【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析检测，尤其涉及一种检测血清中类固醇激素的试剂盒及其应用。
技术介绍
1、荷尔蒙(hormone)又称激素，是指体内的某一细胞、腺体或器官所产生的可以影响机体内其他细胞活动的化学物质，仅需很小剂量的荷尔蒙便可以改变细胞的新陈代谢。类固醇激素又称甾体激素，由性腺及肾上腺分泌，包括雄性激素、雌性激素和肾上腺皮质素，其分泌极其微量，并且随年龄、性别的不同而异，一般在nmol/l和pmol/l数量级，但其作用极为重要，在维持生命、生长发育、生育、炎症、肿瘤发生和情绪控制等方面具有广泛的调节作用。人体的内分泌系统分泌各种荷尔蒙，和神经系统一起调节人体的代谢和生理功能。正常情况下各种荷尔蒙处于平衡状态，如因某种原因使这种平衡被打破而造成内分泌紊乱，就会对身体和精神造成不良影响，甚至危及生命，因此临床上将测定类固醇激素水平作为很多疾病的诊断参考指标。
2、对于体内类固醇激素的超微量、高灵敏度、精确定量检测，近年来国际上首选液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry，lc-ms/ms)。其中，待测样本中的磷脂含量会显著地影响到液相色谱-串联质谱法检测的准确度及灵敏度。
3、现有技术中，cn 111398446 a提供了一种超高效液相色谱-串联质谱技术检测血清中12种类固醇激素的方法，但是其前处理采用液相萃取的方式，杂质去除不够干净，而且萃取后的上清液体积多，需要花费较长的氮吹时间才能够吹干样品，前处理时间较长不适合临床上对于大批量样本
技术实现思路
1、为解决上述现有技术的不足，特提出本专利技术。
2、首先，本专利技术提供了一种检测血清中类固醇激素的试剂盒，包括：
3、淋洗液a，其为含有氨水的甲醇水溶液；其中，氨水占淋洗液a的体积百分比为0.1％～0.15％，甲醇占淋洗液a的体积百分比为30％～40％；
4、淋洗液b，其为含有甲酸的甲醇水溶液；其中，甲酸占淋洗液b的体积百分比为0.1％～0.15％，甲醇占淋洗液b的体积百分比为30％～40％；
5、以及洗脱液c，其为乙腈甲醇溶液；其中，乙腈占洗脱液c的体积百分比为80％～85％。
6、本专利技术通过对淋洗液和洗脱液组合的大量摸索尝试后发现，采用上述特定浓度的淋洗液a、淋洗液b以及洗脱液c配合pep板进行固相萃取血清样本时，能够使得进入液相色谱的待测样本中的磷脂含量大幅降低，同时对于皮质醇(cor)、睾酮(t)、17-α羟孕酮(17-ohp)、双氢睾酮(dht)、雄烯二酮(a4)、脱氢表雄酮(dhea)、硫酸脱氢表雄酮(dheas)这7种类固醇激素的富集效果好，从而显著提高样本的测试准确度以及灵敏度。
7、优选地，所述淋洗液a中，氨水占淋洗液a的体积百分比为0.1％～0.12％，甲醇占淋洗液a的体积百分比为32％～38％。
8、优选地，所述淋洗液b中，甲酸占淋洗液b的体积百分比为0.1％～0.12％，甲醇占淋洗液b的体积百分比为32％～38％。
9、优选地，所述洗脱液c中，乙腈占洗脱液c的体积百分比为82％～85％。
10、采用上述含量的两种淋洗液淋洗pep板，对于磷脂的去除效果更佳；采用上述含量的洗脱液c洗脱，对于上述7种类固醇激素的富集效果更佳。
11、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括：
12、内标萃取液，其中包含目标浓度为2～6ng/ml的睾酮氘代物、800～1200ng/ml的硫酸脱氢表雄酮氘代物、5～15ng/ml的17-α羟孕酮氘代物、15～25ng/ml的双氢睾酮氘代物、5～15ng/ml的雄烯二酮氘代物、5～15ng/ml的皮质醇氘代物以及120～180ng/ml的脱氢表雄酮氘代物；所述内标萃取液的溶剂为甲醇。
13、优选地，所述睾酮氘代物为t-d3、硫酸脱氢表雄酮氘代物为dheas-d6、17-α羟孕酮氘代物为17-ohp-d8、双氢睾酮氘代物为dht-d4、雄烯二酮氘代物为a4-d7、皮质醇氘代物为cor-d4、脱氢表雄酮氘代物为dhea-d6。
14、在一些实施方案中，所述试剂盒还包括：校准品和/或质控品；所述校准品和/或质控品的溶剂为bsa水溶液。
15、优选地，溶剂为0.4％～0.6％bsa水溶液。
16、在一些实施方案中，所述校准品包括校准品c1～c6；
17、c1中包含目标浓度为0.05～0.1ng/ml的睾酮、40～60ng/ml的硫酸脱氢表雄酮、0.15～0.25ng/ml的17-α羟孕酮、0.3～0.5ng/ml的双氢睾酮、0.05～0.12ng/ml的雄烯二酮、3～5ng/ml的皮质醇以及3～5ng/ml的脱氢表雄酮；
