【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物检测，具体涉及一种阿克曼菌属水平特异性pcr引物和应用。
技术介绍
1、乳酸杆菌和双歧杆菌类益生菌是社会大众熟悉的有益菌，但随着对益生菌的深入研究，阿克曼菌有望成为新一代益生菌。所述阿克曼菌(akkermansia)于2004年被鉴定出来，是一种存活于肠粘膜中的共生菌。目前研究，阿克曼菌在几种不健康的身体条件下呈现出负相关的联系，例如肥胖、糖尿病、肠道炎症、肝脏疾病或慢性饮酒等。同时阿克曼菌减少会破坏肠屏障功能，导致血浆内毒素水平升高，并最终引起低度炎症和代谢紊乱。
2、阿克曼菌属属于疣微菌门，目前报道的阿克曼菌属内的菌种十分有限，主要包括琵琶湖阿克曼菌(a.biwaensis)、广西阿克曼菌(a.guangxiensis)、嗜糖阿克曼菌(a.glycaniphila)和嗜黏蛋白阿克曼菌(a.muciniphila)，而不同种类的阿克曼菌具有各种各样的应用，例如嗜黏蛋白阿克曼菌(a.muciniphila)被报道参与肥胖的发生、发展及其预后，可在肥胖的干预和预防中提供了新方向和潜在的靶向途径。此外，广西阿克曼菌被报道在抗氧化、减脂和抑制肿瘤生长方面均表现出良好的生物学特性。由于不同种类的阿克曼菌属在医药方面表现出良好的应用价值，开展阿克曼菌的大规模培养是满足市场需求的主要途径。由于不同种类的阿克曼菌在培养过程中容易发生污染，而菌种的形态学鉴定很大程度上依赖于鉴定人员的经验，容易出现错漏，并且形态学鉴定方法效率低，时间长不能满足快速准确的生产要求。因此开发出分子鉴定方法对准确监测阿克曼菌属内不同菌种
3、然而遗憾的是，目前还没有关于阿克曼菌属内不同菌种的分子鉴定引物，这无疑阻碍了阿克曼菌在医药产业及新功能研发中的步伐。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种阿克曼菌属水平特异性pcr引物，能够对阿克曼菌属内的琵琶湖阿克曼菌、广西阿克曼菌n21116、嗜糖阿克曼菌、广西阿克曼菌n21169和嗜黏蛋白阿克曼菌实现特异性扩增，且具有检测灵敏度的优势。
2、本专利技术提供了一种阿克曼菌属水平特异性pcr引物，包括琵琶湖阿克曼菌扩增引物、广西阿克曼菌n21116扩增引物、嗜糖阿克曼菌扩增引物、广西阿克曼菌n21169扩增引物和嗜黏蛋白阿克曼菌扩增引物；
3、所述广西阿克曼菌n21116扩增引物包括核苷酸序列如seq id no：1所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：2所示的反向引物；
4、所述广西阿克曼菌n21169扩增引物包括核苷酸序列如seq id no：3所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：4所示的反向引物；
5、所述琵琶湖阿克曼菌扩增引物包括核苷酸序列如seq id no：5所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：6所示的反向引物；
6、所述嗜糖阿克曼菌扩增引物包括核苷酸序列如seq id no：7所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：8所示的反向引物；
7、所述嗜黏蛋白阿克曼菌扩增引物包括核苷酸序列如seq id no：9所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：10所示的反向引物。
8、本专利技术提供了一种阿克曼菌属水平检测试剂盒，包括所述阿克曼菌属水平特异性pcr引物和其他pcr检测试剂。
9、本专利技术提供了一种阿克曼菌属培养污染物检测引物，包括所述阿克曼菌属水平特异性pcr引物和污染微生物扩增引物。
10、优选的，所述污染微生物扩增引物包括以下至少一种：拟杆菌门特异引物、厚壁菌门特异引物、放线菌门特异引物、alpha变形菌门特异引物和gamma变形菌门特异引物。
11、优选的，拟杆菌门特异引物包括核苷酸序列如seq id no：11所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：12所示的反向引物；
12、厚壁菌门特异引物包括核苷酸序列如seq id no：13所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：14所示的反向引物；
13、放线菌门特异引物包括核苷酸序列如seq id no：15所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：16所示的反向引物；
14、alpha变形菌门特异引物包括核苷酸序列如seq id no：17所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：18所示的反向引物；
15、gamma变形菌门特异引物包括核苷酸序列如seq id no：19所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：20所示的反向引物。
16、本专利技术提供了一种阿克曼菌属培养污染物检测试剂盒，包括所述阿克曼菌属培养污染物检测引物和其他pcr检测试剂。
17、本专利技术提供了所述引物或所述引物在制备检测阿克曼菌属或其培养污染物的试剂或试剂盒中的应用。
