【技术实现步骤摘要】
本申请涉及噬菌体的，更具体地说，一种大肠杆菌噬菌体菌株04922c及其表达产物解聚酶depo54和应用。
技术介绍
1、细菌生物被膜主要由细菌分泌的粘液组成，包裹在细菌周围，不仅保护细菌免受宿主免疫细胞的攻击，也使其很难被抗生素或普通消毒剂杀灭，这给临床治疗感染性疾病增添了很大困难。此外，细菌在医疗器械表面形成的生物被膜的存在也是使得器械消毒成为一大难题的主要原因。有研究表明，与浮游形式相比，包裹在生物被膜里的细菌对抗生素的抵御能力提高了10–1000倍。但是，人类并非对生物被膜完全无能为力。目前大量研究显示，噬菌体及其编码的解聚酶对生物被膜有很好的清除效果。
2、噬菌体解聚酶(depolymerase)是一种可以识别并降解细菌多糖的eps水解酶，它一般由噬菌体尾结构蛋白(尾管、尾刺、尾丝)合成。当噬菌体特异性结合细菌时，尾蛋白率先合成并分泌解聚酶，以达到降解生物被膜的目的，使噬菌体可以特异性杀灭细菌。解聚酶具有在琼脂中扩散的能力，该能力比噬菌体的扩散速度快，并且可以分解细菌产生的多糖。因此，为了确定噬菌体是否可以产生解聚酶，有必要观察其透明噬菌斑(plaque)。该区域周围有一个半透明的光晕(halo)，并且光晕随着潜伏时间的增加而扩大。这是噬菌体产生解聚酶以裂解细菌eps的现象，解聚酶的大小介于197至2417个氨基酸之间。
3、根据噬菌体解聚酶的作用机制的不同，噬菌体解聚酶可以分类为水解酶或裂解酶。水解酶包括例如降解荚膜聚唾液酸的唾液酸酶，以及水解lps o-抗原的鼠李糖苷酶；对壁磷壁酸(wta)具
4、目前已有相关研究发现了来源于不同噬菌体的解聚酶，例如来源于例如来源于肺炎克雷伯菌噬菌株p719的噬菌体解聚酶depo58，例如来源于肺炎克雷伯氏菌噬菌株p560的噬菌体解聚酶depo43等。但是针对大肠杆菌噬菌体及其代谢产物解聚酶的相关报道较少。
技术实现思路
1、本申请提供一种大肠杆菌噬菌体菌株04922c及其表达产物解聚酶depo54和应用，该大肠杆菌噬菌体04922c的表达产物解聚酶depo54能够显著降解细菌的膜外多糖，抑制细菌生物被膜的形成；该解聚酶depo54可用于噬菌体解聚酶药剂的制备，应用于生活环境及器械的消毒，具有广阔的应用前景。
2、第一方面，本申请提供一种大肠杆菌噬菌体菌株04922c，采用如下的技术方案：一种大肠杆菌噬菌体菌株04922c，所述大肠杆菌噬菌体菌株04922c(escherichia coliphage04922c)保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:m 2020467，保藏时间为2020年9月4日。
3、通过采用上述技术方案，该大肠杆菌噬菌体菌株04922c能够表达解聚酶depo54，该解聚酶depo54能够降解细菌的膜外多糖，进而高效裂解细菌，起到优异的杀菌作用。
4、可选的，所述大肠杆菌噬菌体菌株04922c的基因组第54位开放阅读框编码解聚酶。
5、第二方面，本申请提供一种噬菌体解聚酶depo54，采用如下的技术方案：
6、一种噬菌体解聚酶depo54，所述噬菌体解聚酶depo54由上述大肠杆菌噬菌体菌株04922c制备得到。
7、该大肠杆菌噬菌体菌株04922c的第54位开放阅读框表达得到噬菌体解聚酶depo54，该解聚酶depo54能够显著降解细菌的膜外多糖，抑制细菌生物被膜的形成。进一步的，该解聚酶depo54可用于噬菌体解聚酶药剂的制备，得到的噬菌体解聚酶药剂用于消毒生活环境及器械，该噬菌体解聚酶depo54具有广阔的应用前景。
8、可选的，所述噬菌体解聚酶depo54的氨基酸序列如seq id no:1所示。
9、可选的，所述所述噬菌体解聚酶depo54的基因序列如seq id no:2所示。
10、可选的，所述噬菌体解聚酶depo54的制备方法包括以下步骤：
11、通过pcr、双酶切以及连接分子克隆获得大肠杆菌噬菌体菌株04922c第54位开放阅读框的depo54基因片段，将所述depo54基因片段连接至质粒载体上，得到重组质粒；
12、将所述重组质粒宿主细胞内，筛选得到含有所述重组质粒的重组宿主细胞；
13、培养所述重组宿主细胞，获得培养液，将所述培养液固液分离后收集液体，得到所述噬菌体解聚酶depo54。
14、可选的，所述质粒载体为质粒载体pgapzαa；所述宿主细胞为毕赤酵母；
15、优选的，所述毕赤酵母选自毕赤酵母smd1168、毕赤酵母gs115以及毕赤酵母x-33中的任意一种。
16、可选的，培养所述重组宿主细胞时，培养方法包括以下步骤：
17、将所述重组宿主细胞接种至ypd液体培养基上，在28-32℃、120-180rpm条件下培养至对数生长期，随后接种至新的ypd液体培养基上培养40-52h。
18、第三方面，本申请提供一种上述噬菌体解聚酶depo54的降解细菌多糖的应用。
19、第四方面，本申请提供一种上述噬菌体解聚酶depo54的辅助抗生素杀灭细菌的应用。
20、可选的，所述抗生素选自恩诺沙星、氟苯尼考、多西环素以及复方新诺明中的任意一种或多种。
21、综上所述，本申请具有以下有益效果：
22、1、本申请首先提供了一种大肠杆菌噬菌体菌株04922c，其基因组第54位开放阅读框编码噬菌体解聚酶depo54；该噬菌体菌株能够表达解聚酶depo54。
23、2、自本申请的大肠杆菌噬菌体04922c获得的噬菌体解聚酶depo54能够破坏细菌的膜外多糖，降低细菌毒力，并且能够高效的抑制生物被膜的形成。
24、3、自本申请的大肠杆菌噬菌体04922c获得的噬菌体解聚酶depo54能够和多种抗生素协同作用，显著提高杀菌效果。
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1.一种大肠杆菌噬菌体菌株04922C，其特征在于，所述大肠杆菌噬菌体菌株04922C（Escherichia coli phage 04922C）保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M 2020467，保藏时间为2020年9月4日。
2.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌噬菌体菌株04922C，其特征在于，所述大肠杆菌噬菌体菌株04922C的基因组第54位开放阅读框编码解聚酶。
3.一种噬菌体解聚酶Depo54，其特征在于，所述噬菌体解聚酶Depo54由权利要求1-2任意一项所述大肠杆菌噬菌体菌株04922C制备得到。
4.根据权利要求3所述的噬菌体解聚酶Depo54，其特征在于，所述噬菌体解聚酶Depo54的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
5.根据权利要求3所述的噬菌体解聚酶Depo54，其特征在于，所述噬菌体解聚酶Depo54的制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的噬菌体解聚酶Depo54，其特征在于，所述质粒载体为质粒载体pGAPZα A；所述宿主细胞为毕赤酵母；
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