【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供了对单链可变片段(scfv)抗体的改进和多特异性结合蛋白、包含此类蛋白质的药物组合物，以及使用此类蛋白质和药物组合物的治疗方法，包括用于治疗癌症。
技术介绍
1、尽管在文献中报道了治疗癌症的大量研究尝试和科学进展，但这种疾病依然是重大的健康问题。一些最经常诊断到的癌症包括前列腺癌、乳腺癌和肺癌。前列腺癌是男性中最常见的癌症形式。乳腺癌仍然是女性死亡的主要原因。当前用于这些癌症的治疗选项不是对于所有患者都有效的和/或可能具有大量的不良副作用。其他类型的癌症对于使用现有治疗选项治疗来说也仍然具有挑战性。
2、癌症免疫疗法是理想的，因为它们是高度特异性的并且可以使用患者自身的免疫系统促进癌细胞的破坏。融合蛋白诸如双特异性t细胞衔接器是文献中描述的与肿瘤细胞和t细胞结合以促进肿瘤细胞破坏的癌症免疫疗法。与某些肿瘤相关抗原和某些免疫细胞结合的抗体在文献中已有描述。参见，例如wo 2016/134371和wo 2015/095412。
3、自然杀伤(nk)细胞是先天免疫系统的组成部分并占循环淋巴细胞的大约15％。nk细胞几乎浸润所有组织，并且最初因其不需前期致敏即可有效杀伤肿瘤细胞的能力而被表征。激活的nk细胞通过与细胞毒性t细胞相似的手段杀伤靶细胞-即，通过含有穿孔素和颗粒酶的细胞溶解颗粒以及通过死亡受体途径。激活的nk细胞还分泌炎性细胞因子诸如ifnγ和促进其他白细胞向靶组织的募集的趋化因子。
4、nk细胞通过其表面上的多种激活和抑制受体对信号做出响应。例如，当nk细胞遇到健康的自体细胞
技术实现思路
1、在一个方面，本专利技术提供对通过铰链序列与抗体恒定结构域连接的单链可变片段(scfv)的改进。在一些实施方案中，铰链包含氨基酸ala-ser。在一些其他实施方案中，铰链包含氨基酸ala-ser和thr-lys-gly。scfv可包括重链可变结构域和轻链可变结构域。在一些实施方案中，scfv结合nkg2d或肿瘤相关抗原。铰链序列提供与靶抗原结合的灵活性。
2、在scfv的一些实施方案中，重链可变结构域与轻链可变结构域形成二硫桥。例如，可以在重链可变结构域的c44残基与轻链可变结构域的c100残基之间形成二硫桥。在一些实施方案中，重链可变结构域通过柔性接头诸如(g4s)4(seq id no:427)与轻链可变结构域连接。在scfv的一些实施方案中，重链可变结构域位于轻链可变结构域的n端。在scfv的一些实施方案中，重链可变结构域位于轻链可变结构域的c端。
3、在一些实施方案中，与scfv连接的抗体恒定结构域能够与cd16结合。在一些实施方案中，抗体恒定结构域包含igg抗体例如人igg1抗体的ch2结构域和ch3结构域。在一些实施方案中，将突变引入抗体恒定结构域中，使其能够与另一抗体恒定结构域异二聚化。例如，如果抗体恒定结构域衍生自人igg1的恒定结构域，那么所述抗体恒定结构域可以包含与人igg1抗体的氨基酸234-332具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且在选自由以下组成的组的一个或多个位置上有所不同：q347、y349、l351、s354、e356、e357、k360、q362、s364、t366、l368、k370、n390、k392、t394、d399、s400、d401、f405、y407、k409、t411和k439。在一些实施方案中，抗体恒定结构域可以包含与人igg1抗体的氨基酸234-332具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且不同之处在于选自由以下组成的组的一个或多个取代：q347e、q347r、y349s、y349k、y349t、y349d、y349e、y349c、l351k、l351d、l351y、s354c、e356k、e357q、e357l、e357w、k360e、k360w、q362e、s364k、s364e、s364h、s364d、t366v、t366i、t366l、t366m、t366k、t366w、t366s、l368e、l368a、l368d、k370s、n390d、n390e、k392l、k392m、k392v、k392f、k392d、k392e、t394f、d399r、d399k、d399v、s400k、s400r、d401k、f405a、f405t、y407a、y407i、y407v、k409f、k409w、k409d、t411d、t411e、k439d和k439e。
4、在另一方面，本专利技术提供了一种蛋白质，其包含上述与抗体恒定区连接的scfv。在一些实施方案中，所述蛋白质包括第一抗原结合位点，其包含与抗体恒定结构域连接的scfv；第二抗原结合位点，其可采取fab或此处所述的scfv形式；以及与第二抗原结合位点连接的第二抗体恒定结构域。在一些实施方案中，所述蛋白质是多特异性的，其中第一抗原结合位点结合nkg2d，第二抗原结合位点结合肿瘤相关抗原，并且抗体恒定区结合cd16。
