一种香菇多糖壳聚糖纳米粒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种香菇多糖壳聚糖纳米粒及其制备方法，该香菇多糖壳聚糖纳米粒由如下重量份的原料药和载体材料制成：壳聚糖１５０份～２５０份、三聚磷酸钠３０份～７０份和香菇多糖０．６份～１．５份。采用壳聚糖为载体，通过壳聚糖与三聚磷酸钠的阴阳离子静电作用自发形成载药纳米粒，结合离子凝胶化法和复乳溶剂挥发法携载水溶性、大分子的香菇多糖成功制备获得稳定性高、包封率好和载药量高的香菇多糖壳聚糖纳米粒，且具有良好的抗肿瘤作用和免疫增强作用，较香菇多糖溶液的抗肿瘤效果更强，稳定性更高。其制备方法操作简单、安全、有效，符合环保要求，适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物纳米制剂领域，具体涉及。
技术介绍
多糖是由多个单糖分子縮合、失水而成，其种类繁多，结构复杂，广泛分布于动植 物中。目前对多糖的理化性质以及生物学功能的研究较多，近年来亦有研究人员对不同来 源多糖的潜在功能进行了进一步研究与开发，使得多糖在医药领域的应用广受关注。 目前多糖的一个重要的应用领域在于抗肿瘤，通过研究发现多糖抗肿瘤多表现 为一方面，通过调节免疫系统发挥抗肿瘤作用，如调节免疫器官，影响巨噬细胞，T淋巴 细胞(Thymus d印endent lymphocyte,胸腺依赖性淋巴细胞)、B淋巴细胞(Bone marrow d印endent lymphocyte,骨髓依赖性淋巴细胞)及NK细胞(natural killer cell,自然杀 伤细胞)，激活补体系统等；另一方面集中在通过直接作用抑制肿瘤细胞，其机制为引起细 胞凋亡，抑制致肿瘤物激活酶，激活解毒酶，影响膜蛋白及肿瘤细胞附着，影响信号转导等 方面。 香菇多糖作为一种免疫增强剂具有免疫调节作用，能增强NK细胞、T细胞功能，以 及诱导干扰素血中浓度增高，具有抗肿瘤、抗病毒等作用。用于治疗恶性肿瘤和慢性乙肝等 病毒性疾病，在与手术、放疗、化疗等相结合的辅助治疗中，已经取得很好的疗效。但现有的 多糖药物制剂往往存在诸如稳定性差、生物利用度不高以及对某些细胞穿透能力不强等缺 点，近年来研究人员开始将微粒制剂应用于多糖类药物制剂的研究与开发，以克服多糖普 通制剂的缺点。目前，关于携载多糖的微粒制剂如脂质体、微囊、微球等制备方法和质量评 价的研究，已成为多糖新型给药系统研究的一个重要方向，但尚未有关于香菇多糖纳米粒 的报道。 作为药物传递与控释的载体，纳米粒具有缓释性、靶向性、稳定性等优点，而且可 减少药物使用剂量，减轻或避免其不良反应。同样针对某些多糖类药物普通制剂的靶向性、 缓释性等的缺陷，对多糖药物纳米制剂进行研究与开发意义重大。尽管纳米粒在许多化学 药物中得到了应用，但由于香菇多糖的水溶性、大分子等一些自身的不利于包封的性质，目 前尚无有关包载香菇多糖作为抗肿瘤治疗药物的纳米粒的研究报道。 申请号为200510018524. 4的中国专利中公开了一种用作药物载体的壳聚糖季铵 盐纳米粒子及其制备方法和用途。壳聚糖季铵盐纳米粒子由壳聚糖季铵盐和三聚磷酸钠 交联生成，粒径为100nm 500nm。其制备方法是将壳聚糖季铵盐溶解于蒸馏水中，在室温 搅拌条件下加入三聚磷酸钠溶液，交联成纳米粒子，高速离心分离，冷冻干燥，获得壳聚糖 季铵盐纳米粒子。这种在中性条件下制备的新型纳米粒子，可避免有机溶剂的副作用，所需 能量要比溶剂蒸发等普通制备方法大为降低，尤其适合用于包封敏感大分子如蛋白质类药 物。以牛血清蛋白为模型药，BSA的包封率可达90X，缓释达六天以上。但该种纳米粒子不 适用于携载香菇多糖。
技术实现思路
本专利技术提供了一种香菇多糖壳聚糖纳米粒，用于弥补现有香菇多糖纳米制剂的空白，其采用壳聚糖和三聚磷酸钠为载体材料，通过离子凝胶化法携载香菇多糖成功制备获得稳定性高、包封率好的纳米粒，克服了目前香菇多糖由于其具有水溶性、大分子等一些自身的不利于包封的性质而难于制备纳米制剂的难题。 本专利技术还提供了一种香菇多糖壳聚糖纳米粒的制备方法，操作简单、安全、有效，符合环保要求。 —种香菇多糖壳聚糖纳米粒，由如下重量份的原料药和载体材料制成壳聚糖150份 250份、三聚磷酸钠(简称STPP) 30份 70份和香菇多糖0. 6份 1. 5份。 进一步优选由如下重量份的原料药和载体材料制成壳聚糖200份 250份、三聚磷酸钠30份 45份和香菇多糖0. 6份 1. 5份。 所述的壳聚糖(简称CS)是自然界中广泛存在的阳离子聚合物，具有较好的生物相容性和生物降解性，来源广泛，通过不同合成方法可以得到不同分子量和脱乙酰度的壳聚糖，可用于制备不同粒径和不同香菇多糖浓度的纳米粒。本专利技术优选使用较为普遍的分子量为10kDa 100kDa的壳聚糖。 