【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学材料，涉及一种靶向淋巴结的单宁化载药纳米粒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、器官移植是终末期器官衰竭的有效治疗手段。移植排斥反应是器官移植术后主要并发症，研究表明，移植受者2年内急性细胞排斥反应发生率高达19.0％。t淋巴细胞是细胞介导移植排斥反应的主要免疫细胞。引流淋巴结是产生免疫应答的重要器官之一，因此在器官移植排斥反应治疗中，靶向淋巴结策略备受关注。目前，临床常用的免疫抑制剂(immunosuppressive agent，isa)，他克莫司(tacrolimus，fk506)，是一种23元大环内酯类化合物，是第二代免疫抑制剂之一，也是第一个被发现的大环内酯类免疫抑制剂，主要通过抑制淋巴结内t细胞活化与增殖控制排斥反应。但此类药物作用靶点广泛，全身应用易引起多重副作用。
2、因此，为解决上述问题，利用载体材料构建具有淋巴结靶向特性的新型药物递送系统成为研究热点。该系统能够提高药物向淋巴结的递送效率，增加淋巴结药物浓度，从而提高生物利用度，降低给药剂量并减少药物在非靶组织的分布。基于此，人们开发了聚合物纳米粒、脂质体、胶束等不同的纳米递送系统用于药物传递。然而，目前淋巴结靶向纳米药物递送系统进入淋巴结主要有被动靶向和主动靶向两种方式。
3、被动靶向药物递送系统利用淋巴管内皮细胞连接不完整、基底膜不连续、缺乏平滑肌等特殊结构特点，设定特定大小的载药纳米粒，使药物顺利通过淋巴管内皮细胞间隙又不易重新入血，实现药物的淋巴结靶向递送。然而该递送方式在淋巴结滞留时间较短，这意味着药物在淋
4、主动靶向依赖于载药纳米粒表面配体与淋巴结受体的高度选择性相互作用。通过将单克隆抗体、配体等连接到药物载体上进行修饰或包封，可以改变纳米粒的自然分布，并在体内与淋巴结的特定位点相互作用，从而到达特定靶点并集中发挥药效。与被动靶向相比，主动靶向可以使药物精准释放并更多地聚集于淋巴结，发挥更好的治疗效果。然而，主动靶向多为静脉注射给药，这种方式会使免疫抑制药物先进入血液循环，再经hev进入lns，血液循环中的免疫抑制剂在肝、肺有大量非特异性的分布，使区域淋巴结药物浓度较低。
5、因此设计一种基于被动和主动靶向相结合的淋巴结递送系统具有应用前景，能够提高淋巴结靶向性，增加他克莫司在淋巴结中的浓度及滞留时间，从而有效抑制t淋巴细胞的增殖分化。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种靶向淋巴结的单宁化载药纳米粒及其制备方法和应用。本专利技术中的载药纳米粒以甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯为载体，负载的药物是他克莫司，并以单宁酸修饰。其中的单宁酸与淋巴结中淋巴导管上丰富的弹性蛋白相结合，具有更好的淋巴结靶向效果；材料整体具有小粒径特征，可以提高药物进入淋巴结中的量，提高生物利用度，从而降低给药剂量并减少药物在非靶组织的分布；其中的单宁酸是一种天然多酚，具有抗氧化、抗肿瘤等天然活性，还可以起到降低心血管疾病的功效，因此对于患者有较好的安全性。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种靶向淋巴结的单宁化载药纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)将甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯粉末溶解到丙酮溶液中配置成浓度为45～55mg/ml，将他克莫司溶解到丙酮中配置成浓度为8～12mg/ml，将单宁酸粉末溶解到超纯水中配置成浓度为2～4mg/ml；
5、(2)于200μl甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯溶液中加入330～1000μl他克莫司溶液，混合均匀后加入超纯水，使水相和油相的体积比为6:1；
6、(3)加入超纯水后超声乳化，超声功率设为最大功率的20～50％，超声时间为3～7min，超声模式采用超声5s/2s；
7、(4)将超声后的乳液搅拌3.5～4.5h至丙酮完全挥发；
8、(5)待丙酮完全挥发后，加入20～60μl单宁酸溶液继续搅拌25～35min，制成纳米悬液；
9、(6)将所述纳米悬液在2800～3200rpm，13～17min，3～5℃条件下，用超纯水超滤洗涤2～4次，收集超滤液即得到单宁酸修饰的载他克莫司plga纳米粒。
10、进一步的，所述步骤(1)中甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯溶液的浓度为50mg/ml，他克莫司溶液的浓度为10mg/ml，单宁酸溶液的浓度为3mg/ml。
11、进一步的，所述步骤(2)中是于200μl甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯溶液中加入500μl他克莫司溶液，混合均匀后加入4.2ml超纯水。
12、进一步的，所述步骤(3)中超声功率设为最大功率的40％，超声时间为5min。
13、进一步的，所述步骤(4)中超声后乳液的搅拌时间为4h。
14、进一步的，所述步骤(5)中单宁酸溶液的加入体积为30μl，继续搅拌的时间为30min。
15、进一步的，所述步骤(6)中的超滤条件为3000rpm，15min，4℃。
16、本专利技术还提供了一种使用所述制备方法制成的靶向淋巴结的单宁化载药纳米粒。
17、本专利技术还提供了一种所述靶向淋巴结的单宁化载药纳米粒在抗体介导排斥反应预防和/或治疗产品制备中的应用。
18、进一步的，所述应用为在器官移植术后t淋巴细胞抑制产品制备中的应用。
19、与现有技术相比，本专利技术具有如下技术效果：
20、(1)本专利技术材料中的单宁酸与淋巴结中淋巴导管上丰富的弹性蛋白相结合，具有更好的淋巴结靶向效果。
21、(2)本专利技术的材料具有小粒径特征，可以提高药物进入淋巴结中的量，提高生物利用度，从而降低给药剂量并减少药物在非靶组织的分布。
22、(3)本专利技术材料中修饰的单宁酸是一种天然多酚，具有抗氧化、抗肿瘤等天然活性，还可以起到降低心血管疾病的功效，因此对于患者有较好的安全性。
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1.一种靶向淋巴结的单宁化载药纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯溶液的浓度为50mg/ml，他克莫司溶液的浓度为10mg/ml，单宁酸溶液的浓度为3mg/ml。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中是于200μl甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯溶液中加入500μl他克莫司溶液，混合均匀后加入4.2ml超纯水。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中超声功率设为最大功率的40％，超声时间为5min。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中超声后乳液的搅拌时间为4h。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中单宁酸溶液的加入体积为30μl，继续搅拌的时间为30min。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)中的超滤条件为3000rpm，15min，4℃。
8.使用权利要求1
9.权利要求8所述的靶向淋巴结的单宁化载药纳米粒在抗体介导排斥反应预防和/或治疗产品制备中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向淋巴结的单宁化载药纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯溶液的浓度为50mg/ml，他克莫司溶液的浓度为10mg/ml，单宁酸溶液的浓度为3mg/ml。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中是于200μl甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯溶液中加入500μl他克莫司溶液，混合均匀后加入4.2ml超纯水。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中超声功率设为最大功率的40％，超...
【专利技术属性】
技术研发人员：王静，邱佳妮，谢明星，靳巧锋，张丽，宋怡姝，何梦荣，何书坤，白莹，李颖忻，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：
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