【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及预制载体在制备用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中的应用。
技术介绍
1、细胞和基因疗法应用前景非常广阔，有望从源头治愈多种疾病。细胞治疗是指获取具有特定功能的细胞，通过体外操作使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞等功能，将其输入或植入人体用于疾病治疗，包括免疫细胞和干细胞治疗。而基因治疗是将外源正常基因导入靶细胞内纠正因缺陷和异常基因引起的疾病，使目的基因能在细胞中得到表达以治疗疾病。基因治疗可分为体内和体外基因治疗。
2、在生物医学领域，免疫细胞、干细胞以及核酸的研究与应用已经成为前沿和热点。免疫细胞，如t细胞、b细胞、nk细胞等，在人体免疫系统中起着关键的作用，能够识别和攻击外来病原体以及癌细胞。干细胞则具有自我更新和多向分化的能力，被广泛应用于再生医学和组织工程中。而核酸，包括dna和rna，是生物体遗传信息的携带者，同时也具有调控基因表达的功能，因此在基因治疗和疫苗研发等领域具有巨大的潜力。
3、想要将生物大分子递送到细胞内进行基因组编辑，含有这些生物大分子颗粒首先要避免细胞外的障碍。这些障碍包括被巨噬细胞吞噬细胞吞噬，或者是被酶降解或水解，以及诱导免疫反应和产生细胞因子的能力。如果这些生物大分子和纳米颗粒可以避免被身体排斥，能进入合适的器官或血液中，它们还必须进入靶细胞。一旦进入细胞，生物大分子和纳米颗粒必须逃脱内涵体，定位于细胞质的mrna或细胞核成功地编辑目标基因。
4、目前，细胞和基因疗法主要依靠化学介导法、物理介导法以及病毒介导
5、基于此，本专利技术提供预制载体在制备用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中的应用，将基因编辑药物与预制载体在溶液状态下简单混合，即可实现对基因编辑药物的安全、有效递送。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术存在的问题，提供预制载体在制备用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中的应用。本专利技术的预制载体在制备用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中的应用，包括将预制载体与核酸在溶剂中混合，得到基于预制载体的组合物的步骤；所述预制载体组成包括：可电离脂质、磷脂、胆固醇以及聚乙二醇缀合脂质。本专利技术采用所述预制载体，可根据使用者需求灵活调整核酸的剂量，并且可以通过多种途径给药，均可获得理想的递送效果。
2、为实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了预制载体在制备用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中的应用，包括将预制载体与核酸在溶剂中混合，得到基于预制载体的组合物的步骤；所述预制载体组成包括：5-70mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-50mol％磷脂、10-70mol％胆固醇以及0-15mol％聚乙二醇缀合脂质。
3、在一项优选的实施方案中，所述预制载体组成包括：10-60mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-30mol％磷脂、15-70mol％胆固醇以及0-10mol％聚乙二醇缀合脂质。
4、在一项优选的实施方案中，所述产品为递送系统或药物。
5、在一项优选的实施方案中，所述应用还包括将基于预制载体的组合物与免疫细胞或干细胞接触的步骤。
6、在一项优选的实施方案中，所述用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中还加入佐剂。
7、在一项优选的实施方案中，所述佐剂包括脂质、多肽、脂多胺或合成聚合物中的至少一种。
8、在一项优选的实施方案中，所述核酸为dna和/或rna。
9、在一项优选的实施方案中，所述核酸包括sirna、mirna、sarna、sgrna、dsrna、shrna、smrna、ssrna、mrna、circrna、snrna、crrna、incrna、snorna、pirna、pdna、ssdna、环状或线状dna、dna微环、msdna中的至少一种。
10、在一项优选的实施方案中，所述核酸的用量为预制载体和核酸的总量的0.1％-50％(w/w)；所述基于预制载体的组合物中，所述的核酸的浓度为5-1000ng/μl。
11、在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质选自含有通式(1)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体；
12、
13、其中，r1、r2、r3彼此独立地是h、c5-40直链或支链的烷基、c5-40直链或支链的烯基、c5-40直链或支链的炔基、含有1-3个侧链的3-6元饱和或部分不饱和环烃基、或者含有1-3个侧链的6-10元芳族基团；所述侧链独立地选自c10-30直链或支链烷基、c10-30直链或支链烯基、c10-30直链或支链炔基；条件是r1、r2、r3至多1个是h；
14、m选自-nr4r5、含有至少一个氮原子的饱和或部分不饱和3-6元杂环基、含有至少一个氮原子的6-10元杂芳基，所述的杂环基、杂芳基未被取代或被一个或多个-oh、羧基、氨基、氧代基或卤素取代；
15、r4、r5彼此独立地是h、c1-6直链或支链烷基、c2-6直链或支链烯基或者c2-6直链或支链炔基，所述的c1-6直链或支链烷基、c2-6直链或支链烯基或c2-6直链或支链炔基未被取代或被一个或多个-oh、羧基、氨基酰胺基、脒基、胍基或卤素取代；
16、g1、g2、g3彼此独立地是-o-、-s-、-nr6-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝s)-、-c(＝o)o-、-ch(oh)-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr6c(＝o)o-、-oc(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)nr13-、-c(＝o)s-、-c(＝s)s-、-sc(＝s)-、-sc(＝o)-、-oc(＝o)s-、-sc(＝o)o-、-sc(＝o)s-、-os(＝o)2o-、-s(＝o)2o-、-os(＝o)2-、-s(＝o)2-、-s(＝o)2-nr6-、-nr6-s(＝o)2-、-p(＝o)(or6)o-、-op(＝o)(or6)-或-op(＝o)(or6)o-；其中各r6、r13彼此独立地选自h、羟基、c1-30直链或支链的烷基或环烷基、c2-30直链或支链的烯基；
