【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物。具体地，涉及一种用于目的基因的表达盒及其应用。
技术介绍
1、基因治疗是治疗遗传疾病的有效方法，通过将外源正常基因(也即目的基因)导入靶细胞，以纠正或补偿缺陷和异常基因引起的疾病，以达到治疗目的。基因治疗主要是治疗那些对人类健康威胁严重的疾病，包括：遗传病(如血友病、囊性纤维病、家庭性高胆固醇血症、遗传性血管水肿等)、恶性肿瘤、心血管疾病、感染性疾病(如艾滋病、类风湿等)。
2、在进行基因治疗时，如何在靶细胞中有效表达目的基因并获得预期的表达效果是至关重要的。以遗传性水肿为例，它是由于c1-inh蛋白缺乏导致，正常情况下c1-inh蛋白在血液中的含量应达到160μg/ml-320μg/ml，而在先前的临床实验中证明，c1-inh在血液中至少需要达到112μg/ml才能达到治愈的效果。如此之高的含量，对于目前的基因治疗方法来说，具有相当大的挑战性，因此亟需一种理想的表达盒或表达载体，期望其具备滴度高、能感染大量细胞、制备方便且重复性好、能定向进入目的细胞并整合到宿主染色体特异位点、能以附加体形式稳定存在、不含有能激发免疫反应的组分的种种优势，从而提高基因治疗的效果和成功率，并降低副作用。
3、因此，本领域需要开发一种能够有效提高目的基因表达量的表达盒。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是提供一种表达量高、副作用低的用于目的基因的表达盒。
2、本专利技术的另一目的是提供一种长时程表达的基因递送系统。
3、本专利技术
4、在本专利技术的第一方面，提供了一种表达盒，所述表达盒从5'-3'端具有式i所示的结构：
5、z1-z2-z3-z4-z5-z6-z7-z8 (i)
6、式中，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；
7、z1为hcr元件；
8、z2为dse元件；
9、z3为tpl元件；
10、z4为emlp元件；
11、z5为内含子元件；
12、z6为无或kozak序列；
13、z7为目的基因；和
14、z8为polya元件。
15、在另一优选例中，所述z1的序列如seq id no:4所示。
16、在另一优选例中，所述z2的序列如seq id no:5所示。
17、在另一优选例中，所述z3的序列如seq id no:6所示。
18、在另一优选例中，所述z4的序列如seq id no:7所示。
19、在另一优选例中，所述z5为sv40内含子。
20、在另一优选例中，所述z5的序列如seq id no:8所示。
21、在另一优选例中，所述目的基因选自下组：正常基因、反义基因、自杀基因，或其组合。
22、在另一优选例中，所述z7选自下组：serping1基因、fix基因、荧光素酶基因、cftr基因(囊性纤维病)、ldlr基因(家庭性高胆固醇血症)、α珠蛋白基因、β珠蛋白基因(地中海贫血病)、apc基因(家族性多发性结肠息肉)、slc26a4基因、gjb2基因(先天性聋哑)、tyr基因、oca2基因、tyrp1基因、slc45a2基因(白化病)，或其组合。
23、在另一优选例中，所述z7的序列如seq id no:1所示。
24、在另一优选例中，所述表达盒具有如seq id no:3所示的核苷酸序列。
25、在另一优选例中，所述表达盒的核苷酸序列与seq id no:3所示序列具有至少50％的同一性，优选地具有至少60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％的同一性。
26、在本专利技术的第二方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码如本专利技术第一方面所述的表达盒。
27、在另一优选例中，所述核酸分子可为rna、dna或cdna。
28、在另一优选例中，所述核酸分子的序列如seq id no:3所示。
29、在另一优选例中，所述核酸分子的序列与seq id no:3所示序列具有至少50％的同一性，优选地具有至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。
30、在本专利技术的第三方面，提供了一种表达载体，所述表达载体含有如本专利技术第二方面所述的核酸分子或如本专利技术第一方面所述的表达盒。
31、在另一优选例中，所述的表达载体选自下组：dna、rna、病毒载体、质粒、转座子、其他基因转移系统，或其组合。优选地，所述表达载体包括病毒载体，如慢病毒、腺病毒、aav病毒、逆转录病毒，或其组合。
32、在另一优选例中，所述表达载体为aav载体。
33、在另一优选例中，所述的表达载体选自下组：ptomo慢病毒载体、plenti、plvth、pljm1、phcmv、plbs.cag、phr、plv等。
34、在另一优选例中，所述的表达载体中还包括选自下组的：启动子、转录增强元件wpre、长末端重复序列ltr等。