18、c2中包含目标浓度为0.12～0.2ng/ml的睾酮、80～120ng/ml的硫酸脱氢表雄酮、0.3～0.6ng/ml的17-α羟孕酮、0.6～1ng/ml的双氢睾酮、0.15～0.3ng/ml的雄烯二酮、6～12ng/ml的皮质醇以及6～12ng/ml的脱氢表雄酮；
19、c3中包含目标浓度为0.3～0.6ng/ml的睾酮、200～300ng/ml的硫酸脱氢表雄酮、0.8～1.5ng/ml的17-α羟孕酮、1.5～3ng/ml的双氢睾酮、0.4～0.8ng/ml的雄烯二酮、15～25ng/ml的皮质醇以及15～25ng/ml的脱氢表雄酮；
20、c4中包含目标浓度为0.8～1.5ng/ml的睾酮、600～650ng/ml的硫酸脱氢表雄酮、2～3ng/ml的17-α羟孕酮、4～8ng/ml的双氢睾酮、1～3ng/ml的雄烯二酮、40～80ng/ml的皮质醇以及40～80ng/ml的脱氢表雄酮；
21、c5中包含目标浓度为2～5ng/ml的睾酮、2000～3000ng/ml的硫酸脱氢表雄酮、8～15ng/ml的17-α羟孕酮、15～25ng/ml的双氢睾酮、4～6ng/ml的雄烯二酮、150～250ng/ml的皮质醇以及150～250ng/ml的脱氢表雄酮；
22、c6中包含目标浓度为6～10ng/ml的睾酮、4000～6000ng/ml的硫酸脱氢表雄酮、18～25ng/ml的17-α羟孕酮、30～50ng/ml的双氢睾酮、8～15ng/ml的雄烯二酮、300～500ng/ml的皮质醇以及300～500ng/ml的脱氢表雄酮。
23、在一些实施方案中，所述质控品包括质控品q1～q3；
24、q1中包含目标浓度为0.2～0.5ng/ml的睾酮、100～200ng/ml的硫酸脱氢表雄酮、0.5～2ng/ml的17-α羟孕酮、0.8～2ng/ml的双氢睾酮、0.1～1ng/ml的雄烯二酮、8～20ng/ml的皮质醇以及8～20ng/m本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测血清中类固醇激素的试剂盒，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述睾酮氘代物为T-d3、硫酸脱氢表雄酮氘代物为DHEAS-d6、17-α羟孕酮氘代物为17-OHP-d8、双氢睾酮氘代物为DHT-d4、雄烯二酮氘代物为A4-d7、皮质醇氘代物为COR-d4、脱氢表雄酮氘代物为DHEA-d6。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：校准品和/或质控品；所述校准品和/或质控品的溶剂为BSA水溶液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品包括校准品C1～C6；
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述质控品包括质控品Q1～Q3；
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括流动相添加剂；所述流动相添加剂为浓度为0.03～0.08mM的氟化铵水溶液。
9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括洗针液；所述洗
10.权利要求1～9中任一项所述的试剂盒在液相色谱-串联质谱法检测血清中类固醇激素中的应用；
...【技术特征摘要】
1.一种检测血清中类固醇激素的试剂盒，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述睾酮氘代物为t-d3、硫酸脱氢表雄酮氘代物为dheas-d6、17-α羟孕酮氘代物为17-ohp-d8、双氢睾酮氘代物为dht-d4、雄烯二酮氘代物为a4-d7、皮质醇氘代物为cor-d4、脱氢表雄酮氘代物为dhea-d6。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：校准品和/或质控品；所述校准品和/或质控品...
【专利技术属性】
技术研发人员：张新星，苏营雪，栗琳，郑佳，薛元强，丁沛瑜，王倩倩，周立，丁亮，
申请(专利权)人：北京豪思生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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