【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本公开内容总体上涉及重组低过敏原性的花生过敏原ara h 1和ara h 2、其产生方法及其用途。
技术介绍
0、背景
1、目前已知的最严重的食物过敏之一是花生过敏，其中过敏个体对暴露于花生有响应，即使是低浓度的花生，症状范围从轻微的局部影响到严重的危及生命的影响。在美国，花生是食物诱导的过敏性休克的主要原因(finkelman,(2010)current opinion inimmunology,22(6):783-788)，并且在大约1％的美国人口中报道了对花生的一些形式的过敏反应(sicherer sh,等人,(2010).j allergy clin immunol.125(6):1322-6)。
2、迄今为止，16种花生蛋白已被鉴定为是导致ige介导的过敏反应的蛋白(palladino,c.,&breiteneder,h.(2018).molecular immunology,100:58-70)。在这些蛋白质中，种子贮藏蛋白ara h 1、ara h 2、ara h 3和ara h 6被认为是主要的过敏原，它们被ige抗体介导的响应的识别与更严重的症状相关(palladino,等人,2018；同上)(bernard,等人,(2007)j agric food chem.55(23):9663-9)。在16种花生过敏原中，ara h2被认为是最重要的，因为它被来自3-6岁美国儿童的约75％-80％的血清ige识别(valcour,等人,ann allergy asthma i
3、ara h 1为63kda的花生种子蛋白，构成花生提取物中总蛋白质的12％-16％(koppelman,s.j.,等人.同上)。ara h 1具有热稳定的7s豌豆球蛋白样球蛋白，具有稳定的同源三聚体形式。(pomés等人.(2003)the journal of allergy and clinicalimmunology.111(3):640-5)。ara h 1最初是一种前原蛋白(pre-pro-protein)，其在两次内切蛋白水解裂解后，成为花生中发现的成熟形式。成熟形式具有柔性区域和核心区域。ara h 1核心(残基170-586)的晶体结构(3s7i.pdb；3smh.pdb)显示出过敏原的中心部分具有bicupin折叠。先前，线性ige结合表位已被绘制在ara h 1中，并且每个表位仅一个氨基酸的取代就导致ige结合的丧失。(burks等人.(1997).eur j biochem 1997；245(2):334-9)。然而，对热稳定三聚体表面的构象表位研究较少。
4、除了完全避免暴露于过敏原之外，还向患者提供了受控暴露于递增剂量的相应过敏原的治疗(即免疫疗法(it))。it治疗的焦点是增加不会引发过敏反应的过敏原的量，有效地减少过敏的机会，同时重新训练免疫系统处理过敏原，从而潜在地防止意外摄入过敏原时的过敏响应。免疫疗法治疗目前在诊所提供。近年来，公司已经开发了标准化花生提取物的产品，以便提供更安全和适用于在家庭使用的治疗方案。
5、对低过敏原性的花生蛋白及其用于在对花生过敏原过敏的受试者中的标准化免疫疗法治疗的方法仍存在未满足的需求。
技术实现思路
0、概述
1、本文描述了几种表位作图方法，用于设计保持生物物理和功能特征的低过敏原性的花生过敏原，例如用于产生ara h 1和ara h 2过敏原变体。在一个方面中，本文公开了缺乏至少一种由抗ara h 1抗体或抗ara h 2抗体识别的表位的低过敏原性的花生过敏原arah 1或ara h 2变体，从而减少或消除抗体与花生过敏原变体的结合。在一个方面中，这些低过敏原性的花生过敏原变体可以用于在对花生过敏的受试者中诱导对花生脱敏的方法。
2、在一个方面中，本文提供了一种重组ara h 2变体多肽，其包含与seq id no:3中列出的序列至少50％相同的氨基酸序列，其中该变体包含一个或更多个位于由抗ara h 2抗体识别的单个表位内的氨基酸取代、缺失、插入或其任何组合。在另一种实施方案中，arah 2变体包含一个或更多个位于由抗ara h 2抗体识别的至少两个表位内的氨基酸取代、缺失、插入或其任何组合。
3、在一种实施方案中，重组ara h 2变体多肽包含seq id no:4中列出的氨基酸序列，以及在seq id no:4的位置12、15、16、22、24、46、53、65、80、83、86、87、90、104、115、123、127或140中的一个或更多个处与seq id no:3中相同位置处的氨基酸残基相比的取代、缺失、插入或其任何组合。在一种实施方案中，重组ara h 2变体包含以下取代突变中的一种或更多种：
4、(a)位置12处的n、q、e、d、t、s、g、p、c、k、h、y、w、m、i、l、v或a；
5、(b)位置15处的r、e、k、y、w、f、m、i、v、c、d、g或a；
6、(c)位置16处的r、k、d、q、t、m、p、c、e或w；
7、(d)位置22处的f、y、w、q、e、t、s、a、m、i、l、c、r或h；
8、(e)位置24处的d、e、h、k、s、t、n、q、l、i、m、w、y、f、p、a或g；
9、(f)位置46处的t、v、e、h、s、a、g、q、n、d、r、p、m、i、l或c；
