【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养，特别是一种小体积细胞培养装置及培养方法。
技术介绍
1、目前市场上配合wave使用的细胞培养袋，最小工作体积在200ml，低于200ml时，细胞培养效果较差或者不生长。特别是敏感型的细胞及刚复苏的细胞(状态相对较差)，如cgt行业中的一些nk，t，cik细胞等。现有配合wave使用的细胞培养袋存在以下问题：1、现有wave袋，体系在200ml以上可以较好培养。低于200ml，效果较差或者细胞不增长。2、现有体系之所以不能较好培养少量液体细胞，在于：a.袋子体积较大，液体较为分散，细胞混匀时，容易挂到袋子液面外，干烤及无营养导致细胞死亡或不生长。b.袋子与底部加热板贴合较差，升温及温度恒定时，细胞受热不均，容易过热。烫伤细胞。c.按照常规工艺，细胞通气量及加热双重作用下，细胞蒸发量大。导致袋内小体积进一部变小，细胞生长渗透压等改变。d.小体积时，通气情况下，ph相对较高。如高出细胞合适生长范围，不利于细胞生长。
2、细胞治疗行业自体细胞治疗时，每次采血200-400ml。最终经过浓缩洗涤，得到的细胞量在30-50ml。考虑到病人情况不太好，因此前期抽取的血液量越少越好。密闭系统，对于整个工艺过程中无菌保证及终产品的质量至关重要。小体积密闭培养装置及工艺的开发，已经势在必行。
3、小体积的细胞培养。可以让细胞培养完全的处于密闭环境中。目前细胞培养通常的手段时，将离心管中冻存的细胞，复苏至摇瓶中。经过摇瓶的逐级放大，然后接种到wave中。期间离心管及摇瓶中的工艺操作属于开口操作，有污染的
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种小体积细胞培养装置及培养方法，以解决上述技术背景中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术通过以下技术方案来实现：
3、第一方面的，本专利技术提供了一种小体积细胞培养装置，该装置用于将细胞培养袋底面与其所配合使用的wave波浪式生物反应器贴合在一起。
4、作为进一步的技术方案，所述装置包含两个袋体压板，两个袋体压板的其中一端将细胞培养袋的相对两边压在wave波浪式生物反应器的摇床上，细胞培养袋平放在wave波浪式生物反应器的摇床上、且其底面与wave波浪式生物反应器的摇床贴合在一起，两个袋体压板的另一端均与wave的摇床固定连接。
5、作为进一步的技术方案，所述细胞培养袋的容积为500ml，细胞培养袋的工作体积为50～250ml。
6、作为进一步的技术方案，细胞培养袋的初始工作体积为50～100ml。
7、第二方面的.本专利技术提供了基于上述所述小体积细胞培养装置的小体积细胞培养方法，包括以下步骤：
8、s1、将灭菌的500ml细胞培养袋和wave波浪式生物反应器通过上述所述小体积细胞培养装置组装；
9、s2、co2/o2模式通气15～30min后夹紧培养袋上的进气和出气，将冻存细胞复苏、培养、传代，并以细胞密度5e+5/ml、细胞活率＞95％以及工作体积50～100ml接种至500ml悬浮细胞培养袋；
10、s3、取样测细胞密度，细胞活力，观察细胞状态和结团情况并拍照，根据结团情况调整转速，当细胞密度＞1e+7/ml时进行处理。
11、作为进一步的技术方案，所述细胞为bhk细胞、nk细胞、293细胞、cho细胞、t细胞、cik细胞等。
12、作为进一步的技术方案，步骤s2中细胞培养参数为：温度：37℃、转速:20rpm、角度:8°、co2浓度:5％。
13、作为进一步的技术方案，步骤s2中夹紧培养袋上的进气和出气进行培养每1天后，进行co2/o2模式通气15～30min后再次夹紧。
14、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
15、1、小体积细胞培养时，通过小体积细胞培养装置将细胞培养袋底面与其所配合使用的wave贴合在一起，液体集中在固定区域，细胞裸漏到袋子非液体部分面积大大减小，液面外部分死细胞肉眼可见变少。与此同时，袋子与其底部的wave的摇床加热板贴合紧密，受热均匀，受热面大，且加热板和袋内液体温差小，避免高温损伤细胞。
16、2、本专利技术通过设置co2/o2模式通气15～30min后夹紧培养袋上的进气和出气的培养条件后，无通气，蒸发量小，渗透压改变小。同时无通气，ph值不会持续升高，超出合适的细胞生长ph。
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1.一种小体积细胞培养装置，其特征在于，该装置用于将细胞培养袋底面与其所配合使用的WAVE波浪式生物反应器贴合在一起。
2.根据权利要求1所述的一种小体积细胞培养装置，其特征在于，所述装置包含两个袋体压板，两个袋体压板的其中一端将细胞培养袋的相对两边压在WAVE波浪式生物反应器的摇床上，细胞培养袋平放在WAVE波浪式生物反应器的摇床上、且其底面与WAVE波浪式生物反应器的摇床贴合在一起，两个袋体压板的另一端均与WAVE波浪式生物反应器的摇床固定连接。
3.根据权利要求1所述的一种小体积细胞培养装置，其特征在于，所述细胞培养袋的容积为500ml，细胞培养袋的工作体积为50～250ml。
4.根据权利要求3所述的一种小体积细胞培养装置，其特征在于，细胞培养袋的最小工作体积为50ml。
5.基于权利要求1-3任一项所述小体积细胞培养装置的小体积细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.基于权利要求5所述小体积细胞培养装置的小体积细胞培养方法，其特征在于，步骤S2中细胞培养参数为：温度：37℃、转速:20rpm、角度:8°、
7.基于权利要求5所述小体积细胞培养装置的小体积细胞培养方法，其特征在于，步骤S2中夹紧培养袋上的进气和出气进行培养每1天后，进行CO2/O2模式通气15～30min后再次夹紧。
...【技术特征摘要】
1.一种小体积细胞培养装置，其特征在于，该装置用于将细胞培养袋底面与其所配合使用的wave波浪式生物反应器贴合在一起。
2.根据权利要求1所述的一种小体积细胞培养装置，其特征在于，所述装置包含两个袋体压板，两个袋体压板的其中一端将细胞培养袋的相对两边压在wave波浪式生物反应器的摇床上，细胞培养袋平放在wave波浪式生物反应器的摇床上、且其底面与wave波浪式生物反应器的摇床贴合在一起，两个袋体压板的另一端均与wave波浪式生物反应器的摇床固定连接。
3.根据权利要求1所述的一种小体积细胞培养装置，其特征在于，所述细胞培养袋的容积为500ml，细胞培养袋的工作体积为50～...
【专利技术属性】
技术研发人员：李驰，范金鹏，卢建成，喻坤鹏，李森江，刘超，
申请(专利权)人：武汉赛科成科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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