO2，4或6；(b)多肽，其含有氨基酸序列SEQ ID NO2，4或6且其中的一个或多个氨基酸被取代、缺失、插入和/或添加，并且所述多肽具有与由氨基酸序列SEQ ID NO2，4或6组成的蛋白质等同的生物活性；和(c)多肽，其由能在严紧条件下与由核苷酸序列SEQ ID NO1，3或5组成的多核苷酸杂交的多核苷酸编码，其中所述多肽具有与由SEQ ID NO2，4或6中任一氨基酸序列组成的多肽等同的生物活性。2. 分离的多核苷酸，其编码权利要求l的多肽。3. 载体，其含有权利要求2的多核苷酸。4. 宿主细胞，其携有权利要求2的多核苷酸或权利要求3的载体。5. 产生权利要求l的多肽的方法，所述方法包括下述步骤(a) 培养权利要求4的宿主细胞；(b) 使宿主细胞表达所述多肽；和(c) 收集所表达的多肽。6. 抗体，其与权利要求l的多肽结合。7. 多核苷酸，它与权利要求2的多核苷酸或其互补链互补，并且含有 至少15个核芬酸。8. 反义多核苷酸或小的干扰RNA,其针对权利要求2的多核香酸。9. 权利要求8的反义多核苷酸，其选自含有核苷酸序列SEQIDNO:23: 25,27, 29或31的核苷酸。10. 权利要求8的小的干扰RNA,其有义链选自含有核苦酸序列SEQ ID NO: 112, 113和114的核苷酸。11. -诊断细胞增殖性疾病的方法，所述方法包括下述步骤(a) ;险测样本的生物样品中编码氨基酸序列SEQ ID NO: 2, 4或6的基因 的表达水平；和(b) 将对表达水平的评价与疾病相关联。12. 权利要求ll的方法，其用选自下列的任一种方法检测表达水平 (a)检测编码氨基酸序列SEQ ID NO: 2, 4或6的mRNA;(b) 检测含有氨基酸序列SEQ ID NO: 2, 4或6的蛋白质；和(c) 检测含有氨基酸序列SEQ ID NO: 2, 4或6的蛋白质的生物活性。13. 筛选治疗细胞增殖性疾病的化合物的方法，包括下述步骤(a) 使受试化合物与选自下列的多肽接触(1) 多肽，其含有氨基酸序列SEQIDNO:2，4或6;(2) 多肽，其含有氨基酸序列SEQ ID NO: 2, 4或6且其中的一个或多个 氨基酸被取代、缺失、插入和/或添加，并且所述多肽具有与由氨基酸序列 SEQIDNO: 2, 4或6组成的蛋白质等同的生物活性；和(3) 多肽，其由能在严紧条件下与由核苷酸序列SEQ ID NO: 1, 3或5组 成的多核苷酸杂交的多核苷酸编码，其中所述多肽具有与由氨基酸序列 SEQ ID NO: 2, 4或6组成的多肽等同的生物活性；(b) 检测所述多肽与受试化合物之间的结合活性；和(c) 选择与所述多肽结合的化合物。14. 筛选治疗细胞增殖性疾病的化合物的方法，包括下述步骤(a) 使候选化合物与表达一或多种由核苦酸序列SEQ ID NO: 1, 3或5组 成的多核苷酸的细胞接触；和(b) 选择与缺乏受试化合物时检测到的表达水平相比，能降低一或多种 由核苷酸序列SEQIDNO: 1, 3或5组成的多核苷酸的表达水平的化合物。15. 筛选治疗细胞增殖性疾病的化合物的方法，包括下述步骤(a) 使受试化合物与选自下列的多肽接触(1) 多肽，其含有氨基酸序列SEQIDNO:2，4或6;(2) 多肽，其含有氨基酸序列SEQ ID NO: 2， 4或6且其中的一个或多个 氨基酸被取代、缺失、插入和/或添加，并且所述多肽具有与由氨基酸序列 SEQIDNO: 2， 4或6组成的蛋白质等同的生物活性；和(3) 多肽，其由能在严紧条件下与由核普酸序列SEQ ID NO: 1， 3或5组 成的多核苷酸杂交的多核普酸编码，其中所述多肽具有与由氨基酸序列 SEQ ID NO: 2， 4或6组成的多肽等同的生物活性；(b) 检测步骤(a)的多肽的生物活性；和(c) 选择与缺乏受试化合物时^r测到的生物活性相比，能抑制所述多肽 生物活性的化合物。16. 权利要求15的方法，其中生物活性是细胞-增殖活性。17. 筛选治疗细胞增殖性疾病的化合物的方法，包括下述步骤(a) 在受试化合物的存在下，使选自下列的多肽与AIP1接触(1) 多肽，其含有氨基酸序列SEQIDNO:2;(2) 多肽，其含有氨基酸序列SEQ ID NO: 2且其中的一个或多个氨基酸 被取代、缺失、插入和/或添加，并且所述多肽具有与由氨基酸序列SEQID NO:2组成的蛋白质等同的生物活性；和(3) 多肽，其由能在严紧条件下与由核苷酸序列SEQIDNO: l组成的多 核苷酸杂交的多核苷酸编码，其中所述多肽具有与由氨基酸序列SEQ ID NO: 2组成的多肽等同的生物活性；(b) 检测所述多肽与AIPl之间的结合；和(c) 选择能抑制所逸多肽与AIP1之间的结合的受试化合物。18. 筛选治疗细胞增殖性疾病的化合物的方法，包括下述步骤(a) 在受试化合物存在的条件下，使选自下列的多肽与NOTCH2或 STRIN接触(1) 多肽，其含有氨基酸序列SEQIDNO:6;(2) 多肽，其含有氨基酸序列SEQIDNO: 6且其中的一个或多个氨基酸 被取代、缺失、插入和/或添加，并且所述多肽具有与由氨基酸序列SEQID NO:6组成的蛋白质等同的生物活性；和(3) 多肽，其由能在严紧条件下与由核苷酸序列SEQ ID NO: 5组成的多 核香酸杂交的多核苷酸编码，其中所述多肽具有与由氨基酸序列SEQ ID NO: 6组成的多肽等同的生物活性；(b) 检测多肽与NOTCH2或STRIN之间的结合；和(c) 选择能抑制多肽与NOTCH2或STRIN之间的结合的受试化合物。19. 筛选治疗细胞增殖性疾病的化合物的方法，包括下述步骤a) 使候选化合物与已导入载体的细胞接触，所述载体含有一或多种标 记基因的转录调节区和在转录调节区控制之下表达的报道基因，其中 一或 多种标记基因含有选自SEQ ID NO: 1, 3或5任一的核苷酸序列，b) 测定所述报道基因的活性；和c) 选择与对照相比能降低所述才艮道基因的表达水平的化合物。20. 权利要求11至19中任一项的方法，其中细胞-增殖性疾病是癌症。21...

【专利技术属性】
技术研发人员：中村佑辅，古川洋一，田原秀晃，角田卓也，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]