【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种染色质免疫沉淀试剂盒。
技术介绍
1、基因表达调控是一个十分复杂而有序的过程，也是功能基因组学的一个重要领域，研究dna和蛋白质在染色质环境下的相互作用是阐明基因表达机制的基本途径。研究蛋白质与dna相互作用的传统方法有凝胶电泳迁移率改变分析 (electrophoretic mobilityshift assay,emsa)、dnase i足迹法 (dnase i footprinting)，这些方法是研究体外dva与蛋白质相互作用的方法，不能充分反映生理情况下dna与蛋白质相互作用的真实情况，很难捕捉到在染色质水平上基因表达调控的动态瞬时事件。
2、染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, chip）是基于体内分析发展起来的目前唯一研究体内dna与蛋白质相互作用的方法，也称结合位点分析法，具体是通过特异抗体的运用和优化的实验条件，富集和捕获与染色质相关的蛋白质。这些蛋白质包括转录因子、组蛋白修饰酶以及其他与染色质重塑和基因表达调控相关的蛋白质。通过染色质免疫沉淀技术的应用，研究人员能够深入研究蛋白质与dna之间的相互作用，揭示了染色质结构的动态变化，以及蛋白质与染色质之间的调控机制，可以检测体内反式因子与dna的动态作用，或研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系，还能结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性，因此，染色质免疫沉淀技术对于了解基因表达调控、细胞命运决定以及疾病发生机制等方面都具有重要的意义。>
3、然而，常规的染色质免疫沉淀技术操作步骤比较多，且每一步实验步骤都很重要，由于在非变性条件下进行实验，所以要得到实验目的，不仅需要高质量的抗体，还对免疫沉淀体系也有严格的控制指标，不利于经验较少的人实验，而且由于基因组的复杂性，不容易解读chip结果，同时还可能存在非特异性结合和背景信号噪音，导致假阳性结果或未检测到真实的结合事件。随着chip受到广泛的关注，为了让chip便于使用，市场上存在一些能用于chip实验的商业化试剂盒，但还是存在一些样品类型受限、成本较高等缺点。如果设计一种能研究体内dna与蛋白质相互作用且效率高的染色质免疫沉淀试剂盒，不仅丰富了染色质免疫沉淀试剂盒种类，还提高了科研和临床样本的检测效果，有助于推动基础和临床科学的研究进展。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷，本专利技术设计了一种染色质免疫沉淀试剂盒以及其应用。所述试剂盒能富集目的dna，成本低，适合大规模推广应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术解决技术问题采用如下技术方案：
3、一方面，本专利技术提供了一种染色质免疫沉淀试剂盒，所述试剂盒包括chip级pa/g磁珠、chip 裂解液、chip缓冲液、洗涤液1、洗涤液2、洗涤液3、te 缓冲液、chip洗脱液。
4、在其中一些实施例中，所述chip裂解液包括0.1～2%sds、5～15mm edta、20～70mm且ph 8.0的tris-hcl。
5、进一步优选地，所述chip裂解液包括1%sds、10mm edta、50mm ph 8.0的tris-hcl。
6、在其中一些实施例中，所述chip缓冲液包括0.1～2% triton x-100、10～22mmedta、10～20 mm 且ph 8.0的tris-hcl和100～200 mm nacl。
7、进一步优选地，所述chip缓冲液包括1.1% triton x-100、1.2 mm edta、16.7 mmph 8.0的tris-hcl 167 mm nacl。
8、在其中一些实施例中，所述洗涤液1包括0.01～0.2% sds、1～5 mm edta、10～40mm且ph 8.0的tris-hcl、100～200mm nacl；所述洗涤液2包括0.01～0.2% sds、1～5 mmedta、10～40 mm且ph 8.0的tris-hcl、300～700 mm nacl；所述洗涤液3包括0.1～0.4 m氯化锂、0.1～2% np-40、0.1～2 mm edta、5～15mm且ph 8.0的tris-hcl。
9、进一步优选地，所述洗涤液1包括0.1% sds、2 mm edta、20 mm ph 8.0的tris-hcl、150 mm nacl；所述洗涤液2包括0.1% sds、2 mm edta、20 mm ph 8.0的tris-hcl、500mm nacl；所述洗涤液3包括0.25 m 氯化锂、1% np-40、1 mm edta、10 mm ph 8.0的tris-hcl，以洗去多余物质。
10、在其中一些实施例中，所述te 缓冲液包括0.1～2mm edta、5～15mm且ph 8.0的tris-hcl。
11、进一步优选地，所述te 缓冲液包括1mm edta、10mm ph 8.0的tris-hcl。
12、在其中一些实施例中，所述chip洗脱液包括0.1～2% sds、0.01～0.2m nahco3。
13、进一步优选地，所述chip洗脱液包括1% sds、0.1m nahco3。
14、另一方面，本专利技术还提供了使用上述染色质免疫沉淀试剂盒富集dna的方法，所述方法包括以下步骤：
15、s1：收集细胞并用37%～40%的甲醛溶液交联5～15min，再用终浓度为120mm～135mm的甘氨酸溶液终止交联得到蛋白质-dna复合物；
16、s2：用chip裂解液裂解蛋白质-dna复合物，然后进行超声破碎，超声破碎条件为功率25%，超声4～6秒,间歇5～15秒,循环10～20次，再离心去除不溶物质；