5、在一些其他实施方案中，所述蛋白质是多特异性的，其中第一抗原结合位点结合肿瘤相关抗原，第二抗原结合位点结合nkg2d，并且抗体恒定区结合cd16。与scfv连接的抗体恒定区可以与第二抗体恒定区异二聚化。这些实施方案中的多特异性结合蛋白与自然杀伤细胞上的nkg2d受体和cd16受体结合，并且与癌细胞上的肿瘤相关抗原结合。此类蛋白质可以衔接多于一种nk激活受体，并且可阻断天然配体与nkg2d的结合。在某些实施方案中，所述蛋白质可以在人中激动nk细胞。在一些实施方案中，所述蛋白质可以在人，和/或其他物种诸如啮齿动物和/或食蟹猴中激动nk细胞。
6、在另一方面，本专利技术提供了一种多特异性结合蛋白，并且所述蛋白质包含结合肿瘤相关抗原的第一抗原结合位点；与第一抗原结合位点结合相同的肿瘤相关抗原的第二抗原结合位点；结合nkg2d的第三抗原结合位点；以及抗体恒定区或其足以结合cd16的部分，或结合cd16的第四抗原结合位点。抗原结合位点中的任一个可以采取fab或scfv的形式，诸如上文描述的那些。此处提供的多特异性结合蛋白提供肿瘤相关抗原的二价衔接，从而稳定癌细胞表面上的肿瘤相关抗原，并增强nk细胞对癌细胞的细胞毒性。
7、在一些实施方案中，多特异性结合蛋白对肿瘤相关抗原的二价衔接赋予多特异性结合蛋白对癌细胞的更强结合，从而促进nk细胞对癌细胞，尤其是对表达低水平的肿瘤相关抗原的癌细胞的更强的细胞毒性反应。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蛋白质，其包含：
2.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述scFv通过包含Ala-Ser的铰链与所述第一抗体恒定结构域的N端连接。
3.根据权利要求2所述的蛋白质，其中所述铰链还包含氨基酸序列Thr-Lys-Gly。
4.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述scFv的重链可变结构域与所述scFv的轻链可变结构域形成二硫桥，任选地形成在来自所述scFv的重链可变结构域的C44与来自所述scFv的轻链可变结构域的C100之间。
5.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述scFv的重链可变结构域通过柔性接头与所述scFv的轻链可变结构域连接，任选地其中所述柔性接头包含(G4S)4。
6.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述scFv的重链可变结构域位于所述scFv的轻链可变结构域的C端。
7.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述第一抗体恒定结构域和所述第二抗体恒定结构域均包含人IgG1抗体的CH2结构域和CH3结构域。
8.根据权利要求7所述的蛋白质，其中所述第一抗体恒定结构域和所述第二抗体恒定结构
9.根据权利要求8所述的蛋白质，其中所述异二聚化突变位于选自由Q347、Y349、L351、S354、E356、E357、K360、Q362、S364、T366、L368、K370、N390、K392、T394、D399、S400、D401、F405、Y407、K409、T411和K439组成的组中的一个或多个位置。
10.根据权利要求9所述的蛋白质，其中所述异二聚化突变包含选自由Q347E、Q347R、Y349S、Y349K、Y349T、Y349D、Y349E、Y349C、L351K、L351D、L351Y、S354C、E356K、E357Q、E357L、E357W、K360E、K360W、Q362E、S364K、S364E、S364H、S364D、T366V、T366I、T366L、T366M、T366K、T366W、T366S、L368E、L368A、L368D、K370S、N390D、N390E、K392L、K392M、K392V、K392F、K392D、K392E、T394F、D399R、D399K、D399V、S400K、S400R、D401K、F405A、F405T、Y407A、Y407I、Y407V、K409F、K409W、K409D、T411D、T411E、K439D和K439E组成的组中的一个或多个取代。
11.根据权利要求10所述的蛋白质，其中所述异二聚化突变包含在所述第一抗体恒定结构域中的Q347R、D399V和F405T取代，以及在所述第二抗体恒定结构域中的K360E和K409W取代。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的蛋白质，其中：
13.根据权利要求1-11中任一项所述的蛋白质，其中：
