【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种那屈肝素钙的制备方法，尤其是涉及一种由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法。
技术介绍
1、肝素是一种高度硫酸化的糖胺聚糖，广泛分布在哺乳动物的组织中，如肝、肺、肠粘膜、心、脾、肾、胸腺、胎盘、肌肉和血液中都有存在。其作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视， 也是我国主要的出口药物之一。相对肝素而言，低分子肝素具有更高的生物活性，更长的半衰期和更少的副作用，低分子肝素类药物现已成为抗血栓抗凝药物的首选。
2、肝素可从猪小肠、牛肺、牛肠、羊小肠等粘膜组织提取，医用肝素的主要来源是猪肠粘膜肝素。猪来源肝素的市场垄断已成为肝素类药物市场不稳定的主要潜在因素，一旦猪来源肝素出现安全问题，无其他可替代物种来源，则肝素类抗凝药物市场将直接崩溃，开发羊肝素是当今猪肝素的重要和有益补充。原料羊肝素钠简便易得，质量可控，可极大丰富市场中低分子肝素和清真药物的来源和产量，还可以促进羊养殖和屠宰废料(肠粘膜)的有效利用，经济潜力巨大。
3、那屈肝素钙是的一种抗凝药物，属于低分子肝素的一种。通常生产方法是以精品肝素钠为原料，先利用亚硝酸钠降解，硼氢化钠还原制备低分子量肝素钠溶液，再进行钙钠离子置换，最后将钙钠离子置换后的置换液过滤、冻干、粉碎获得那屈肝素钙成品。由于原料对后期那屈肝素钙成品质量有直接影响，因而起始原料和制备过程的研究与控制就必须严格。并且目前常规后续转钙工序操作较繁琐，且制备效率低。因此，开发从羊源肝素钠粗品制备羊源那屈肝素钙的新方法既从源头和工艺控制原料质量，有效保证了成品质量，也缩短工艺周
4、cn107759712a公开了羊来源的低分子肝素及其制备方法与应用，包括羊 达肝素钠、羊那屈肝素钙、羊亭扎肝素钠、羊帕肝素钠和羊贝米肝素钠。其中羊那屈肝素钙的制备方法仅是参照猪源那屈肝素钙的制备方法进行了简单的描述，工艺制备路线粗糙，产品质量无法保证。cn104163878a提供了一种从肝素钠粗品生产那屈肝素钙的方法，其通过离心、氯化钙盐析转钙、醋酸钙盐析转钙，生产出肝素钠，再经降解还原醇沉后，氯化钡除硫酸根、树脂吸附洗脱、氧化、醇沉，烘干制得那屈肝素钙。该生产方法肝素钠除杂步骤不能保证肝素钠质量，进而影响制备出的那屈肝素钙质量。制备那屈肝素钙时还使用氯化钡，毒性较大，不易去除，终产品安全性难以保证。cn1554671a的中国专利公开了“一种低亚硝酸盐含量的低分子肝素钙的制备方法”，其基于亚硝酸盐法将低分子量肝素钠经多次酸碱反应转变为低分子量肝素钙，虽然其成功降低了亚硝酸盐的含量，但制备过程中ph值较低，加上后续转钙步骤中酸碱强烈的中和反应，造成了抗xa因子效价损失，影响产品质量，同时此工序操作较繁琐，可能引入其它试剂杂质。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是提供一种由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，该方法工艺稳定，制备周期短，产品收率高，质量好，环境影响小；制备出的羊源那屈肝素钙降低了低分子肝素钠单一物种来源的风险，同时具有猪源低分子肝素所不具有的清真性，市场潜力巨大。
2、为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
3、一种由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，包括如下步骤：
4、(1) 将羊源肝素钠粗品加入到10~30 g/l的氯化钙溶液溶解，盐解1~3h。升温至80~90℃，搅拌15~30min，降温至25℃以下。
5、(2) 将步骤（1）的反应液输送至离子交换柱中吸附，用30~50 g/l的氯化钙溶液洗涤，洗涤至15~25倍柱床体积，停止洗涤；用130~150g/l的氯化钙溶液洗脱，洗脱至2~6倍柱床体积，停止洗脱收集洗脱液。加入乙醇至乙醇浓度为25%~35%，静置沉淀8h以上，去除上清，得沉淀物。
6、(3) 向步骤（2）的沉淀物中加入纯化水溶解，温度升至20~30℃，调节ph值9.0~11.0，加入氧化剂，氧化8~16h。加入2~4倍乙醇沉淀，静置沉淀8h以上，去除上清，得沉淀物。溶解沉淀物，经微孔滤膜过滤，真空干燥后得羊源肝素钙精品。
7、(4) 将步骤（3）所得羊源肝素钙精品用纯化水溶解，调节温度为18~25℃，调ph值至2.0~4.0，加入亚硝酸钠溶液，进行降解反应2.0~6.0h。调节ph值至9.0~10.0，加入肝素钙精品质量0.5%~2.0%的硼氢化钠，搅拌反应12~24h。