35、在另一优选例中，所述表达载体包含一个或多个启动子，所述启动子可操作地与所述多核苷酸或其片段、增强子、内含子、转录终止信号、多腺苷酸化序列、复制起点、选择性标记、核酸限制性位点、和/或同源重组位点连接。
36、在另一优选例中，所述启动子选自下组：cb启动子、sv40启动子、sox9启动子、alb启动子、tbg启动子、apoa1启动子、ttr启动子、cag启动子、aat启动子，或其组合。
37、在另一优选例中，所述内含子选自下组：sv40内含子、vh4内含子、u12内含子、chi内含子、rhd内含子，或其组合。
38、在另一优选例中，所述表达载体从5'-3'端具有式ii所示的结构：
39、a1-a2-a3 (ii)
40、式中，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；
41、a1为itr-l序列；
42、a2为如本专利技术第一方面所述的表达盒；和
43、a3为itr-r序列。
44、在本专利技术的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如本专利技术第三方面所述的表达载体，或其基因组中整合有如本专利技术第二方面所述的核酸分子。
45、在另一优选例中，所述的宿主细胞包括原核细胞或真核细胞。
46、在另一优选例中，所述的宿主细胞选自下组：大肠杆菌、酵母细胞、哺乳动物细胞。
47、在本专利技术的第五方面，提供了一种基因递送系统，包括：如本专利技术第一方面所述的表达盒或如本专利技术第二方面所述的核酸分子，以及aav衣壳蛋白。
48、在另一优选例中，所述aav衣壳蛋白为天然aav衣壳蛋白或人工改造的aav衣壳蛋白。
49、在另一优选例中，所述aav包括但不本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒从5'-3'端具有式I所示的结构：
2.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述目的基因选自下组：serpinG1基因、FIX基因、荧光素酶基因，或其组合。
3.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒具有如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1所述的表达盒。
5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有如权利要求4所述的核酸分子或如权利要求1所述的表达盒。
6.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求5所述的表达载体，或其基因组中整合有如权利要求4所述的核酸分子。
7.一种基因递送系统，其特征在于，包括：如权利要求1-3中任一项所述的表达盒或如权利要求4所述的核酸分子，以及AAV衣壳蛋白。
8.如权利要求1-3中任一项所述的表达盒、如权利要求4所述的核酸分子、如权利要求5所述的表达载体、如权利要求6所述的宿主细胞，或如权利要求7所述的基因递送系统的用途，其特征在于，用于制备
9.一种药物组合物，其特征在于，包括：
10.一种基因治疗的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：给需要的对象施用治疗有效量的如权利要求5所述的表达载体、如权利要求7所述的基因递送系统，或如权利要求9所述的药物组合物。
...【技术特征摘要】
1.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒从5'-3'端具有式i所示的结构：
2.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述目的基因选自下组：serping1基因、fix基因、荧光素酶基因，或其组合。
3.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒具有如seq id no:3所示的核苷酸序列。
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1所述的表达盒。
5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有如权利要求4所述的核酸分子或如权利要求1所述的表达盒。
6.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求5所述的表达载体，或其基因组中整合有如权利要求4所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨舟，余腾辉，贾娅倩，杨志文，张江红，申立军，吴凤岚，
申请(专利权)人：苏州荷光科汇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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