【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及功能肽，具体地说，涉及一种具有抗氧化和抗衰老功能的牛骨胶原蛋白肽及其制备方法与应用。
技术介绍
1、衰老又称为老化，是一种普遍存在的、机体不可避免的自然生理现象。当人们年龄增长时，机体的各个系统会逐渐失去功能，随之而来的是多种慢性炎症和老化有关疾病的发生，进而影响各个器官之间的协作。衰老变化可以在细胞与分子水平上发生，其中包括dna损伤、蛋白质、脂质和碳水化合物的积累，以及细胞凋亡等，此外，神经递质、介质因子、其他生物大分子等之间的通信也会受到影响，进而影响器官之间的协作和整体健康状况。衰老理论之一的自由基理论表示，衰老是由于体内活性氧(ros)过多而引起的。与年龄相关的功能丧失是由于ros的积累，从而导致氧化损伤和组织受损。ros是一组不稳定的分子，它们在呼吸过程中形成，在细胞增殖、凋亡和信号传导中起重要作用。ros在人体内的过量积累通过氧化还原反应破坏不同的生物分子，导致细胞损伤、突变、死亡并导致机体衰老。
2、研究表明，胶原蛋白肽具有良好的抗氧化活性，可以清除过剩自由基、抑制氧化损伤、提高机体的抗氧化能力，并通过调控衰老过程中重要基因的表达及相关途径的相互作用来延缓衰老。而分子量越小的胶原蛋白肽，更易被机体吸收，并在体内发挥生物活性，抗氧化、延缓衰老效果更好。经常通过口服的方式来发挥对皮肤、软骨和骨质的有益作用，因此常被用于开发功能性食品和膳食补充剂，在日常食品、功能性食品和特膳食品中得到广泛应用。已有研究显示，摄取特定的胶原蛋白肽有促进身体健康的作用,例如可以改善皮肤健康，减轻轻度高血压以及关节
3、牛骨屠宰企业，每年有大量牛骨未经精细化处理而销售，研究表明，牛骨胶原蛋白经酶解后生成的小分子肽和氨基酸不仅更利于人体的消化吸收，还具有多种功能特性。但牛骨中的蛋白经酶解后的多肽产物组成十分复杂，其中包含大量未知序列、未知功能的多肽，且具有特定功能的活性肽可能包含具有不同氨基酸组成、不同分子量大小的多种肽，较难通过某些共性特征将其区分，且现有技术中的牛骨肽很多并不具有特定的功能，这些给具有特定功能的牛骨肽的开发造成了较大困难。此外，现有技术在酶解过程中，多需要添加酸碱调节ph，这不仅增加了工艺的复杂性和成本，而且，也可能会影响产品的功能特性，增加产品灰分含量，难以得到高质量产品。
4、若可成功开发具有抗氧化、抗老功效的骨蛋白制品和功能性食品，不仅可以产生很高的经济效益，同时解决了资源浪费和环境污染的问题，可形成一个健康、持续发展的产业。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种以检疫合格的(冻)鲜牛骨为原料制备的牛骨胶原蛋白酶解制品，其具有抗氧化和抗衰老的功效，且制备简单，便于工业化生产。
2、为了实现该目的，本专利技术的技术方案如下：
3、一种制备牛骨胶原蛋白酶解制品的方法，其通过牛骨的两次酶解，获得牛骨胶原蛋白酶解制品；第一次酶解使用的为复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由中性蛋白酶和木瓜蛋白酶组成；第二次酶解使用的为风味蛋白酶。
4、本专利技术提出了一种牛骨胶原蛋白酶解制品的制备方法，其在不添加任何酸碱辅助的条件下，利用特定的蛋白酶及处理顺序将牛骨中的胶原蛋白成功转化为含有特定功能的小分子牛骨胶原蛋白肽制品，拓展了牛骨原料的利用领域，提升了产品价值。
5、优选，本专利技术在酶解时可采用固定化酶在酶解柱中进行(固定化载体为惰性物质，不参与催化作用，本专利技术对具体载体材料不做限制)，从而通过固定化酶的反复使用，节约生产成本。
6、本专利技术方法所述复合蛋白酶中，中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的质量之比为(1-3)：1，所述中性蛋白酶的酶活为250,000-400,000u/g，所述木瓜蛋白酶的酶活为350,000-600,000u/g(优选为350,000-550,000u/g)；所述风味蛋白酶的酶活为150,000-200,000u/g；
7、和/或，所述第一次酶解中，所述复合蛋白酶的质量为牛骨重量的0.08-0.3wt％(优选为0.09-0.2wt％)，酶解的温度为40～65℃(优选为43-62℃)，酶解的时间为3～6h(优选为4-6h)；所述第二次酶解中，所述风味蛋白酶的质量为牛骨重量的0.05-0.1wt％(优选为0.07-0.1wt％)，酶解的温度为50～60℃，酶解的时间为1～2h。
8、本专利技术方法在两次酶解前，还包括对牛骨预处理的步骤；所述预处理包括：清洗、破碎、蒸煮和分离；
9、优选地，所述蒸煮是将破碎后的牛骨置于水中，于0.1-0.3mpa、100-130℃下蒸煮2-6h。
10、本专利技术方法在所述第一次酶解后，先将获得的第一次酶解反应液进行微孔过滤，获得透过液后，再对所述透过液进行第二次酶解，获得第二次酶解反应液；之后对所述第二次酶解反应液进行再次微孔过滤、灭酶、离心取上清，获得牛骨胶原蛋白酶解液。
11、以本专利技术方法获得的牛骨胶原蛋白酶解液中含有功能性目标肽，已具有了明显的抗氧化和抗衰老功效，优选，对牛骨胶原蛋白酶解液进行进一步纯化，以获得目标肽占比更大的产品。