17、l1选自-x1-或-(cr7r8)m-x1-，其中各x1独立地选自-o-、-s-、-nr14-、-s-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.预制载体在制备用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中的应用，其特征在于，包括将预制载体与核酸在溶剂中混合，得到基于预制载体的组合物的步骤；所述预制载体组成包括：5-70mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-50mol％磷脂、10-70mol％胆固醇以及0-15mol％聚乙二醇缀合脂质。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用还包括将基于预制载体的组合物与免疫细胞或干细胞接触的步骤。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中还加入佐剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述佐剂包括脂质、多肽、脂多胺或合成聚合物中的至少一种。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核酸为DNA和/或RNA。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述核酸包括siRNA、miRNA、saRNA、sgRNA、dsRNA、shRNA、smRNA、ssRNA、mRNA、circRNA、snRNA、crRNA、IncRNA、snoRNA、piRNA、
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核酸的用量为预制载体和核酸的总量的0.1％-50％(w/w)；所述基于预制载体的组合物中，所述的核酸的浓度为5-1000ng/μl。
8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一可电离脂质选自含有通式(1)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体；
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述R1、R2、R3彼此独立地是如下基团：
10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述R1、R2、R3彼此独立地选自以下基团：
11.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述R1、R2、R3彼此独立地选自以下基团中的任意一种：
12.如权利要求8所述的应用，其特征在于，G1、G2、G3彼此独立地是-O-、-S-、-NR6-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-CH(OH)-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR6-、-NR6C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR6C(＝O)O-、-OC(＝O)NR6-、-NR6C(＝O)NR13-、-P(＝O)(OR6)O-、-OP(＝O)(OR6)-或-OP(＝O)(OR6)O-。
13.如权利要求8所述的应用，其特征在于，L1选自-(CR7R8)m-X1-，其中X1选自-O-、-S-、-NR14-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR14-、-NR14C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR14C(＝O)O-、-OC(＝O)NR14-、-NR14C(＝O)NR15-、-P(＝O)(OR14)O-、-OP(＝O)(OR14)-或-OP(＝O)(OR14)O-。
14.如权利要求8所述的应用，其特征在于，L2是-(CR9R10)n-X2-(CR11R12)k-，其中X2选自-O-、-S-、-NR16-、-S-S-、-C(＝O)-、-C(＝O)O-、-OC(＝O)-、-C(＝O)NR16-、-NR16C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-NR16C(＝O)O-、-OC(＝O)NR16-、-NR16C(＝O)NR17-、-P(＝O)(OR16)O-、-OP(＝O)(OR16)-或-OP(＝O)(OR16)O-。
15.如权利要求8所述的应用，其特征在于，M选自以下结构：
16.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1A)所示的化合物：
17.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1B)所示的化合物：
18.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1C)的化合物：
19.如权利要求17所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1D)所示的化合物的化合物：
20.如权利要求19所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1E)所示的化合物
21.如权利要求20所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1F)所示的化合物：
22.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1G)所示的化合物：
23.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1H)所示的化合物：
24.如权利要求8所述的...