8、(5)调节步骤（4）的反应液ph值至6.0~8.0，加入乙醇，调节溶液中乙醇浓度为25%~35%，静置沉淀8h以上。分离上清液，得沉淀物i。上清液加入4~6倍乙醇沉淀，静置沉淀8h以上。去除上清，得沉淀物ii。
9、(6)将步骤（5）的沉淀物i加入纯化水溶解，调节温度为18~25℃，调ph值至2.0~4.0，加入亚硝酸钠溶液，进行降解反应2.0~6.0h。调节ph值至9.0~10.0，加入肝素钙精品质量0.5%~2.0%的硼氢化钠，搅拌反应12~24h。
10、(7)将步骤（5）的沉淀物ii用5~15倍纯化水溶解，与步骤（6）的反应液合并，调ph值至6.0~8.0，用紫外灯照射1.0~3.0h。
11、(8)使用超滤膜对步骤（7）的溶液进行超滤，超滤完成将溶液分装至冷冻干燥盘中，真空冷冻干燥后的羊源那屈肝素钙。
12、进一步的，步骤（1）中，溶解羊源肝素钠粗品的氯化钙溶液用量为每1亿单位溶于5~10l。
13、进一步的，步骤（2）中，离子交换柱为阴离子交换柱，所用树脂型号为oc1074，fpa-98或a600mb。
14、进一步的，步骤（3）中，所述氧化剂优选为过氧化氢，用量为溶液体积的0.5%~3%；所得沉淀物吸光度检测400nm与470nm之差＜0.015。
15、进一步的，步骤（4）和步骤（6）中，亚硝酸钠加入量为羊源肝素钙精品质量的0.3%~3%。
16、进一步的，步骤（9）中，超滤过程采用1kd或3kd超滤膜。
17、采用上述方案，具有以下优点：
18、(1)摒弃了常规使用氯化钠进行粗品盐解、纯化的方法，在工艺初期就采 用钙盐，并贯穿于整个制备工艺，达到较佳纯化效果的同时，也保证了产品钙含量的稳定。
19、(2)采用层析技术，分离纯化羊源肝素钠粗品和转钙同时进行，尤其在洗涤、洗脱过程采用了特定浓度的氯化钙溶液，去除核酸、蛋白质，有效保护了肝素活性基团，同样也精准控制了产品中钙含量，完成了肝素钙钠置换过程，后续由精品肝素钙直接降解为那屈肝素钙，减少后期转钙工序，缩短了工艺步骤，提高了制备效率。同时采用过氧化氢氧化工艺，通过特定工艺条件，有效除去羊源肝素粗品的颜色，同时最大限度的保护了肝素活性，效价收率可达95%以上。
20、(3)采用两次降解法对制备的羊源肝素钙精品进行解聚反应，避免了一次降解时反应剧烈而引起的分子量剧烈变化，降低产生的无用片段比例；同时采用分级沉淀对降解过程产生的合适的分子链段进行了保护，减少本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，步骤（1）中，每1亿单位羊源肝素钠粗品溶于5~10L氯化钙溶液中。
3.根据权利要求1所述的由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，步骤（2）中，离子交换柱为阴离子交换柱，所用树脂型号为OC1074、FPA-98或A600MB。
4.根据权利要求1所述的由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，步骤（3）中，所述氧化剂为过氧化氢，其用量为反应溶液体积的0.5%~3%；所得沉淀物吸光度检测400nm与470nm之差＜0.015。
5.根据权利要求1所述的由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，步骤（4）和步骤（6）中，亚硝酸钠加入量为羊源肝素钙精品质量的0.3%~3%。
6.根据权利要求1所述的由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，步骤（9）中，超滤过程采用1KD或3KD超滤膜。
【技术特征摘要】
1.一种由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，步骤（1）中，每1亿单位羊源肝素钠粗品溶于5~10l氯化钙溶液中。
3.根据权利要求1所述的由羊源肝素钠粗品制备高质量那屈肝素钙的方法，其特征是，步骤（2）中，离子交换柱为阴离子交换柱，所用树脂型号为oc1074、fpa-98或a600mb。
4.根据权利要求1所述的由羊源肝素钠粗品制备...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄栋，杜曦，田志鹏，张灿，董艳丽，兰舫，郄正刚，张晓云，白文举，
申请(专利权)人：河北常山生化药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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