一种依替非巴肽的合成制备工艺制造技术

本发明专利技术提供了一种依替非巴肽的合成制备工艺，所述方法如下：（１）液相合成肽段１：Ｍｐｒ（Ｘ）－Ｈａｒ（Ｒ４）－Ｇｌｙ－ＯＨ；（２）液相合成肽段２：Ｒ１－Ａｓｐ（Ｒ２）－Ｔｒｐ（Ｒ３）－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ｙ）－ＮＨ２；（３）将肽段１和肽段２缩合，制得全保护的肽段３：Ｍｐｒ（Ｘ）－Ｈａｒ（Ｒ４）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（Ｒ２）－Ｔｒｐ（Ｒ３）－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ｙ）－ＮＨ２；（４）将肽段３脱保护基，得到线性肽：Ｍｐｒ（Ｘ）－Ｈａｒ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｔｒｐ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ｙ）－ＮＨ２；（５）将线性肽氧化合成二硫桥键，制得环肽：本发明专利技术采用先合成线性肽，再环化的方法，使得收率大幅度提高，最后通过纯化制备得到产品，成本降低，适合于工业生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种依替非巴肽的合成制备工艺，属于生物
(二)
技术介绍
冠心病是西方发达国家的第一死亡原因，每年有数百万人发病，我国虽然发病率不如西方发达国家，但是每年约有100 200万人，并且有不断上升的趋势，虽然现代技术可以采用成形或者搭桥手术进行治疗，但是手术后再次生病的几率比较高，而且还需要药物治疗。而依替非巴肽正是一种高效的血小板多肽拮抗剂，这种药物要能够直接阻断血小板糖蛋白受体和配体的结合，从而使心脏得到供血，减轻或者消除冠心病的症状。 关于依替非巴肽的合成报道已经有很多，涉及到固相合成以及部分液相合成方法。 目前在世界上作为此产品的原研厂商bechem公司，对此产品的合成主要包 含两个合成方案。分别是液相合成法和固相合成法，液相合成法主要是通过片段多肽 的合成，包含如下合成步骤1、首先通过最常规的多肽縮合方法，合成三肽片段(Trt) Mpr-Lys(TFA)-Gly-Ome，然后通过胍基化反应将Lys转变为Har，之后进行皂化和酸中和 得到(Trt)Mpr-Lys(TFA)-Gly-OH。 2、利用活化酯的方法制备Z-Asp (otbu)-OSu，然后与 二肽Trp-Pro-0H反应，得到多肽片段三肽Z-Asp (otbu) -Trp-Pro-OH。 3、将上述两个片 段縮合，得到六肽片段(Trt)Mpr-Har-Gly-Asp (otbu)-Trp-Pro-OH。 4、将六肽片段(Trt) Mpr-Har-Gly-Asp (otbu) -Trp-Pro-OH与Cys (Trt) _NH2縮合，得到线性肽七肽(Trt)Mpr-Ha r-Gly-Asp (otbu) -Trp-Pro-Cys (Trt) _NH2。 5、将(Trt)Mpr-Har-Gly-Asp (otbu) -Trp-Pro-C ys (Trt) -NH2七肽环化成粗产品，然后纯化得到高纯度的产品。 而在世界专利W02005100381中讲到了 3+3+1片段法，是p印tisyntha公司的关于 工业范围内多肽GMP生产会议上提到了 (Trt) Mpr-Har-Gly和Asp-Trp-Pro和Cys (Trt)，然 后专利通过比较和介绍，最后推出的合成路线是Har-Gly-Asp (otbu) -Trp-Pro-Cys (Npys) 和Mpr的合环，具体是先合成六肽直链(Har-Gly-Asp (otbu) -Trp-Pro-Cys (Npys) _NH2)，然 后先进行硫桥键的合成，得到Har-Gly-Asp (otbu) -Trp-Pro-Cys (NH2) -S-S-Mpr，之后再合 成酰胺键，最后脱出保护基，得到最终产品。 路线如下 3<image>image see original document page 4</image> 在W02005121164中提到的是固相合成法，采用的是先合成中间体直链七肽(采用 lys) (acm)Mpr-lys (boc) _Gly_Asp (otbu) _Trp_Pro_Cys (acm) -resin，然后才通过切割树月旨 得到七肽的保护肽(acm)Mpr-lys-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys (acm) _NH2，这个时候通过胍基化 反应将lys转变为高精氨酸，得到直链(acm)Mpr-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2，最 后，采用碘环化的方法得到硫桥键，制得最终产品。 