【技术特征摘要】
1.预制载体在制备用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中的应用，其特征在于，包括将预制载体与核酸在溶剂中混合，得到基于预制载体的组合物的步骤；所述预制载体组成包括：5-70mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-50mol％磷脂、10-70mol％胆固醇以及0-15mol％聚乙二醇缀合脂质。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用还包括将基于预制载体的组合物与免疫细胞或干细胞接触的步骤。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用于免疫细胞和干细胞的体外基因递送的产品中还加入佐剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述佐剂包括脂质、多肽、脂多胺或合成聚合物中的至少一种。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核酸为dna和/或rna。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述核酸包括sirna、mirna、sarna、sgrna、dsrna、shrna、smrna、ssrna、mrna、circrna、snrna、crrna、incrna、snorna、pirna、pdna、ssdna、环状或线状dna、dna微环、msdna中的至少一种。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核酸的用量为预制载体和核酸的总量的0.1％-50％(w/w)；所述基于预制载体的组合物中，所述的核酸的浓度为5-1000ng/μl。
8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一可电离脂质选自含有通式(1)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体；
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述r1、r2、r3彼此独立地是如下基团：
10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述r1、r2、r3彼此独立地选自以下基团：
11.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述r1、r2、r3彼此独立地选自以下基团中的任意一种：
12.如权利要求8所述的应用，其特征在于，g1、g2、g3彼此独立地是-o-、-s-、-nr6-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-ch(oh)-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr6c(＝o)o-、-oc(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)nr13-、-p(＝o)(or6)o-、-op(＝o)(or6)-或-op(＝o)(or6)o-。
13.如权利要求8所述的应用，其特征在于，l1选自-(cr7r8)m-x1-，其中x1选自-o-、-s-、-nr14-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr14-、-nr14c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr14c(＝o)o-、-oc(＝o)nr14-、-nr14c(＝o)nr15-、-p(＝o)(or14)o-、-op(＝o)(or14)-或-op(＝o)(or14)o-。
14.如权利要求8所述的应用，其特征在于，l2是-(cr9r10)n-x2-(cr11r12)k-，其中x2选自-o-、-s-、-nr16-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr16-、-nr16c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr16c(＝o)o-、-oc(＝o)nr16-、-nr16c(＝o)nr17-、-p(＝o)(or16)o-、-op(＝o)(or16)-或-op(＝o)(or16)o-。
15.如权利要求8所述的应用，其特征在于，m选自以下结构：
16.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1a)所示的化合物：
17.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1b)所示的化合物：
18.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1c)的化合物：
19.如权利要求17所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1d)所示的化合物的化合物：
20.如权利要求19所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1e)所示的化合物
21.如权利要求20所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1f)所示的化合物：
22.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1g)所示的化合物：
23.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1h)所示的化合物：
24.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1i)所示的化合物：
25.如权利要求17所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1j)所示的化合物：
26.如权利要求24所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈小宝，
申请(专利权)人：晟迪生物医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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