【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及促进t细胞外源性蛋白表达的序列及应用。
技术介绍
1、目前，构建稳定表达外源性蛋白表达的t细胞的方式有转座子/转座酶系统、mrna电穿孔和慢病毒。尽管通过慢病毒能够实现外源基因在t细胞中的转导和表达，但其转导效率往往很大程度受到dna大小的限制，当目标表达dna序列较长时，转导效率便会下降。考虑到临床患者外周血中t细胞获取数量有限，无法从依赖于t细胞的数量供应来解决转导效率低的问题。因此，如何促进t细胞外源性蛋白表达，优化慢病毒介导的转染系统，提高慢病毒转导效率，同时保证表达效率，是目前临床亟需解决的关键问题。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种促进t细胞外源性蛋白表达的序列及应用。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种促进t细胞外源性蛋白表达的序列，所述序列为seq id no.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
4、本专利技术还提供了一种促进t细胞外源性蛋白表达的载体，含有所述的seq id no.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
5、本专利技术所述的载体，为在载体中插入所述的seq id no.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
6、本专利技术所述的载体，为在慢病毒载体、或腺病毒载体、或合成聚合物纳米载体、或脂质纳米颗粒载体中插入所述的seq id no.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
7、本专利技术所述的
8、本专利技术还提供了一种促进t细胞外源性蛋白表达的载体的构建方法：
9、分别扩增seq id no.1、seq id no.2目的基因片段，对载体进行酶切，酶切位点为ecori、clai，酶切后的载体、目的基因片段进行连接。
10、本专利技术还提供了一种所述的序列或所述的载体或所述的构建方法构建得到的载体在促进t细胞外源性蛋白表达中的应用。
11、本专利技术所述序列位于外源性蛋白的上游。
12、本专利技术所述的应用，包括所述的序列或所述的载体在提高增强绿色荧光蛋白、car基因在t细胞中的表达效率中的应用。
13、本专利技术所述外源性蛋白，包括增强绿色荧光蛋白、car基因、荧光素酶、与fk506融合的caspase9修饰结合蛋白、组蛋白h2b-增强绿色荧光蛋白、yap1蛋白的磷酸化形式yap5sa、红色荧光蛋白、血管紧张素转换酶2、间隙连接蛋白。
14、有益效果
15、本专利技术提供的seq id no.1、seq id no.2序列，能够促进t细胞外源性蛋白表达，其中seq id no.1的促进效果更明显；
16、本专利技术选择慢病毒载体lenti-pgk-egfp，经ecori、clai酶切后，连接，分别得到插有seq id no.1、seq id no.2序列的no.1-egfp、no.2-egfp，成功得到能够促进t细胞外源性蛋白表达的表达载体；
17、本专利技术将seq id no.1、seq id no.2序列应用到转染293t细胞中，增强绿色荧光蛋白(egfp)具有较高的转染效率；应用到激活t细胞，seq id no.1序列构建的表达载体no.1-egfp中，增强绿色荧光蛋白(egfp)既能够高效率表达，又具有表达稳定性；另外在激活t细胞中，表达载体no.1-car能提高car基因在t细胞中的表达效率。
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1.一种促进T细胞外源性蛋白表达的序列，其特征在于，所述序列为SEQ ID NO.1或SEQID NO.2所示的核苷酸序列。
2.一种促进T细胞外源性蛋白表达的载体，其特征在于，含有权利要求1所述的SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，在载体中插入权利要求1所述的SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，在慢病毒载体、或腺病毒载体、或合成聚合物纳米载体、或脂质纳米颗粒载体中插入权利要求1所述的SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，在慢病毒载体Lenti-PGK-EGFP中插入权利要求1所述的SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
6.一种如权利要求2-5中任一项所述的促进T细胞外源性蛋白表达的载体的构建方法：
7.一种如权利要求1所述的序列或如权利要求2-5中任一项所述的载体或权利要求
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述序列位于外源性蛋白的上游。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的序列或所述的载体在提高增强绿色荧光蛋白、CAR基因在T细胞中的表达效率中的应用。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述外源性蛋白，包括增强绿色荧光蛋白、CAR基因、荧光素酶、与fk506融合的caspase9修饰结合蛋白、组蛋白H2B-增强绿色荧光蛋白、YAP1蛋白的磷酸化形式YAP5SA、红色荧光蛋白、血管紧张素转换酶2、间隙连接蛋白。
...【技术特征摘要】
1.一种促进t细胞外源性蛋白表达的序列，其特征在于，所述序列为seq id no.1或seqid no.2所示的核苷酸序列。
2.一种促进t细胞外源性蛋白表达的载体，其特征在于，含有权利要求1所述的seq idno.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，在载体中插入权利要求1所述的seq idno.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，在慢病毒载体、或腺病毒载体、或合成聚合物纳米载体、或脂质纳米颗粒载体中插入权利要求1所述的seq id no.1或seq id no.2所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，在慢病毒载体lenti-pgk-egfp中插入权利要求1所述的seq id no.1或seq id n...
【专利技术属性】
技术研发人员：王强，尹立，向卓，陈桂来，
申请(专利权)人：启程医学科技山东有限公司，
类型：发明
国别省市：
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