【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗生素检测领域，具体涉及一种用孔雀石绿检测卡那霉素含量的荧光分析法。
技术介绍
1、硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate)属于氨基糖苷类抗感染药物，它具有水溶性好、抗菌谱广、细菌耐药性低、血浆蛋白结合率低、使用方便和价格便宜的优点，因此被广泛应用于畜禽养殖业中。随着卡那霉素使用量的逐年递增，其产生的危害也逐渐受到人们的关注。卡那霉素的滥用会对人体产生极大危害，诸如引起细胞毒性，肾毒性和耐药性等，被认为是最具毒性的抗生素污染之一。世界各国对蜂蜜等动物源性食品中的卡那霉素均规定了最大允许残留量。因此，建立简单、灵敏和高特异性的卡那霉素检测方法尤为必要。目前，卡那霉素残留的检测方法主要有高效液相色谱法(hplc)、液相色谱串联质谱法(lc-ms/ms)和超高效液相色谱串联质谱法(uplc-ms/ms)。
2、虽然这些仪器检测法灵敏度高，选择性好，然而其检测成本高，操作复杂，需要专人检测；此外，对实际样品的预处理步骤繁琐，耗时较长，这对仪器分析法的应用也存在一定制约。另外一种常用的方法是免疫法，这种方法具有操作简单，灵敏度高的优点，但是抗体制备存在技术难度大、稳定性差等问题，而且检测结果容易出现假阳性。
3、核酸适配体是能特异性识别目标的单链寡核苷酸，以它为基础的分析方法因同时满足简单快速、高灵敏度、高特异性的检测要求，引起了研究者们的重视。光学生物传感器利用被测物质与探测试剂反应后引发的光信号为基础进行检测，具有简单、高灵敏度、快速响应的优点，在生物医学和食品检测领域得到了广泛的应用。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术使用较廉价的孔雀石绿为荧光探针，以核酸适配体为识别元件，建立了一种检测卡那霉素含量的荧光分析法。该方法不但具有良好的特异性，还有成本低、灵敏度极高和毒性低的优点，可应用于实际样品中卡那霉素含量的检测。
2、为实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案来实现：
3、一种用孔雀石绿检测卡那霉素含量的荧光分析法，所述分析法是以孔雀石绿为荧光探针，以卡那霉素核酸适配体为识别元件，建立的一种检测卡那霉素含量的荧光分析法。
4、进一步地，所述卡那霉素核酸适配体的序列为5’-tgggggttgaggctaagccga-3’。
5、一种如上所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，包括以下步骤：
6、(1)在卡那霉素核酸适配体溶液中加入孔雀石绿溶液，进行混悬反应；
7、(2)再加入待测样品，进行混悬反应；
8、(3)反应结束后，测定溶液荧光值。
9、进一步地，步骤(1)中所述卡那霉素核酸适配体溶液浓度范围为2.0～15.0μmol/l；所述孔雀石绿溶液浓度范围为2.0～20μmol/l。
10、进一步地，步骤(1)中所述卡那霉素核酸适配体溶液与孔雀石绿溶液的摩尔比为1:2。
11、进一步地，步骤(1)中所述混悬反应时间为40min，反应条件为25℃，650rpm。
12、进一步地，步骤(2)中混悬反应时间为20min，反应条件为25℃，650rpm。
13、进一步地，步骤(3)中测定溶液荧光值的基本参数为：600nm处为激发光波长，619～850nm范围处为发射波长，激发和发射宽带均为10nm，灵敏度为高。
14、一种如上所述的荧光分析法在检测卡那霉素含量中的应用。
15、与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
16、1.本专利技术选用的孔雀石绿本身可发出微弱荧光，在孔雀石绿溶液中加入卡那霉素适配体后，其适配体将孔雀石绿保护起来，从而使荧光信号得到一定程度的增强。
17、2.在添加卡那霉素后，卡那霉素会引起适配体和卡那霉素的选择性结合，从而形成发卡结构，适配体会保护孔雀石绿，使得荧光信号得到极大增强。
18、3.本专利技术可用于卡那霉素检测卡那霉素的含量，也可用于卡那霉素的定量分析。
19、4.本专利技术方法具有良好的特异性，且该方法成本低、灵敏度极高、有良好的选择性、毒性低。
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1.一种用孔雀石绿检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，所述分析法是以孔雀石绿为荧光探针，以卡那霉素核酸适配体为识别元件，建立的一种检测卡那霉素含量的荧光分析法。
2.根据权利要求1所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，所述卡那霉素核酸适配体的序列为5’-TGGGGGTTGAGGCTAAGCCGA-3’。
3.一种如权利要求1所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，步骤(1)中所述卡那霉素核酸适配体溶液浓度范围为2.0～15.0μmol/L；所述孔雀石绿溶液浓度范围为2.0～20μmol/L。
5.根据权利要求3所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，步骤(1)中所述卡那霉素核酸适配体溶液与孔雀石绿溶液的摩尔比为1:2。
6.根据权利要求3所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，步骤(1)中所述混悬反应时间为40min，反应条件为25℃，650rpm。
7.根据权利要求3所述的检测卡那霉素含
8.根据权利要求3所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，步骤(3)中测定溶液荧光值的基本参数为：600nm处为激发光波长，619～850nm范围处为发射波长，激发和发射宽带均为10nm，灵敏度为高。
9.一种如权利要求1所述的荧光分析法在检测卡那霉素含量中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用孔雀石绿检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，所述分析法是以孔雀石绿为荧光探针，以卡那霉素核酸适配体为识别元件，建立的一种检测卡那霉素含量的荧光分析法。
2.根据权利要求1所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，所述卡那霉素核酸适配体的序列为5’-tgggggttgaggctaagccga-3’。
3.一种如权利要求1所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的检测卡那霉素含量的荧光分析法，其特征在于，步骤(1)中所述卡那霉素核酸适配体溶液浓度范围为2.0～15.0μmol/l；所述孔雀石绿溶液浓度范围为2.0～20μmol/l。
5.根据权利要求3所述的检测卡那霉素含量的荧...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭丽敏，高仕超，靳雅柯，任蕾，庞维荣，
申请(专利权)人：山西中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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