12、本领域技术人员也可将本专利技术方法获得的牛骨胶原蛋白酶解液直接制备为冻干粉等固态产品进行直接应用。
13、本专利技术方法还包括对所述牛骨胶原蛋白酶解液进行过滤、目标肽分离的步骤；
14、所述牛骨胶原蛋白酶解液的过滤包括：将所述牛骨胶原蛋白酶解液经过陶瓷膜进行过滤处理，对收集到的滤液进行纳滤处理(优选，截留分子量为200da)，收集未透过液；
15、对所述未透过液进行二步超滤处理：先利用孔径为5000道尔顿的超滤膜超滤，收集过滤液，再将所述过滤液通过孔径为2000道尔顿的超滤膜，收集透过液，获得含分子量小于2000道尔顿的目标肽的溶液；
16、所述目标肽分离包括：将所述目标肽的溶液经过sephadexg-15凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；再用rp-hplc反相高效液相色谱进行分离，收集13-15分钟分离的蛋白肽溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种制备牛骨胶原蛋白酶解制品的方法，其特征在于，通过牛骨的两次酶解，获得牛骨胶原蛋白酶解制品；第一次酶解使用的为复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由中性蛋白酶和木瓜蛋白酶组成；第二次酶解使用的为风味蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复合蛋白酶中，中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的质量之比为(1-3)：1，所述中性蛋白酶的酶活为250,000-400,000U/g，所述木瓜蛋白酶的酶活为350,000-600,000U/g；所述风味蛋白酶的酶活为150,000-200,000U/g；
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在两次酶解前，还包括对牛骨预处理的步骤；所述预处理包括：清洗、破碎、蒸煮和分离；
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，在所述第一次酶解后，先将获得的第一次酶解反应液进行微孔过滤，获得透过液后，再对所述透过液进行第二次酶解，获得第二次酶解反应液；之后对所述第二次酶解反应液进行再次微孔过滤、灭酶、离心取上清，获得牛骨胶原蛋白酶解液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括对所述牛
6.一种牛骨胶原蛋白酶解液，其特征在于，由权利要求1-4任一项所述的方法制备获得。
7.一种牛骨胶原蛋白肽，其特征在于，由权利要求1-5任一项所述的方法制备得到；优选地，所述牛骨胶原蛋白肽含有质量百分含量为62.5-72％的功能肽，所述功能肽的序列如SEQ ID NO.1-3任一所示。
8.功能性多肽，其特征在于，具有如SEQ ID NO.1-3任一所示的氨基酸序列。
9.权利要求6所述的牛骨胶原蛋白酶解液或权利要求7所述的牛骨胶原蛋白肽或权利要求8所述的功能性多肽在制备药品、食品或食品添加剂中的应用；
10.含有权利要求6所述的牛骨胶原蛋白酶解液或权利要求7所述的牛骨胶原蛋白肽或权利要求8所述的功能性多肽的药品、食品或食品添加剂。
...【技术特征摘要】
1.一种制备牛骨胶原蛋白酶解制品的方法，其特征在于，通过牛骨的两次酶解，获得牛骨胶原蛋白酶解制品；第一次酶解使用的为复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由中性蛋白酶和木瓜蛋白酶组成；第二次酶解使用的为风味蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述复合蛋白酶中，中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的质量之比为(1-3)：1，所述中性蛋白酶的酶活为250,000-400,000u/g，所述木瓜蛋白酶的酶活为350,000-600,000u/g；所述风味蛋白酶的酶活为150,000-200,000u/g；
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在两次酶解前，还包括对牛骨预处理的步骤；所述预处理包括：清洗、破碎、蒸煮和分离；
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，在所述第一次酶解后，先将获得的第一次酶解反应液进行微孔过滤，获得透过液后，再对所述透过液进行第二次酶解，获得第二次酶解反应液；之后对所述第二次酶解反应液进行再...
【专利技术属性】
技术研发人员：张恒，罗永康，刘怀高，
申请(专利权)人：人民国肽集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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