14.一种制剂，其包含权利要求1-13中任一项所述的蛋白质和药学上可接受的载剂。
15.一种细胞，其包含编码权利要求1-13中任一项所述的蛋白质的一种或多种核酸。
16.权利要求1-13中任一项所述的蛋白质或权利要求14所述的制剂在制备药物中的用途。
17.权利要求1-13中任一项所述的蛋白质在制备用于增强肿瘤细胞死亡的药物中的用途，所述用途包含将肿瘤和自然杀伤细胞暴露于所述蛋白质。
18.权利要求1-13中任一项所述的蛋白质或权利要求14所述的制剂在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述用途包含向患者给药所述蛋白质或所述制剂。
19.根据权利要求18所述的用途，其中所述癌症选自由以下组成的组：急性骨髓性白血病、急性粒单核细胞白血病、B细胞淋巴瘤、膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、食道癌、尤文氏肉瘤、滤泡性淋巴瘤、胃癌、胃肠道癌、胃肠道间质瘤、胶质母细胞瘤、头颈癌、黑素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、肾细胞癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、神经内分泌肿瘤、卵巢癌和胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、小细胞肺癌、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、尿路上皮癌、髓源性抑制细胞浸润的癌症、具有细胞外基质沉积的癌症、具有高水平反应性基质的癌症，以及具有新生血管形成的癌症。
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白质，其包含：
2.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述scfv通过包含ala-ser的铰链与所述第一抗体恒定结构域的n端连接。
3.根据权利要求2所述的蛋白质，其中所述铰链还包含氨基酸序列thr-lys-gly。
4.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述scfv的重链可变结构域与所述scfv的轻链可变结构域形成二硫桥，任选地形成在来自所述scfv的重链可变结构域的c44与来自所述scfv的轻链可变结构域的c100之间。
5.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述scfv的重链可变结构域通过柔性接头与所述scfv的轻链可变结构域连接，任选地其中所述柔性接头包含(g4s)4。
6.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述scfv的重链可变结构域位于所述scfv的轻链可变结构域的c端。
7.根据权利要求1所述的蛋白质，其中所述第一抗体恒定结构域和所述第二抗体恒定结构域均包含人igg1抗体的ch2结构域和ch3结构域。
8.根据权利要求7所述的蛋白质，其中所述第一抗体恒定结构域和所述第二抗体恒定结构域均包含与人igg1抗体的氨基酸234-332具有至少90％同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求8所述的蛋白质，其中所述异二聚化突变位于选自由q347、y349、l351、s354、e356、e357、k360、q362、s364、t366、l368、k370、n390、k392、t394、d399、s400、d401、f405、y407、k409、t411和k439组成的组中的一个或多个位置。
10.根据权利要求9所述的蛋白质，其中所述异二聚化突变包含选自由q347e、q347r、y349s、y349k、y349t、y349d、y349e、y349c、l351k、l351d、l351y、s354c、e356k、e357q、e357l、e357w、k360e、k360w、q362e、s364k、s364e、s364h、s364d、t366v、t366i、t366l、t366m、t366k、t366w、t366s、l368e、l368a、l368d...
【专利技术属性】
技术研发人员：格雷戈里·P·常，安·F·张，杜金燕，丹尼尔·法伦，阿斯亚·格林贝格，威廉·哈尼，斯蒂芬·奥尼尔，罗尼·魏，布拉德利·M·伦德，比昂卡·普林茨，
申请(专利权)人：蜻蜓疗法股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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