【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物发酵，尤其涉及一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基及培养方法。
技术介绍
1、玻璃酸钠是葡萄糖醛酸和n-乙酰氨基葡萄糖的双糖重复单元连接构成的直链高分子粘多糖，广泛存在于人与动物的链球菌间质、眼玻璃体、脐带、皮肤、关节滑液及雄鸡冠等软结缔组织中。
2、玻璃酸钠的制备方法主要包括提取法和发酵法两种，其中提取法指的是从动物体组织中直接提取，发酵法指的是通过微生物菌种发酵生产。由于动物体原料有限、难于收集处理、价格高昂且分离过程复杂，随着玻璃酸钠应用范围的不断扩大，提取法获得的玻璃酸钠已经不能满足医药行业的生产需求。
3、发酵法虽然克服了提取法原料有限、成本高、分离过程复杂的缺陷，但想要制备高质量的玻璃酸钠仍需要对发酵过程中的条件进行控制。种子液培养阶段是玻璃酸钠发酵生产的一个重要环节，种子液中的微量元素的含量会影响菌体浓度从而直接影响到玻璃酸钠的产量，而微量元素添加的多少会影响玻璃酸钠下游提取技术，从而间接影响玻璃酸钠产品的质量。
4、如中国专利，公告号cn113151380b，公告的一种提高乳酸链球菌素效价的培养工艺，包括以下步骤：发酵培养基中加入一定浓度的cacl2，用ca(oh)2调节ph至7.0-7.2，消毒结束后接入种子液，在发酵过程中通过流加液碱控制发酵液ph6.0-6.3，同时在对数生长初期乳酸链球菌素的合成启动后，变速流加葡萄糖和玉米浆，发酵20-30h结束。通过添加少量cacl2，解除乳酸抑制的同时，根据菌体生长和产物合成特性变速流加促进菌体生长和产素的合适补料配
5、但仅流加葡萄糖和玉米浆作为营养源，流加碱液控制ph，容易造成营养不均衡，影响链球菌的生长，导致代谢产物异常积累，仅流加葡萄糖的代谢会产生有机酸，导致ph下降，使得控制ph变得困难，流加碱液用量计算变得困难，导致最终产品质量难以控制。
技术实现思路
1、本申请实施例通过提供一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基及培养方法，解决了现有技术中仅流加葡萄糖和玉米浆作为营养源，导致的产品质量难以控制的问题，实现了更加全面的营养供给，减少副产物的产生，提高产品质量。
2、本申请实施例提供了一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其成分包括葡萄糖50-100g/l，酵母粉20-40g/l，硫酸镁1-5g/l，磷酸二氢钠1-4g/l，微量元素4×10-3-5×10-3g/l；
3、其中，微量元素包括cu、mn、zn、ca中的任何一种或至少两种的组合；
4、cu由cuso4·5h2o提供，mn由mnso4提供，zn由zncl2提供，ca由cacl2提供。
5、进一步的，所述培养基的制备方法为：
6、s1、将葡萄糖、酵母粉加入到水中，在25℃下搅拌直至获得均匀的混合液；
7、s2、向混合液中加入硫酸镁，磷酸二氢钠和微量元素，搅拌直至获得均匀的混合液，得到链球菌培养基。
8、进一步的，所述培养基ph为7.0-7.5。
9、进一步的，其成分具体为葡萄糖70g/l，酵母粉32.5g/l，硫酸镁3g/l，磷酸二氢钠2.5g/l，微量元素；
10、其中，微量元素包括cuso4·5h2o 5.12×10-5g/l，mnso4 4.785×10-4g/l，zncl21.235×10-4g/l，cacl2 3.8×10-3g/l。
11、进一步的，所述培养基ph具体为7.5。
12、进一步的，所述培养方法为：
13、s3、将玻璃酸钠链球菌接种到培养基中摇床培养，培养条件为：36-38℃，摇床转速200rpm下培养16-18h；
14、s4、流加培养。
15、进一步的，所述的步骤s4具体为：
16、封闭摇床培养的同时流加各类营养物质与微量元素，具体发酵3h后补加50％葡萄糖，葡萄糖补加速率：在3-8h时添加速度为6.0ml/l/h，在8-12h时添加速度为2.5ml/l/h，在12-发酵结束时添加速度为1ml/l/h；
17、微量元素中cuso4·5h2o发酵3-8h补加速度为0.2×10-5g/l/h-0.5×10-5g/l/h，在8-12h时添加速度为0.3×10-5g/l/h-0.7×10-5g/l/h，在12-发酵结束时添加速度为0.5×10-5g/l/h-1×10-5g/l/h；
18、mnso4发酵3-8h补加速度为2.2×10-4g/l/h-3.5×10-4g/l/h，在8-12h时添加速度为1.5×10-4g/l/h-2.4×10-4g/l/h，在12-发酵结束时添加速度为0.8×10-4g/l/h-1.5×10-4g/l/h；
19、zncl2发酵3-8h补加速度为2.4×10-5g/l/h-5.7×10-5g/l/h，在8-12h时添加速度为1.5×10-5g/l/h-3.8×10-5g/l/h，在12-发酵结束时添加速度为0.8×10-5g/l/h-1.8×10-5g/l/h；