另外，在世界专利W02006045483A2中也是报导了固相合成法，但是他采用的是在 树脂上就合环的方法。采用Fmoc-Cys (tbu) -Sieber为起始原料通过固相接肽，从而得到(M pr) 2-Har-Gly-Asp (tbu) -Trp (boc) -Pro- Cys (tbu) -Sieber，之后使用BU3P进行硫上保护基的脱除，然后再使用NMP和6%的DIEA合成硫桥键，最后裂解得到产品。 FmooCys(S.-tBu)-MH -PeptideCycle1》20% Pipeilc(ine in NMP, 3.x, 15 rnSn ■2》NMP washes3) :Fmoc:-AA-OH (2,0 equiv.),4) NMP washesHCTU, W-HOBt, DiE/V國PZDCM NMP washes 5) dedvat，ze with (Mpa)^《,a)2-Har-G隨y-As.p{tBuKtrp(BoG)-F TO-Cys(S旧U)-MH ■FBu3 mediated e画的v的e cycti:eatictn on supportMpa-H錢r-Gly-Asp(旧u)-Trp《Bot 卜Pro-Cys-WH -Cleavage from the resi;n Global depiofectionM pa-Har- Gly-Asp-Trp-Pro-Cys'-N H2 S__i 世界专利W02006119388A2中也是采用了固相合成法(仅仅是提到而已)，采用的 是在树脂上合成Mpr (Trt) -Har-Gly-Asp (tbu) -Trp-Pro-OH，再和Cys (acm) _NH2反应得到M pr (Trt) -Har-Gly-Asp (tbu) -Trp-Pro-Cys (acm) _NH2，之后使用TFA除去侧链保护基，得到M pr-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys (acm) _朋2，最后环化得到目标产品。 欧洲专利EP1591449B1中主要研究的是多肽中二硫桥键的合成条件，而且主要是 研究了反应的最佳环化条件和PH值，研究结果如下通过对于含有巯基磺酸盐和-SH(酸不 稳定保护基)的直链肽合成，之后在无水酸的条件下脱去保护，在30度，pH值二 8. 3的情况 下得到的产品收率比值为最佳。通过相关资料得到环化的两个条件(1)、在强力搅拌下，溶 齐U为methylene chloride : methano : water = 6. 0 : 2. 5 : 0. 42， 2umo1产品在2. Oml (或 者0. 4ml)溶剂中，methylenechloride : methanol = 8. 0 : 1. 5时，2. 03mg (8pmo1)的碘 在2ml(或者0. 4ml)溶液中。依替非巴肽化学式为:M，r-Gly-Asp-Trp-Pro-Cjys -,2 结构式如下 5<formula>formula see original document page 6</formula> 固相合成中需要使用大量的昂贵的多肽树脂，这给企业的大规模生产带来了成本 的压力。而世界专利W02005100381中提到的液相方法，在最后环化和偶联步骤中的收率不 高，致使未参与反应的六肽原料浪费严重。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种收率高、成本低的依替非巴肽的合成方法。 本专利技术采用的技术方案是 —种依替非巴肽的合成方法，所述方法包括如下步骤 (1)液相合成肽段1 :Mpr (X) -Har (R4) -Gly-OH ; (2)液相合成肽段2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种依替非巴肽的合成制备工艺，所述方法包括如下步骤：　　（１）液相合成肽段１：Ｍｐｒ（Ｘ）－Ｈａｒ（Ｒ↓［４］）－Ｇｌｙ－ＯＨ；　　（２）液相合成肽段２：Ｒ↓［１］－Ａｓｐ（Ｒ↓［２］）－Ｔｒｐ（Ｒ↓［３］）－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ｙ）－ＮＨ↓［２］；　　