一种荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法技术

技术编号：41228550 阅读：5 留言：0更新日期：2024-05-09 23:45

本发明专利技术提供了一种荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法，属于细胞培养技术领域。本发明专利技术提供了一种荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法，包括以下步骤：将荷叶铁线蕨原叶体诱导成初级绿色球状体；将所述初级绿色球状体进行悬浮培养，得到悬浮增殖的荷叶铁线蕨绿色球状体；将所述荷叶铁线蕨绿色球状体培养在悬浮培养液中，得到稳定的荷叶铁线蕨悬浮体系，将所述悬浮体系移栽至基质中分化成植株。本发明专利技术得到的荷叶铁线蕨悬浮体系可直接用于播种完成植株再生过程，再生植株成活率高、一致性好，还可用于次级代谢产物生产利用、遗传转化研究及生物反应器规模化生产等。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞培养，尤其涉及一种荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法。

技术介绍

1、荷叶铁线蕨(adiantum nelumboides)属凤尾蕨科(pteridaceae)铁线蕨属(adiantum)，是该属唯一分布于亚洲的单叶型蕨类植物，又名金钱草、荷叶金钱等，为第四纪孑遗植物，姿态优美，可做园林盆栽，整株可入药，具有清热解毒、利尿通淋功效。

2、现有技术记载了荷叶铁线蕨可用其成熟孢子进行植物组织培养繁殖或播种，亦可通过分株繁殖，例如，申请号为cn201510087219.4的中国专利，以自然开裂孢子为外植体，培养过程为：孢子萌发—原叶体增殖—ggb诱导—ggb分化成苗，整个过程为固体培养基培养，全程需要激素诱导且需无菌环境下成苗。至今，未见如何建立稳定高效的荷叶铁线蕨ggb(绿色球状体)悬浮扩繁体系的研究。植物细胞悬浮培养具有生长快、繁殖系数高、营养和环境要求易控、不受地缘限制等优点，此外，还可能从悬浮体系中产生新的、满足医药研究的化合物。因此，研究稳定高效的荷叶铁线蕨悬浮培养体系，对荷叶铁线蕨人工扩繁、种群恢复，以及植物生物多样性、开发利用等具有重要意义。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法，通过无菌绿色球状体建立了稳定的悬浮系，经培养获得的球状体直接脱离无菌环境进行播种完成植株再生。解决了荷叶铁线蕨悬浮培养技术的空白，以及目前资源稀缺、繁殖材料不足、繁殖系数不高的问题。

2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：

3、本专利技术提供了一种荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法，包括以下步骤：

4、(1)将荷叶铁线蕨原叶体诱导成初级绿色球状体；

5、(2)将所述初级绿色球状体进行悬浮培养，得到悬浮增殖的荷叶铁线蕨绿色球状体；

6、(3)将所述荷叶铁线蕨绿色球状体培养在悬浮培养液中，得到稳定的荷叶铁线蕨悬浮体系，将所述悬浮体系移栽至基质中分化成植株。

7、优选的，步骤(1)所述诱导的培养基为固体培养基，所述固体培养基成分为ms+0.4～0.6mg/l 6-ba+0.08～0.12mg/l naa+1％～3％蔗糖+0.4～0.6％琼脂+0.02～0.04％活性炭。

8、优选的，步骤(1)所述诱导的时间为30～90d。

9、优选的，步骤(2)所述悬浮培养的培养液成分为1/2ms+0.4～0.6mg/l6-ba+0～0.1mg/l naa+2.5～3.5％蔗糖或ms+0.4～0.6mg/l 6-ba+0～0.1mg/lnaa+2.5～3.5％蔗糖。

10、优选的，步骤(2)所述悬浮培养为震荡培养，在所述震荡培养的过程中，转速为100～120r/min，温度为23～27℃，光照强度为900～1100lx，光照时间为14～16h/d，培养周期为16～20天。

11、优选的，步骤(3)所述悬浮培养液的成分为ms+0.4～0.6mg/l6-ba+2.5～3.5％蔗糖。

12、优选的，步骤(3)所述荷叶铁线蕨绿色球状体需过50～70目细胞筛，取筛上的细胞团继续培养在所述悬浮培养液中。

13、优选的，步骤(3)所述培养为震荡培养，在所述震荡培养的过程中，转速为100～120r/min，温度为23～27℃，光照强度为900～1100lx，光照时间为14～16h/d，培养周期16～20天。