20、cacl2发酵3-8h补加速度为0.3×10-3g/l/h-0.6×10-3g/l/h，在8-12h时添加速度为0.8×10-3g/l/h-1.6×10-3g/l/h，在12-发酵结束时添加速度为1.9×10-3g/l/h-3.8×10-3g/l/h。
21、进一步的，所述步骤s4中，通过非稳态脉冲式流加的方法，每添加30min的营养物质与微量元素停止添加15min。
22、进一步的，所述的步骤s4后添加步骤s5：
23、s5、将培养结束后的链球菌与其使用的培养基均分为5份，补充等体积葡萄糖持续培养4h，后停止培养并收获链球菌细胞及其产生的透明质酸钠。
24、进一步的，发酵3h后，通过ca(oh)2调节ph，使ph不低于6.5。
25、本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
26、其一、通过向培养基中添加本专利技术提供金属微量元素离子，利用链球菌对金属离子的吸附作用及金属离子对微生物生长代谢的重要作用，提升菌体浓度，既缩短了种子培养周期降低风险又合理使用了金属离子微量元素为下游提取减少难度；mnso4、zncl2的添加量逐渐减少，cuso4·5h2o、cacl2添加量逐渐增加，mnso4、zncl2可以促进链球菌增殖，在前期添加量多在前期链球菌增殖速度加快，有助于前期快速扩增；cuso4·5h2o、cacl2可以降低链球菌死亡，后期增加可以降低链球菌的死亡，提高培养的质量，且避免同时加入大量锌和铜的拮抗作用。
27、其二、在发酵过程中，根据链球菌的生长阶段和代谢需求，分段补加葡萄糖和微量元素。这种策略可以本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，其成分包括葡萄糖50-100g/L，酵母粉20-40g/L，硫酸镁1-5g/L，磷酸二氢钠1-4g/L，微量元素4×10-3-5×10-3g/L；
2.如权利要求1所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，所述培养基的制备方法为：
3.如权利要求1所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，所述培养基pH为7.0-7.5。
4.如权利要求1所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，其成分具体为葡萄糖70g/L，酵母粉32.5g/L，硫酸镁3g/L，磷酸二氢钠2.5g/L，微量元素；
5.如权利要求3所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，所述培养基pH具体为7.5。
6.一种药用级透明质酸钠的链球菌培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.如权利要求6所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养方法，其特征在于，步骤S4具体为：
8.如权利要求7所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养方法，其特征在于，所述
9.如权利要求8所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养方法，其特征在于，还包括以下步骤：
10.如权利要求6所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养方法，其特征在于，发酵3h后，通过Ca(OH)2调节pH，使pH不低于6.5。
...【技术特征摘要】
1.一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，其成分包括葡萄糖50-100g/l，酵母粉20-40g/l，硫酸镁1-5g/l，磷酸二氢钠1-4g/l，微量元素4×10-3-5×10-3g/l；
2.如权利要求1所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，所述培养基的制备方法为：
3.如权利要求1所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，所述培养基ph为7.0-7.5。
4.如权利要求1所述的一种药用级透明质酸钠的链球菌培养基，其特征在于，其成分具体为葡萄糖70g/l，酵母粉32.5g/l，硫酸镁3g/l，磷酸二氢钠2.5g/l，微量元素；
5.如权利要求3所述的一种药用级透明质酸钠的链球...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘守垒，何斌，惠吉阳，秦会利，王海泉，张朋，赵鹏，解增朋，万华伟，冯展谱，苗为超，郑成红，卢滢滢，郭玲，王志成，
申请(专利权)人：山东众山生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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