10、(g)位置53处的t、s、q、v、a、g、c、p、m、l、i、e、h、r、k、n或d；
11、(h)位置65处的t、a、n、d、q、r、k、h、i、l、m、v、w、p、g、c或e；
12、(i)位置80处的n、s、t、v、a、i、l、m、f、y、w、c、e、k、r或g；
13、(j)位置83处的d、a、c、f、i、p、t、v、w、y或q；
14、(k)位置8本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组Ara h 2变体多肽，包含一个或更多个位于SEQ ID NO:4的位置12、15、16、22、24、46、53、65、80、83、86、87、90、104、115、123、127或140中的一个或更多个处与SEQ IDNO:3中相同位置处的氨基酸残基相比的取代、缺失、插入或其任何组合，其中所述变体多肽与SEQ ID NO:3中列出的序列至少80％相同。
2.根据权利要求1所述的重组Ara h 2变体，其中所述取代、缺失、插入或其任何组合包括以下项中的一种或更多种：
3.根据权利要求1所述的重组Ara h 2变体，其中所述变体包含至少2-18个在选自SEQID NO:4的位置12、15、16、22、24、46、53、65、80、83、86、87、90、104、115、123、127和140的位置处与SEQ ID NO:3中相同位置处的氨基酸残基相比的取代、缺失、插入或其任何组合。
4.根据权利要求1所述的重组Ara h 2变体，其中在SEQ ID NO:4的位置12-16处的氨基酸包含SEQ ID NO:5中列出的序列，或者在SEQ
5.根据权利要求1所述的重组Ara h 2变体，其中所述变体还包含在SEQ ID NO:4的位置28、44、48、51、55、63、67、107、108、109、124、125或142中的一个或更多个处与SEQ ID NO:3中相同位置处的氨基酸残基相比的另外的取代、缺失、插入或其任何组合。
6.根据权利要求5所述的重组Ara h 2变体，其中所述另外的取代、缺失、插入或其任何组合包括以下项中的一种或更多种：
7.根据权利要求5所述的重组Ara h 2变体，其中所述变体包含2-31个之间的在选自SEQ ID NO:4的位置12、15、16、22、24、28、44、46、48、51、53、55、63、65、67、80、83、86、87、90、104、107、108、109、115、123、124、125、127、140或142的位置处与SEQ ID NO:3中相同位置处的氨基酸残基相比的取代、缺失、插入或其任何组合。
8.根据权利要求1所述的重组Ara h 2变体，其中所述变体包含SEQ ID NO:10-63、168、170、195-201、204-210、247-249的任一个中列出的氨基酸序列，或者包含与SEQ ID NO:10-63、168、170、195-201、204-210、247-249的任一个中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
9.一种分离的核苷酸或修饰的核苷酸序列，编码根据权利要求1所述的重组Ara h 2变体，其中所述核苷酸或修饰的核苷酸序列是DNA或mRNA。
10.根据权利要求9所述的分离的核苷酸或修饰的核苷酸序列，其中所述核苷酸或修饰的核苷酸序列包含SEQ ID NO:167或169的序列，或者包含与SEQ ID NO:167或169中列出的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
11.一种表达载体，包含根据权利要求9所述的核苷酸或修饰的核苷酸序列。
12.一种原核细胞或真核细胞，包含根据权利要求11所述的表达载体，其中所述真核细胞是酵母细胞、真菌细胞、植物细胞或哺乳动物细胞。
13.一种组合物，包含根据权利要求1所述的重组Ara h 2变体多肽。
14.根据权利要求13所述的组合物，还包含佐剂。
15.一种在对花生过敏的受试者中诱导对花生脱敏的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求13所述的组合物，从而在所述受试者中诱导对花生脱敏。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述组合物通过选自口服、皮下、皮内、肌内、鼻内、舌下、表面、直肠、静脉内、经皮、基因枪途径或通过吸入的途径被施用。
17.一种组合物，包含根据权利要求9所述的核苷酸或修饰的核苷酸序列。
18.根据权利要求17所述的组合物，还包含佐剂。
19.一种在对花生过敏的受试者中诱导对花生脱敏的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求17所述的组合物，从而在所述受试者中诱导对花生脱敏。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述组合物通过选自口服、皮...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种重组ara h 2变体多肽，包含一个或更多个位于seq id no:4的位置12、15、16、22、24、46、53、65、80、83、86、87、90、104、115、123、127或140中的一个或更多个处与seq idno:3中相同位置处的氨基酸残基相比的取代、缺失、插入或其任何组合，其中所述变体多肽与seq id no:3中列出的序列至少80％相同。
