【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于蛋白检测荧光探针，具体涉及一种特异性人血清蛋白检测荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、人血清蛋白(hsa)，是人类血液中最丰富的蛋白质，占血浆总蛋白的60％，在调节渗透压，运输营养物质、代谢物质、药物分子等方面起着至关重要的作用。血浆中的hsa浓度通常在35-50g/l区间，而在尿白蛋白的浓度通常不超过30mg/l(0.45m)。尿液中过多的hsa可导致微量白蛋白尿，这一现象可用于诊断糖尿病和高血压患者心血管疾病和早期肾脏疾病。到目前为止，hsa的检测方法主要包括蛋白质组学技术，放射免疫分析，电化学和荧光探针技术。相比于其他技术的高成本、操作过程麻烦、检测周期长等技术问题，荧光探针技术基于可控的有机合成策略，以可视化的荧光发光作为检测信号，具有响应时间快(荧光显示速度可达秒级)、灵敏度高、操作简单，价格便宜等优点收到广泛关注。然而，现有的hsa荧光探针大多合成较为复杂，在成本方面仍有待进一步降低。另一方面，现有的hsa荧光探针应用于样品直接检测的案例极少，检测效果较差。因此，发展可对实际生物样品进行直接检测的高灵敏度、选择性hsa荧光探针及配套的快速高效检测方法，对上述疾病的快速诊断具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种对hsa蛋白有特异性响应的小分子荧光探针及其制备方法和应用。该荧光探针结构为基于4-位n原子取代的1,8-萘酰亚胺有机小分子，其结构中具有甲硫基苯胺和吡啶盐片段，甲硫基苯胺可以实现萘酰亚胺聚集诱导发光，而吡啶盐片段提供了分子较
2、一种特异性人血清蛋白检测荧光探针，为结构式(i)所示化合物：
3、
4、上述荧光探针的制备方法，其合成路线如下
5、
6、包括以下步骤：
7、a、中间体ni的合成：
8、4-溴-1,8-萘酐和4-氨基吡啶溶于溶剂中，经加热反应，后处理得n-(4’-吡啶基)-4-溴-1,8-萘酰亚胺；溶剂优选为无水乙醇。
9、b、ni1的合成
10、n-(4’-吡啶基)-4-溴-1,8-萘酰亚胺、3-甲硫基苯胺、碳酸铯、双(三苯基膦)二氯化钯(ⅱ)和三苯基膦溶于干甲苯中，经加热反应，后处理得n-(4’-吡啶基)-4-(3’-甲硫基苯胺基)-1,8-萘酰亚胺；
11、c、ni2的合成
12、n-(4’-吡啶基)-4-(3’-甲硫基苯胺基)-1,8-萘酰亚胺、碘甲烷溶于丙酮溶液中，经加热反应，后处理得n-(4’-对甲基吡啶)-4-(3’-甲硫基苯胺基)-1,8-萘酰亚胺。
13、优选的，在a中，所述4-溴-1,8-萘酐、4-氨基吡啶摩尔比为1：1.1-1.5；4-溴-1,8-萘酐与溶剂的用量比为1mmol：0.7-0.85ml；反应条件如下：70-90℃氮气气氛回流，后处理条件为:反应结束后所得溶液冷却至室温，减压过滤收集沉淀，产品彻底干燥。
14、进一步的，步骤a反应条件如下：80℃氮气气氛回流过夜，其中，4-溴-1,8-萘酐、4-氨基吡啶、乙醇的摩尔体积比为1mmol：1.5mmol：0.85ml。
15、优选的，在b中，n-(4’-吡啶基)-4-溴-1,8-萘酰亚胺、邻甲硫基苯胺、碳酸铯、双(三苯基膦)二氯化钯(ⅱ)、三苯基膦、干甲苯的摩尔体积比为1mmol：1.1-1.15mmol：3-5mmol：0.1-0.16mmol：0.4-0.63mmol：1.5-1.8ml；
16、b的反应条件如下：在氮气气氛下100-120℃，加热9-11h，后处理条件为：反应结束后减压蒸发溶剂，用水和二氯甲烷提取，有机层产物硅胶柱层析。
17、进一步的，b的反应条件如下：在氮气气氛下110℃，加热9h，其中n-(4’-吡啶基)-4-溴-1,8-萘酰亚胺、邻甲硫基苯胺、碳酸铯、双(三苯基膦)二氯化钯(ⅱ)、三苯基膦、干甲苯的摩尔体积比为1mmol：1.15mmol：5mmol：0.16mmol：0.63mmol：1.8ml。