18、本专利技术提供了一种检测阿克曼菌属的方法，包括以下步骤：
19、从待测样本提取dna；
20、以dna为模板，利用所述引物或所述引物进行多重pcr检测，得到pcr产物；
21、将所述pcr产物进行分析，当得到预期目标大小的pcr产物时，说明待测样本中存在与引物对应的阿克曼菌和/或污染微生物。
22、优选的，所述多重pcr检测的反应体系共50μl，包括2×pcr缓冲液25μl、10ng/μl模板dna 1μl、10mm正向引物1μl、10mm反向引物1μl和无菌水22μl；
23、所述正向引物或反向引物是所述阿克曼菌属水平特异性pcr引物中各正向引物或反向引物按照等摩尔比混合得到；
24、扩增条件为：95℃2min；95℃30s，52℃30s，72℃30s，30个循环；72℃10min。
25、优选的，琵琶湖阿克曼菌的扩增片段长度为99bp；
26、广西阿克曼菌n21116的扩增片段长度为216bp；
27、嗜糖阿克曼菌的扩增片段长度为344bp；
28、广西阿克曼菌n21169的扩增片段长度为439bp；
29、嗜黏蛋白阿克曼菌的扩增片段长度为505bp。
30、本专利技术提供了一种阿克曼菌属水平特异性pcr引物，包括广西阿克曼菌n21116扩增引物、广西阿克曼菌n21169扩增引物、琵琶湖阿克曼菌扩增引物、嗜糖阿克曼菌扩增引物和嗜黏蛋白阿克曼菌扩增引物，核苷酸序列如seq id no：1～seq id no：10所示。本专利技术在引物设计时，排除了实验室或发酵车间常见的污染微生物种类和排除能够形成二聚体的引物，保留能够扩增广西阿克曼菌n21116、广西阿克曼菌n21169、琵琶湖阿克曼菌、嗜糖阿克曼菌、嗜黏蛋白阿克曼菌的引物。实验表明，通过特异性检测实验结果表明，阿克曼菌属内不同菌种之间，引物不会发生非特异性扩增，同时人工配制污染样本检测阿克曼菌属，结果表明污染微生物特异引物均可特异性扩增污染微生物，而本专利技术提本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种阿克曼菌属水平特异性PCR引物，其特征在于，包括琵琶湖阿克曼菌扩增引物、广西阿克曼菌N21116扩增引物、嗜糖阿克曼菌扩增引物、广西阿克曼菌N21169扩增引物和嗜黏蛋白阿克曼菌扩增引物；
2.一种阿克曼菌属水平检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述阿克曼菌属水平特异性PCR引物和其他PCR检测试剂。
3.一种阿克曼菌属培养污染物检测引物，其特征在于，包括权利要求1所述阿克曼菌属水平特异性PCR引物和污染微生物扩增引物。
4.根据权利要求3所述阿克曼菌属培养污染物检测引物，其特征在于，所述污染微生物扩增引物包括以下至少一种：拟杆菌门特异引物、厚壁菌门特异引物、放线菌门特异引物、Alpha变形菌门特异引物和gamma变形菌门特异引物。
5.根据权利要求4所述阿克曼菌属培养污染物检测引物，其特征在于，拟杆菌门特异引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO：11所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示的反向引物；
6.一种阿克曼菌属培养污染物检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求3～5中任意一项所述引物和
7.权利要求1所述引物或权利要求3～5中任意一项所述引物在制备检测阿克曼菌属或其培养污染物的试剂或试剂盒中的应用。
8.一种检测阿克曼菌属的方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述多重PCR检测的反应体系共50μl，包括2×PCR缓冲液25μl、10ng/μl模板DNA 1μl、10mM正向引物1μl、10mM反向引物1μl和无菌水22μl；
10.根据权利要求8或9所述方法，其特征在于，琵琶湖阿克曼菌的扩增片段长度为99bp；
...【技术特征摘要】
1.一种阿克曼菌属水平特异性pcr引物，其特征在于，包括琵琶湖阿克曼菌扩增引物、广西阿克曼菌n21116扩增引物、嗜糖阿克曼菌扩增引物、广西阿克曼菌n21169扩增引物和嗜黏蛋白阿克曼菌扩增引物；
2.一种阿克曼菌属水平检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述阿克曼菌属水平特异性pcr引物和其他pcr检测试剂。
3.一种阿克曼菌属培养污染物检测引物，其特征在于，包括权利要求1所述阿克曼菌属水平特异性pcr引物和污染微生物扩增引物。
4.根据权利要求3所述阿克曼菌属培养污染物检测引物，其特征在于，所述污染微生物扩增引物包括以下至少一种：拟杆菌门特异引物、厚壁菌门特异引物、放线菌门特异引物、alpha变形菌门特异引物和gamma变形菌门特异引物。
5.根据权利要求4所述阿克曼菌属培养污染物检测引物，其特征在于，拟...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐琴艳，黄诗婷，芦志龙，罗卫飞，梁艳，
申请(专利权)人：广西爱生生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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