（３）将肽段１和肽段２缩合，制得全保护的肽段３：Ｍｐｒ（Ｘ）－Ｈａｒ（Ｒ↓［４］）－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（Ｒ↓［２］）－Ｔｒｐ（Ｒ↓［３］）－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ｙ）－ＮＨ↓［２］；　　（４）将肽段３脱保护基，得到线性肽：Ｍｐｒ（Ｘ）－Ｈａｒ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｔｒｐ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ｙ）－ＮＨ↓［２］、或Ｍｐｒ（Ｘ）－Ｈａｒ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｔｒｐ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－ＮＨ↓［２］、或Ｍｐｒ－Ｈａｒ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｔｒｐ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（Ｙ）－ＮＨ↓［２］、或Ｍｐｒ－Ｈａｒ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｔｒｐ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－ＮＨ↓［２］；　　（５）将线性肽氧化合成二硫桥键，制得环肽：　　Ｍｐｒ－Ｈａｒ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｔｒｐ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－ＮＨ↓［２］　　其中：　　Ｒ１为Ｆｍｏｃ－，Ｚ－，或者Ｂｏｃ－；　　Ａｓｐ（Ｒ↓［２］）为侧链Ｒ↓［２］保护的天冬氨酰基；Ｒ↓［２］为－Ｏｔｂｕ或者－Ｏｂｚｌ；　　Ｔｒｐ（Ｒ↓［３］）为侧链Ｒ↓［３］保护的色氨酰基；Ｒ↓［３］为－Ｂｏｃ或者－Ｈ；　　Ｈａｒ（Ｒ↓［４］）为侧链Ｒ↓［４］保护的高精氨酰基；Ｒ↓［４］为－Ｐｂｆ、－Ｍｔｒ、－Ｍｂｓ、－Ｂｏｃ、（Ｂｏｃ）↓［２］或者氢；　　Ｍｐｒ（Ｘ）为巯基Ｘ保护的巯基丙酸；Ｘ为－Ａｃｍ或－Ｔｒｔ；　　Ｃｙｓ（Ｙ）－ＮＨ↓［２］为巯基Ｙ保护的半胱氨酰胺；Ｙ为－Ａｃｍ或－Ｔｒｔ。...

【技术特征摘要】
一种依替非巴肽的合成制备工艺，所述方法包括如下步骤(1)液相合成肽段1Mpr(X)-Har(R4)-Gly-OH；(2)液相合成肽段2R1-Asp(R2)-Trp(R3)-Pro-Cys(Y)-NH2；(3)将肽段1和肽段2缩合，制得全保护的肽段3Mpr(X)-Har(R4)-Gly-Asp(R2)-Trp(R3)-Pro-Cys(Y)-NH2；(4)将肽段3脱保护基，得到线性肽Mpr(X)-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Y)-NH2、或Mpr(X)-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH2、或Mpr-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Y)-NH2、或Mpr-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH2；(5)将线性肽氧化合成二硫桥键，制得环肽其中R1为Fmoc-，Z-，或者Boc-；Asp(R2)为侧链R2保护的天冬氨酰基；R2为-Otbu或者-Obzl；Trp(R3)为侧链R3保护的色氨酰基；R3为-Boc或者-H；Har(R4)为侧链R4保护的高精氨酰基；R4为-Pbf、-Mtr、-Mbs、-Boc、(Boc)2或者氢；Mpr(X)为巯基X保护的巯基丙酸；X为-Acm或-Trt；Cys(Y)-NH2为巯基Y保护的半胱氨酰胺；Y为-Acm或-Trt。F200910156804XC00011.tif2. 如权利要求l所述依替非巴肽的合成制备工艺，其特征在于所述步骤(1)如 下先合成NH2-Gly-0me，然后和a氮端保护的Har (R4)反应，得到a氮端保护的 Har (R4) -Gly-Ome脱a氮端保护之后与Mpr ...

【专利技术属性】
技术研发人员：路杨，徐峰，杨东晖，穆斌，
申请(专利权)人：江苏诺泰制药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]