2.根据权利要求1所述的重组ara h 2变体，其中所述取代、缺失、插入或其任何组合包括以下项中的一种或更多种：
3.根据权利要求1所述的重组ara h 2变体，其中所述变体包含至少2-18个在选自seqid no:4的位置12、15、16、22、24、46、53、65、80、83、86、87、90、104、115、123、127和140的位置处与seq id no:3中相同位置处的氨基酸残基相比的取代、缺失、插入或其任何组合。
4.根据权利要求1所述的重组ara h 2变体，其中在seq id no:4的位置12-16处的氨基酸包含seq id no:5中列出的序列，或者在seq id no:4的位置44-65处的氨基酸包含seqid no:6中列出的序列，或者在seq id no:4的位置44-67处的氨基酸包含seq id no:9中列出的序列，或者在seq id no:4的位置11-90处的氨基酸包含seq id no:7或seq id no:8中列出的序列。
5.根据权利要求1所述的重组ara h 2变体，其中所述变体还包含在seq id no:4的位置28、44、48、51、55、63、67、107、108、109、124、125或142中的一个或更多个处与seq id no:3中相同位置处的氨基酸残基相比的另外的取代、缺失、插入或其任何组合。
6.根据权利要求5所述的重组ara h 2变体，其中所述另外的取代、缺失、插入或其任何组合包括以下项中的一种或更多种：
7.根据权利要求5所述的重组ara h 2变体，其中所述变体包含2-31个之间的在选自seq id no:4的位置12、15、16、22、24、28、44、46、48、51、53、55、63、65、67、80、83、86、87、90、104、107、108、109、115、123、124、125、127、140或142的位置处与seq id no:3中相同位置处的氨基酸残基相比的取代、缺失、插入或其任何组合。
8.根据权利要求1所述的重组ara h 2变体，其中所述变体包含seq id no:10-63、168、170、195-201、204-210、247-249的任一个中列出的氨基酸序列，或者包含与seq id no:10-63、168、170、195-201、204-210、247-249的任一个中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
9.一种分离的核苷酸或修饰的核苷酸序列，编码根据权利要求1所述的重组ara h 2变体，其中所述核苷酸或修饰的核苷酸序列是dna或mrna。
10.根据权利要求9所述的分离的核苷酸或修饰的核苷酸序列，其中所述核苷酸或修饰的核苷酸序列包含seq id no:167或169的序列，或者包含与seq id no:167或169中列出的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
11.一种表达载体，包含根据权利要求9所述的核苷酸或修饰的核苷酸序列。
12.一种原核细胞或真核细胞，包含根据权利要求11所述的表达载体，其中所述真核细胞是酵母细胞、真菌细胞、植物细胞或哺乳动物细胞。
13.一种组合物，包含根据权利要求1所述的重组ara h 2变体多肽。
14.根据权利要求13所述的组合物，还包含佐剂。
15.一种在对花生过敏的受试者中诱导对花生脱敏的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求13所述的组合物，从而在所述受试者中诱导对花生脱敏。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述组合物通过选自口服、皮下、皮内、肌内、鼻内、舌下、表面、直肠、静脉内、经皮、基因枪途径或通过吸入的途径被施用。
17.一种组合物，包含根据权利要求9所述的核苷酸或修饰的核苷酸序列。
18.根据权利要求17所述的组合物，还包含佐剂。
19.一种在对花生过敏的受试者中诱导对花生脱敏的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求17所述的组合物，从而在所述受试者中诱导对花生脱敏。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述组合物通过选自口服、皮下、皮内、肌内、鼻内、舌下、表面、直肠、静脉内、经皮、基因枪途径或通过吸入的途径被施用。
21.一种重组ara h 1变体多肽，包含一个或更...
【专利技术属性】
技术研发人员：亚奈·奥弗兰，摩西·本大卫，奥利·马库加伯，西·纳夫塔利基罗斯，吉尔·迪亚曼特，阿尔莫格·布雷格曼科恩，玛雅·科尔曼，安娜·丘普林，佐哈尔·拜伦索雷克，利奥尔·罗森菲尔德施拉姆科维奇，埃泰·罗特姆，亚尔·加特，
申请(专利权)人：乌科公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。