【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物实验模型及其制备，具体涉及一种tlr7-ifn i信号通路活化的小鼠体内细胞，具有该细胞的人源化系统性红斑狼疮小鼠，该人源化系统性红斑狼疮小鼠的构建方法及其在医学研究领域的应用。
技术介绍
1、本专利技术选用了人源化小鼠来构建系统性红斑狼疮(sle)模型。人源化小鼠在重度免疫缺陷的小鼠的基础上稳定地重建了人体免疫系统，对研究人体免疫学，尤其是针对人类自身免疫性疾病的研究有重大意义。
2、中国专利文件cn111149767b通过移植系统性红斑狼疮病人外周血单个核细胞(pbmc)到重度免疫缺陷小鼠可以构建简单的人源化系统性红斑狼疮模型，但其有非常明显的限制性。首先，外周血单个核细胞是终末分化的细胞，无法模拟造血干细胞(hsc)在体内分化的各个阶段，输注的外周血单个核细胞进入重度免疫缺陷鼠体内后也会引起严重的移植物抗宿主病，导致t细胞被活化，分泌大量炎症因子等。其次，该模型中，只有t细胞重建良好，其他细胞如b细胞、nk细胞、单核巨噬细胞等均重建极低甚至没有，这也将该模型的应用限制于研究t细胞相关作用，使其应用价值大大被削弱。此外，该小鼠模型寿命只有4周左右，其使用时间窗较短，无法进行长时程持续性的研究。
3、相较于外周血单个核细胞，造血干细胞因其自我更新和多向分化潜能而成为重建人免疫系统的首选。移植入免疫缺陷受体体内后，其能分化发育出相对完整的一套人免疫系统，包括各阶段的t、b、单核、nk、dc等，且能维持长期造血。近来，有研究团队给造血干细胞人源化小鼠腹腔注射了降植烷，6个月后可出现人抗核自
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种tlr7-ifn i信号通路活化的小鼠体内细胞，具有该细胞的人源化系统性红斑狼疮小鼠，该小鼠的构建方法及其在医学研究领域的应用。通过在免疫系统人源化小鼠体内诱导重建tlr7-ifn i信号通路，诱导出与系统性红斑狼疮患者类似的t细胞异常、炎症因子上调和狼疮肾炎表现。进一步，通过向小鼠注射表达人flt3l的质粒及自体活化淋巴细胞来源的dna，促进了小鼠的b细胞体液免疫反应，诱导b细胞亚群失调和自身抗体产生，来构建人源化系统性红斑狼疮小鼠模型，以解决现有技术中存在的技术缺陷。
2、本专利技术中所述的小鼠，是指干扰素信号通路活化后的小鼠；
3、本专利技术中所述的小鼠体内细胞，包括了小鼠自身细胞和/或小鼠体内的人源免疫细胞。
4、具体地，本专利技术提供了如下内容：
5、1.tlr7-ifn i信号通路：tlr7信号通路激活并触发下游ifn i反应
6、tlr是在细胞表面发现的基因编码模式识别受体。tlr识别病原体相关分子蛋白(pamp)，这类化合物包括tlr7激动剂或tlr8激动剂。tlr7作为细胞内体区室的一种跨膜受体，位于溶酶体膜，能够识别并结合病毒单链(ss)rna并通过myd88信号通路激活干扰素反应，即触发下游信号通路来诱导i型干扰素反应即ifn-i反应。
7、i型ifn(即ifn-i)的分泌依赖于包含myd88和irf7的复合物。tlr7活化后，能够招募myd88，进一步招募irak4。该复合体还包含traf3、traf6、irak1、ikkα等。myd88直接或间接招募irf7，使其被irak1和/或ikkα磷酸化，并易位到细胞核中调节i型ifn的表达。此外，myd88-irak4-traf6复合体驱动nf-κb依赖性炎症因子的诱导。
8、死亡或受损细胞释放的rna和dna可被自身反应性b细胞上的b细胞受体(bcr)识别。bcr将rna和dna运输到细胞内溶酶体，分别与tlr7和tlr9结合。b细胞中tlr7和tlr9的激活可诱导其增殖、细胞因子的产生(ifn-i)和向浆细胞分化。随后，浆细胞分泌自身抗体，可结合rna、dna或rna/dna相关蛋白形成免疫复合物。由浆细胞样树突状细胞(pdc)表达的fcγriia(cd32)结合含有核酸的免疫复合物，并将其运输到溶酶体膜上的tlr7/tlr9且与之结合。pdcs中tlr7和tlr9的激活可诱导促炎细胞因子和趋化因子的产生，从而导致恶性细胞因子风暴和靶器官炎症细胞浸润，进一步引起组织病变。此外，pdcs分泌的ifn-α通过上调b细胞tlr7表达进一步增强b细胞增殖和自身抗体的产生，从而形成一个正反馈循环，导致自身免疫的恶化。