17、s3：将所述chip级pa/g磁珠进行预处理，并加入dna结合蛋白的抗体进行孵育；
18、s4：用所述洗涤液1、洗涤液2、洗涤液3、te缓冲液洗涤所述chip级pa/g磁珠；
19、s5：用所述chip洗脱液洗脱所述chip级pa/g磁珠吸附的复合物，再加入4～10µl5m nacl和 2µl蛋白酶k，并在60～70℃下孵育过夜进行解交联；
20、s6：提取纯化dna。
21、进一步优选地，步骤s1中，所述甲醛的终浓度为0.1%～6%。
22、在其中一些实施例中，步骤s3中，所述抗体为histone h3或normal rabbit igg抗体。
23、在其中一些实施例中，在所述步骤s6纯化dna之后，所述富集dna的方法还包括用qpcr定量分析所述纯化dna的步骤。
24、在其中一些实施例中，所述qpcr引物包括gapdh primer或cdk1primer；其中，所述gapdh primer包括如seq id no.1所示的s序列和如seq id no.2所示的as序列，所述cdk1primer序列包括本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括ChIP级PA/G磁珠、ChIP裂解液、ChIP缓冲液、洗涤液1、洗涤液2、洗涤液3、TE 缓冲液、ChIP洗脱液。
2.根据权利要求1所述的一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述ChIP裂解液包括0.1～2%SDS、5～15mM EDTA、20～70mM且pH 8.0的Tris-HCl。
3.根据权利要求1所述的一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述ChIP缓冲液包括0.1～2% Triton X-100、10～22mM EDTA、10～20 mM 且pH 8.0的Tris-HCl和100～200mM NaCl。
4.根据权利要求1所述的一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述洗涤液1包括0.01～0.2% SDS、1～5 mM EDTA、10～40 mM且pH 8.0的Tris-HCl、100～200mM NaCl；所述洗涤液2包括0.01～0.2% SDS、1～5 mM EDTA、10～40 mM且pH 8.0的Tris-HCl、300～700mM NaCl；所述洗涤液3包
5.根据权利要求1所述的一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述TE 缓冲液包括0.1～2mM EDTA、5～15mM且pH 8.0的Tris-HCl。
6.根据权利要求1所述的一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述ChIP洗脱液包括0.1～2% SDS、0.01～0.2M NaHCO3。
7.一种富集DNA的方法，其特征在于，使用权利要求1-6中任一项所述一种染色质免疫沉淀试剂盒完成，所述方法包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的一种富集DNA的方法，其特征在于，步骤S3中，所述抗体为Histone H3或Normal Rabbit IgG抗体。
9.根据权利要求7所述的一种富集DNA的方法，其特征在于，在所述步骤S6纯化DNA之后，还包括用qPCR定量分析所述纯化DNA的步骤。
10.根据权利要求9所述的一种富集DNA的方法，其特征在于，所述qPCR引物包括GAPDHPrimer或CDK1Primer；其中，所述GAPDH Primer包括如SEQ ID NO.1所示的S序列和如SEQID NO.2所示的AS序列，所述CDK1Primer序列包括如SEQ ID NO.3所示的S序列和如SEQ IDNO.4所示的AS序列。
...【技术特征摘要】
1.一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括chip级pa/g磁珠、chip裂解液、chip缓冲液、洗涤液1、洗涤液2、洗涤液3、te 缓冲液、chip洗脱液。
2.根据权利要求1所述的一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述chip裂解液包括0.1～2%sds、5～15mm edta、20～70mm且ph 8.0的tris-hcl。
3.根据权利要求1所述的一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述chip缓冲液包括0.1～2% triton x-100、10～22mm edta、10～20 mm 且ph 8.0的tris-hcl和100～200mm nacl。
4.根据权利要求1所述的一种染色质免疫沉淀试剂盒，其特征在于，所述洗涤液1包括0.01～0.2% sds、1～5 mm edta、10～40 mm且ph 8.0的tris-hcl、100～200mm nacl；所述洗涤液2包括0.01～0.2% sds、1～5 mm edta、10～40 mm且ph 8.0的tris-hcl、300～700mm nacl；所述洗涤液3包括0.1～0.4 m 氯化锂、0.1～2% np-40、0.1～2 mm edta、5～15mm且ph 8.0的tris-hcl。...
【专利技术属性】
技术研发人员：王伟章，伍明惠，谭杰峰，
申请(专利权)人：广州奕昕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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