壳聚糖的分子量过大会造成壳聚糖和香菇多糖分子量接近，会影响后续检测时用离子交换法测定香菇多糖的含量，为香菇多糖壳聚糖纳米粒的质量监控带来一定难度。 所述的壳聚糖的脱乙酰度优选为90% 95%，因为壳聚糖的脱乙酰度过低会影响壳聚糖质子化氨基离子的量，进而对纳米粒的形成有一定影响，使形成的纳米粒量过少。 所述的脱乙酰度通常用碱量法来测定，其原理是用过量的稀酸与一定量的待测壳聚糖反应，然后用标准NaOH溶液滴定过量的酸来测量壳聚糖中自由氨基的质量百分含量(a)，从而计算壳聚糖的脱乙酰度(即DD值)，其计算公式为DD= (a + 0. 0994) X 100%。 经检测，所述的香燕多糖壳聚糖纳米粒的粒径为lOOnm 500nm。 所述的香菇多糖壳聚糖纳米粒的zeta电位为0 20mv。 所述的香菇多糖壳聚糖纳米粒的制备方法，包括步骤 (1)将壳聚糖在醋酸或醋酸水溶液中溶胀配制成壳聚糖溶液； (2)将香菇多糖热溶于水中配制成香菇多糖溶液； (3)先将香菇多糖溶液加入壳聚糖溶液中，调节壳聚糖溶液的pH值为4 6，再缓慢滴加三聚磷酸钠水溶液，搅拌均匀后离心，收集沉淀，把沉淀复溶、过滤，滤液冷冻干燥，即制得香菇多糖壳聚糖纳米粒。 适当地调整壳聚糖溶液浓度或三聚磷酸钠水溶液浓度对纳米粒的制备影响不大，但是若壳聚糖浓度过高，或三聚磷酸钠浓度过高则会使带负电荷的磷酸根离子与壳聚糖上带正电荷的质子化氨基发生分子间和分子内交联时由于离子局部浓度过高，导致所制备的纳米粒粒径过大，并且也可能造成所制备的纳米粒浓度过高，纳米粒子之间容易聚集，影响纳米粒的稳定性。因此需要控制壳聚糖阳离子和磷酸根离子的用量。为了得到粒径合适，稳定性更好的香菇多糖壳聚糖纳米粒，优选 步骤(1)中，壳聚糖溶液中壳聚糖的浓度为1. 5g/L 2. 5g/L。 为了便于步骤(3)中进行pH的调节，节约试剂，优选质量百分浓度为0.5X 42.5%的醋酸水溶液。 步骤(2)中，香菇多糖溶液的浓度为60ii g/ml 150ii g/ml。 步骤(3)中，三聚磷酸钠水溶液的质量百分浓度为0. 1% 1%。 沉淀复溶所用的溶剂采用常用的实验用水(如双蒸水)即可。 pH调节选用本领域常用的碱性试剂即可，如氢氧化钠、氢氧化钾等，使壳聚糖溶液的pH值为4 6，在该pH范围内，壳聚糖的氨基质子化程度较高，利于壳聚糖和三聚磷酸钠通过阴阳离子静电作用自发形成载药纳米粒。壳聚糖纳米粒作为一种纳米水凝胶体系，具有一定的溶胀度，而pH的变化可促进或抑制氨基解离而改变凝胶体系的电性和溶胀行为。而随着溶液pH升高，氨基离解程度降低，zeta电位降低使纳米粒子稳定性变差。 本专利技术先将香菇多糖加入到壳聚糖溶液中再制备成纳米粒，可以形成较稳定的纳米粒。 —、香菇多糖壳聚糖纳米粒的形态观察 取适量香菇多糖纳米粒加适量的双蒸水稀释后，加至专用铜网上，用质量百分浓度为0. 2%的磷钨酸水溶液染色，在透射电子显微镜下观察粒子的大小和形态，见图1。 从图1可看出，本专利技术香菇多糖纳米粒粒子的大小均匀，形态相似，分布均匀。 二、香燕多糖壳聚糖纳米粒的粒径和电位测定 —定量香菇多糖纳米粒，用PBS缓冲液(即吐温-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种香菇多糖壳聚糖纳米粒，其特征在于，由如下重量份的原料药和载体材料制成：壳聚糖１５０份～２５０份、三聚磷酸钠３０份～７０份和香菇多糖０．６份～１．５份。

【技术特征摘要】
一种香菇多糖壳聚糖纳米粒，其特征在于，由如下重量份的原料药和载体材料制成壳聚糖150份～250份、三聚磷酸钠30份～70份和香菇多糖0.6份～1.5份。2. 根据权利要求1所述的香菇多糖壳聚糖纳米粒，其特征在于，由如下重量份的原料 药和载体材料制成壳聚糖200份 250份、三聚磷酸钠30份 45份和香菇多糖0. 6份 1.5份。3. 根据权利要求1所述的香菇多糖壳聚糖纳米粒，其特征在于，所述的壳聚糖的分子 量为10kDa 100kDa。4. 根据权利要求1所述的香菇多糖壳聚糖纳米粒，其特征在于，所述的壳聚糖的脱乙 酰度为90% 95%。5. 根据权利要求1所述的香菇多糖壳聚糖纳米粒，其特征在于，所述的香菇多糖壳聚 糖纳米粒的粒径为100nm 500nm， zeta电位为0 20mv。6. 根据权利要求1 5任一项所述的香菇多糖壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于， 包括步骤(1) 将壳聚糖在醋酸或醋酸水溶液中溶胀配制成壳聚糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：高建青，李旎，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]