9、2.小鼠体内细胞
10、本专利技术提供一种小鼠体内细胞，小鼠为干扰素信号通路活化后的小鼠，其体内细胞包括了小鼠自身细胞和/或小鼠体内的人源免疫细胞。
11、可选地，通过施用tlr7激动剂活化该细胞内的tlr7-ifn i信号通路。
12、可选地，所述tlr7激动剂是瑞喹莫德和咪喹莫特。
13、可选地，所述瑞喹莫德施用的剂量范围为30-300μg/周/鼠。
14、可选地，所述瑞喹莫德每次施用的剂量为10-100μg/鼠。
15、可选地，所述瑞喹莫德的施用频率为每周两次或每周三次。
16、可选地，所述咪喹莫特的施用频率0.5-3mg/只/次，一周两次。3.人源化系统性红斑狼疮小鼠
17、本专利技术还提供一种人源化系统性红斑狼疮小鼠，其中该小鼠具有上述细胞。
18、可选地，该小鼠具有t细胞含量异常、炎症因子水平上调、狼疮肾炎表现、b细胞亚群失调和自身抗体产生。
19、可选地，该小鼠的使用周期为8-30周，优选为8-16周。
20、4.人源化系统性红斑狼疮小鼠的构建方法
21、进一步地，本专利技术还提供一种人源化系统性红斑狼疮小鼠的构建方法，该方法包括：
22、1)对出生一周内的免疫缺陷鼠进行辐照清髓；
23、2)将人胎肝来源造血干细胞注射入小鼠肝脏部位，剂量为0.5-10×104个细胞/鼠；
24、3)注射造血干细胞8-16周后检测小鼠外周血人免疫细胞重建情况；
25、4)向小鼠注射表达人flt3l的质粒。
26、5)向小鼠注射自体活化淋巴细胞来源的dna。
27、在某些实施例中，向小鼠注射表达人flt本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种小鼠体内细胞，其特征在于，所述小鼠为干扰素信号通路活化后的小鼠，其体内细胞包括了小鼠自身细胞和/或小鼠体内的人源免疫细胞。
2.根据权利要求1所述的小鼠体内细胞，其特征在于，所述活化的干扰素信号通路为TLR7-IFN I信号通路。
3.根据权利要求1所述的小鼠体内细胞，其特征在于，通过施用TLR7激动剂活化该TLR7-IFNI信号通路。
4.根据权利要求1所述的小鼠体内细胞，其特征在于，所述TLR7激动剂是咪喹莫特或瑞喹莫德中的一种或两种联合使用；
5.一种人源化系统性红斑狼疮小鼠，其特征在于，该小鼠具有如权利要求1至4中任一项所述的小鼠体内细胞。
6.根据权利要求5所述的人源化系统性红斑狼疮小鼠，其特征在于，该小鼠呈现T细胞水平异常、炎症因子水平异常、狼疮肾炎表型、B细胞亚群失调和自身抗体产生；
7.一种人源化系统性红斑狼疮小鼠的构建方法，其特征在于，所述方法为对含有权利要求1至4任一项所述的小鼠体内细胞的小鼠进行模型构建或构建权利要求5至6中任一项所述的人源化系统性红斑狼疮小鼠模型；
9.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述步骤A中构建人源化小鼠的方法包括：
10.一种权利要求1至4任一项所述的小鼠体内细胞在构建人源化系统性红斑狼疮小鼠或在医学研究/医药制备/商业销售中的应用，或
...【技术特征摘要】
1.一种小鼠体内细胞，其特征在于，所述小鼠为干扰素信号通路活化后的小鼠，其体内细胞包括了小鼠自身细胞和/或小鼠体内的人源免疫细胞。
2.根据权利要求1所述的小鼠体内细胞，其特征在于，所述活化的干扰素信号通路为tlr7-ifn i信号通路。
3.根据权利要求1所述的小鼠体内细胞，其特征在于，通过施用tlr7激动剂活化该tlr7-ifni信号通路。
4.根据权利要求1所述的小鼠体内细胞，其特征在于，所述tlr7激动剂是咪喹莫特或瑞喹莫德中的一种或两种联合使用；
5.一种人源化系统性红斑狼疮小鼠，其特征在于，该小鼠具有如权利要求1至4中任一项所述的小鼠体内细胞。
6.根据权利要求5所述的人源化系统性红斑...
【专利技术属性】
技术研发人员：李颜，朱茹洁，任德善，丁帅，刘爽，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：
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