14、优选的，步骤(3)所述基质为珍珠岩或泥炭土。

15、本专利技术提供的荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法，以无菌的荷叶铁线蕨原叶体诱导出荷叶铁线蕨ggb，省去了外植体灭菌的步骤，解决了荷叶铁线蕨资源稀缺，无法持续为科研提供原材料的问题；通过细胞悬浮培养的方法建立稳定的荷叶铁线蕨ggb悬浮系，分散性好、扩繁效率高，增殖系数大，周期短，建立的ggb悬浮系平均两周生物量扩增可达3倍，大大缩短实验周期，提高珍稀植物荷叶铁线蕨的扩繁效率，并且其扩繁过程中营养及环境要求易控制，可实现周年生长，不受地缘因素影响；因此，荷叶铁线蕨ggb悬浮系优势在于：一，可继代高效扩繁；二，可直接用于播种完成植株再生过程，再生植株成活率高、一致性好；本专利技术于ggb形态脱离无菌环境，转移到穴盘炼化成苗，ggb时期脱离无菌环境，比之成苗后脱离无菌环境，清洗简单，污染率低，出苗同步化高，出苗率高，且很大程度上减少了时间及劳动成本；三，可用于次级代谢产物生产利用、遗传转化研究及生物反应器规模化生产等。

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【技术保护点】

1.一种荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)所述诱导的培养基为固体培养基，所述固体培养基成分为MS+0.4～0.6mg/L6-BA+0.08～0.12mg/LNAA+1％～3％蔗糖+0.4～0.6％琼脂+0.02～0.04％活性炭。

3.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)所述诱导的时间为30～90d。

4.根据权利要求3所述的建立方法，其特征在于，步骤(2)所述悬浮培养的培养液成分为1/2MS+0.4～0.6mg/L 6-BA+0～0.1mg/L NAA+2.5～3.5％蔗糖或MS+0.4～0.6mg/L 6-BA+0～0.1mg/LNAA+2.5～3.5％蔗糖。

5.根据权利要求4所述的建立方法，其特征在于，步骤(2)所述悬浮培养为震荡培养，在所述震荡培养的过程中，转速为100～120r/min，温度为23～27℃，光照强度为900～1100Lx，光照时间为14～16h/d，培养周期为16～20天。

6.根据权利要求5所述的

7.根据权利要求6所述的建立方法，其特征在于，步骤(3)所述荷叶铁线蕨绿色球状体需过50～70目细胞筛，取筛上的细胞团继续培养在所述悬浮培养液中。

8.根据权利要求7所述的建立方法，其特征在于，步骤(3)所述培养为震荡培养，在所述震荡培养的过程中，转速为100～120r/min，温度为23～27℃，光照强度为900～1100Lx，光照时间为14～16h/d，培养周期16～20天。

9.根据权利要求8所述的建立方法，其特征在于，步骤(3)所述基质为珍珠岩或泥炭土。

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【技术特征摘要】

1.一种荷叶铁线蕨悬浮体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)所述诱导的培养基为固体培养基，所述固体培养基成分为ms+0.4～0.6mg/l6-ba+0.08～0.12mg/lnaa+1％～3％蔗糖+0.4～0.6％琼脂+0.02～0.04％活性炭。

3.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)所述诱导的时间为30～90d。

4.根据权利要求3所述的建立方法，其特征在于，步骤(2)所述悬浮培养的培养液成分为1/2ms+0.4～0.6mg/l 6-ba+0～0.1mg/l naa+2.5～3.5％蔗糖或ms+0.4～0.6mg/l 6-ba+0～0.1mg/lnaa+2.5～3.5％蔗糖。

5.根据权利要求4所述的建立方法，其特征在于，步骤(2)所述悬浮培养为震荡培养，在所述震荡培...

【专利技术属性】
技术研发人员：高晗，李薇，高本旺，宋正江，王毅敏，李争艳，刘磊，史永鑫，张双英，雷华，吕栋，
申请(专利权)人：三峡植物园管理处宜昌市林业科学研究所，宜昌市国有金银岗试验林场管理处，
类型：发明
国别省市：

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