【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及纳米探针制备和应用，具体涉及一种荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide及其制备方法和应用。
技术介绍
1、近年来，癌症的发病率和死亡率急剧上升，且发病年龄呈年轻化趋势，已成为人类死亡的主要原因。目前，基于mirna的靶向治疗是肿瘤精准治疗领域的研究热点。mirna是一类内源性、非编码、低丰度的单链小rna分子(18-22nt)，其异常表达与癌细胞的增殖、转移、侵袭密切相关，是癌症诊断和预后的一种重要生物标志物。不同的mirna在人体内发挥了致癌或抑癌的不同作用，例如，在大多数癌症中，mirna-221过表达，发挥了肿瘤致癌基因的作用，let-7低表达，发挥了肿瘤抑癌基因的作用。已有研究表明，通过降低或升高特定mirna的表达量，可以调控凋亡基因，从而诱导细胞凋亡，实现对癌症的精准治疗。因此，在发展基于mirna的精准治疗时，研究mirna和细胞凋亡的变化具有重要意义。
2、传统的mirnas检测方法(northern blotting、qrt-pcr、mirna微阵列)和细胞凋亡检测方法(western blotting、免疫组织化学分析)都需要将细胞固定和裂解，无法直观的监测活细胞中mirna和凋亡标志物的表达变化。而荧光技术具有选择性好、灵敏度高、成像分辨率高、无创等优点，已经成为检测细胞内生物标志物的常用策略。许多研究表明，由于mirna的丰度低，传统的荧光成像“一对一”模式并不能灵敏地监测细胞内低含量的mirna。
技术实现思路
1、为提供
2、本专利技术提供了一种荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide的制备方法，包括如下步骤：
3、将1,3,5-tris(4-aminophenyl)benzene和2,5-dimethoxyterephthaldehyde与乙腈混合后加入冰醋酸混匀后离心获得的沉淀为cof nps纳米颗粒；
4、将cof nps纳米颗粒分散到pbs缓冲液获得cof nps溶液；
5、cof nps溶液与texas red标记的发夹dna混合，反应得到cof-hi/h2nps溶液，然后将cof-h1/h2 nps溶液与cy5标记的peptide混合，反应获得荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide；
6、所述的发夹dna制备过程为：用texas red分别在h1和h2末端标记后混合而成的混合溶液；
7、所述h1核苷酸序列如seq id no.1所示，h2核苷酸序列如seq id no.2所示；
8、cy5标记的peptide序列为：cy5-gly gly asp glu val asp gly gly cys。
9、本专利技术还提供了上述方法制备得到的荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide。
10、本专利技术还提供了所述的荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide在制备用于检测肿瘤细胞因子产品中的应用，所述肿瘤细胞因子为mirna-221和凋亡标志物caspase-3。
11、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
12、1、我们基于cof材料和cha检测策略开发了一种新型智能纳米探针cof-h1/h2-peptide，用于循环放大检测mirna-221，并实现和凋亡蛋白caspase-3的同时检测，能可视化研究mirna表达变化对细胞凋亡的影响。
13、如图1所示，由于存在π-π堆积和氢键相互作用，h1、h2和peptide可以逐级吸附在cof nps上，此时h1和h2上所标记的texas red和peptide上所标记的cy5的荧光均被cofnps所猝灭，从而得到了功能化cof-h1/h2-peptide纳米探针。cha放大检测靶标mirna-221的原理如下：当探针遇到靶标时，靶标特异性地与纳米探针上h1未配对的区域b杂交，形成t-h1双链复合物。同时，h2的粘性末端a’再与t-h1双链复合物中h1内新暴露区域a杂交，形成t-h1-h2半稳定三元复合物。之后h2取代靶mirna-221，从而发生链置换反应，最终生成h1-h2双链复合物。此时texas red能够远离cof nps使荧光得以恢复。然后，释放的mirna-221将重复触发下一轮cha，这就使得单个mirna-221可以产生大量的h1-h2双链复合物，从而产生显著的荧光增强。当cof-h1/h2-peptide nps遇到caspase-3时，caspase-3特异性裂解peptide中的devd序列，导致cy5荧光恢复。综上所述，我们所设计的cof-h1/h2-peptide纳米探针能够成为一种细胞内核酸cha放大检测、同时和蛋白双重传感的智能系统，在疾病诊断及筛选新药等方面具有巨大的潜力。
14、2、共价有机骨架(cof)具有结构多样、比表面积大、稳定性好、猝灭效率高和生物相容性好等优点，在药物输送、生物分析和疾病治疗诊断等方面具有巨大潜力。
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1.一种荧光纳米探针COF-H1/H2-Peptide的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的荧光纳米探针COF-H1/H2-Peptide的制备方法，其特征在于，所述1,3,5-Tris(4-aminophenyl)benzene、2,5-dimethoxyterephthaldehyde和乙腈的用量比为12-15g:10-13g：10-30mL。
3.根据权利要求2所述的荧光纳米探针COF-H1/H2-Peptide的制备方法，其特征在于，所述COF NPs纳米颗粒与PBS缓冲液混合比例为1-2g:2-3mL。
4.根据权利要求3所述的荧光纳米探针COF-H1/H2-Peptide的制备方法，其特征在于，所述COF NPs溶液与Texas Red标记的发夹DNA混合用量比为30-40uL：3-4uL。
5.根据权利要求4所述的荧光纳米探针COF-H1/H2-Peptide的制备方法，其特征在于，所述COF-H1/H2 NPs溶液与Cy5标记的Peptide混合比例为100-120uL：3-4uL。
...【技术特征摘要】
1.一种荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide的制备方法，其特征在于，所述1,3,5-tris(4-aminophenyl)benzene、2,5-dimethoxyterephthaldehyde和乙腈的用量比为12-15g:10-13g：10-30ml。
3.根据权利要求2所述的荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide的制备方法，其特征在于，所述cof nps纳米颗粒与pbs缓冲液混合比例为1-2g:2-3ml。
4.根据权利要求3所述的荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide的制备方法，其特征在于，所述cof nps溶液与texas red标记的发夹dna混合用量比为30-40ul：3-4ul。
5.根据权利要求4所述的荧光纳米探针cof-h1/h2-peptide的制备方法，其特征在于，所述cof...
【专利技术属性】
技术研发人员：栾明明，李文丽，孙鹤鸣，王梦璐，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学山东省科学院，
类型：发明
国别省市：
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