18、优选的，在c中，n-(4’-吡啶基)-4-(3’-甲硫基苯胺基)-1,8-萘酰亚胺、碘甲烷、丙酮的摩尔体积比为1mmol：35-45mmol：18-21ml；s2的反应条件如下：在50-60℃下反应24-36h,后处理条件为：待反应结束后，将冷却的混合物进行减压过滤，用索氏提取器在石油醚中提纯滤饼。
19、进一步的，c的反应条件如下：在50℃下反应24h,其中，n-(4’-吡啶基)-4-(3’-甲硫基苯胺基)-1,8-萘酰亚胺、碘甲烷、丙酮的摩尔体积比为1mmol：45mmol：21ml。
20、上述荧光探针应用于制备检测生物样品中hsa的试剂、试纸或试剂盒。
21、上述荧光探针或上述试剂、试纸或试剂盒应用于检测生物样本中hsa。
22、生物样品中hsa的检测方法，包括以下步骤：将上述的荧光探针或上述的试剂溶解于待测生物样品中或将上述的试纸浸入待测生物样品中，以450nm为激发波长，测定480-750nm处的荧光强度，进行定性或定量检测。
23、优选的，所述生物样品为尿液或血液。
24、进一步的，所述生物样品为尿液。
25、本专利技术的有益效果是：该荧光探针结构为基于4-位n原子取代的1,8-萘酰亚胺有机小分子，其结构中具有甲硫基苯胺和吡啶盐片段，甲硫基苯胺可以实现萘酰亚胺聚集诱导发光，而吡啶盐片段提供了分子较好的水溶性，并且其正电性可与负电的hsa实现静电相互作用，从而输出增强型的发光信号。该探针在多种缓冲溶液和实际尿样中均显示出对hsa的高选择性、高灵敏度响应。
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1.一种特异性人血清蛋白检测荧光探针，其特征在于，为结构式(I)所述化合物：
2.权利要求1所述的一种特异性人血清蛋白检测荧光探针的制备方法，其特征在于,包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于,S1中，N-(4’-吡啶基)-4-溴-1,8-萘酰亚胺、间甲硫基苯胺、碳酸铯、双(三苯基膦)二氯化钯(Ⅱ)、三苯基膦、干甲苯的摩尔体积比为1mmol：1.1-1.15mmol：3-5mmol：0.1-0.16mmol：0.4-0.6mmol：40-50mL；S1的反应条件如下：在氮气气氛下100-120℃，加热9-11h。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于,在S2中，N-(4’-吡啶基)-4-(3’-甲硫基苯胺基)-1,8-萘酰亚胺、碘甲烷、丙酮的摩尔体积比为1mmol：35-45mmol：5-7mL；S2的反应条件如下：在50-60℃下反应24-36h。
5.权利要求1所述的荧光探针在制备检测生物样品中HSA的试剂、试纸或试剂盒方面的应用。
6.权利要求1所述的荧光探针或权利要求5所述的试剂、试
7.一种生物样品中HSA的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述生物样本为尿液或血液。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性人血清蛋白检测荧光探针，其特征在于，为结构式(i)所述化合物：
2.权利要求1所述的一种特异性人血清蛋白检测荧光探针的制备方法，其特征在于,包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于,s1中，n-(4’-吡啶基)-4-溴-1,8-萘酰亚胺、间甲硫基苯胺、碳酸铯、双(三苯基膦)二氯化钯(ⅱ)、三苯基膦、干甲苯的摩尔体积比为1mmol：1.1-1.15mmol：3-5mmol：0.1-0.16mmol：0.4-0.6mmol：40-50ml；s1的反应条件如下：在氮气气氛下100-120℃，加热9-11h。
4.根据权利要求2所...
【专利技术属性】
技术研发人员：瞿祎，黄文灵，王乐，周慧敏，蒋娜，吕心雨，刘婷婷，王一邱，黄子仪，
申请(专利权)人：上海工程技术大学，
类型：发明
国别省市：
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