一种检测百合杂交亲本可配性的方法技术

技术编号：41199016 阅读：20 留言：0更新日期：2024-05-07 22:26

本发明专利技术提供了一种检测百合杂交亲本可配性的方法，包括以下步骤：取父本的单粒花粉若干粒为母本的雌蕊授粉，每粒花粉之间不相互叠加，后统计花粉萌发率和/或受精率评价母本和父本的杂交可配性。本发明专利技术的方法能够在百合杂交育种过程中提前检测父本花粉的萌发率和亲本双方的可配性，避免无效杂交，提高育种效率。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于作物育种领域，具体涉及一种检测百合杂交亲本可配性的方法。

技术介绍

1、百合是百合科百合属植物的统称，因其花大色艳，香味浓郁，深受人们的喜爱。目前百合新种质的培育主要依赖杂交育种，但由于部分百合存在种间杂交不亲和，经常出现杂交不结实或后代结实率低等现象。为了解决盲目杂交导致杂交效率低的问题，育种者通常会通过花粉体外萌发实验检测百合杂交亲本中父本一方的花粉萌发率，常用的做法是配置固体或液体花粉萌发培养基，将花粉涂抹或置于培养基中，在合适的温度下培养数个小时后，显微镜下观察花粉的萌发情况。体外萌发实验检测花粉萌发率具有很大的局限性，花粉培养基不能完全模拟柱头的真实环境，无法检测花粉在柱头上发生水合的过程中的雌雄识别机制，也无法呈现花粉管伸长后是否达到了胚珠，因此即使在杂交前做了父本花粉体外萌发实验，也无法确认花粉授在母本柱头上后是否能正常萌发和受精。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于检测百合杂交亲本可配性，提高百合杂交育种的效率。

2、本专利技术提供一种检测百合杂交亲本可配性的方法，包括以下步骤：取作为父本的百合单粒花粉若干粒给作为母本的百合雌蕊授粉，每两粒花粉粒之间不相互粘连，根据花粉萌发率和/或受精率评价母本和父本的杂交可配性。

3、上述方法中，所述取作为父本的百合单粒花粉若干粒利用挑取单粒花粉的装置进行，所述挑取单粒花粉的装置为将长度为1.5-2.0cm的一根狼毫固定在一根棍上得到，所述狼毫朝外露出长0.8-1.0cm的尖端。

<p>4、上述方法中，所述棍可为长度5-7cm、直径0.1cm-0.5cm的棍状物，例如牙签(长度可为6cm、直径可为0.2cm)等。

5、上述方法中，所述授粉中每个雌蕊授粉20～30粒单粒花粉，每种母本授粉至少10个雌蕊。

6、上述方法中，所述花粉为盛开期父本的花粉。

7、上述方法中，所述授粉，为a1或a2：

8、a1、取所述母本开放前一天花朵去掉花被片和花药，保留雌蕊，将单粒花粉粒若干粒放到雌蕊的柱头上，均匀分布，每两粒花粉粒之间不相互粘连；

9、a2、取所述母本开放前一天花朵去掉花被片和花药，并切掉雌蕊的包括柱头在内的花柱上半部分，保留雌蕊的花柱下半部分和子房，将单粒花粉粒若干粒放到花柱切面上，均匀分布，每两粒花粉粒之间不相互粘连。

10、上述方法中，所述授粉，授粉前后套住柱头或花柱切面，防止被其它花粉污染。

11、上述方法中，所述花粉萌发率和/或受精率的测定方法均为脱色后以4mol/lnaoh溶液浸泡至透明，再以苯胺蓝染色，通过荧光显微镜在紫外光的激发下观察花粉管进行统计。

12、上述方法中，所述脱色为以脱色液浸泡，所述脱色液为无水乙醇和乙酸按照无水乙醇:乙酸＝3:1的体积比混合得到。

13、上述方法中，所述脱色为以脱色液浸泡24小时，每8小时更换一次脱色液。

14、上述方法中，所述以4mol/l naoh溶液浸泡至透明，为浸泡12-24小时。

15、上述方法中，所述以苯胺蓝染色采用苯胺蓝染液，所述苯胺蓝染液为将苯胺蓝粉末按照0.1％(w/v)的浓度溶于ph值为11的k2hpo4-koh缓冲液中得到的溶液。

16、上述方法中，所述以苯胺蓝染色，为以苯胺蓝染液浸泡后置于黑暗条件下染色8小时。

17、上述方法中，所述花粉萌发率，授粉后48小时进行测定。

18、上述方法中，所述花粉萌发率按公式1计算：

19、花粉萌发率＝花粉管数量/总花粉数％公式1

20、上述方法中，所述受精率，授粉后96～120小时进行测定。

21、上述方法中，所述受精率按公式2计算：

22、受精率＝到达胚珠的花粉管数量/总花粉数％公式2

23、本专利技术还保护挑取单粒花粉的装置，其为将长度1.5-2.0cm的一根狼毫固定在小棍上得到，所述狼毫朝外露出长0.8-1.0cm的尖端。

24、上述装置中，所述小棍可为长度5-7cm、直径0.1cm-0.5cm的棍状物，例如牙签(长度可为6cm、直径可为0.2cm)。

25、上述方法和/或装置在百合育种中的应用也属于本专利技术的保护范围。

26、本专利技术提供了一种检测百合杂交亲本可配性的方法，该方法使用一种特殊的装置将父本花粉涂抹在母本柱头上，再通过花粉管染色等步骤对花粉萌发率和花粉管与胚珠的识别过程进行检测。该方法能够在百合杂交育种过程中提前检测父本花粉的萌发率和亲本双方的可配性，避免无效杂交，提高育种效率。

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【技术保护点】

1.一种检测百合杂交亲本可配性的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述取作为父本的百合单粒花粉若干粒利用挑取单粒花粉的装置进行，所述挑取单粒花粉的装置为将长度为1.5-2.0cm的一根狼毫固定在一根棍上得到，所述狼毫朝外露出长0.8-1.0cm的尖端。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述授粉中每个雌蕊授粉20～30粒单粒花粉，每种母本授粉至少10个雌蕊。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述授粉为A1或A2：

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述花粉萌发率和/或受精率的测定方法均为脱色后以4mol/L NaOH溶液浸泡至透明，再以苯胺蓝染色，通过荧光显微镜在紫外光的激发下观察花粉管进行统计。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述脱色为以脱色液浸泡24小时，每8小时更换一次脱色液；所述脱色液为无水乙醇和乙酸按照无水乙醇:乙酸＝3:1的体积比混合得到。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述浸泡至透明，为浸泡12-24小时。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述以苯胺蓝染色，为以苯胺蓝染液浸泡后置于黑暗条件下染色8小时。

9.挑取单粒花粉粒的装置，其特征在于：所述的装置为将长度1.5-2.0cm的一根狼毫固定在一根棍上得到，所述狼毫朝外露出长0.8-1.0cm的尖端。

10.权利要求1-8任一所述的方法或权利要求9所述的装置在百合育种中的应用。

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【技术特征摘要】

1.一种检测百合杂交亲本可配性的方法，其特征在于：包括以下步骤：

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述授粉中每个雌蕊授粉20～30粒单粒花粉，每种母本授粉至少10个雌蕊。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述授粉为a1或a2：

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述花粉萌发率和/或受精率的测定方法均为脱色后以4mol/l naoh溶液浸泡至透明，再以苯胺蓝染色，通过荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：窦晓莹，白锦荣，孔滢，王欢，郎利新，
申请(专利权)人：北京市科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：

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