【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及溶酶体检测，具体涉及溶酶体功能检测方法、检测用荧光探针及其制备方法。
技术介绍
1、溶酶体是细胞内的一种重要细胞器，具有多种关键功能，承担了分解代谢废物和细胞内组分、细胞内物质循环和再利用等功能，参与了免疫应答反应、细胞代谢和信号传递、细胞程序性死亡等细胞内生命过程。溶酶体的功能异常与癌症，神经退行性疾病，免疫系统异常等多种疾病的发生发展有关。目前用于检测溶酶体功能的主流方法有两种，一种是通过荧光显微镜检测特定染料对溶酶体酸性的表征，如申请号为201611243460.2的中国专利技术专利公开了一种溶酶体ph变化检测试剂及其应用，其有效成分包括cm-rox，cm-rox具有总是发出蓝色荧光的香豆素部分和在酸性环境中发射红色荧光的罗丹明-x-内酰胺部分，能够根据比率荧光精确检测溶酶体中的ph变化。另一种是通过检测溶酶体内容物生物酶的降解活性，或者通过电子显微镜观察溶酶体的高分辨率图像特征等方式进行检测。这些方式均存在着一定的限制，比如方法过于复杂，或者依赖于大型设备，或者不能反映生理条件下的溶酶体生物活性等问题，目前尚没有一个比较完美的解决方案。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种溶酶体功能检测方法、检测用荧光探针及其制备方法，该检测方法操作简单且可反映生理条件下的溶酶体生物活性。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种溶酶体功能检测用荧光探针，所述荧光探针的载体为牛血清蛋白(bsa)，所述牛血清蛋白所有的赖氨酸分
3、本专利技术采用的另一技术方案为：上述溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，在磷酸盐缓冲液中，将荧光染料与牛血清蛋白混合反应，纯化后得到荧光探针。
4、本专利技术采用的又一技术方案为：一种溶酶体功能检测方法，将上述荧光探针加入培养细胞中进行孵育反应，使荧光探针被细胞内吞进入溶酶体，孵育反应完成后检测荧光信号变化。
5、本专利技术的有益效果在于：本专利技术的荧光探针采用荧光基团高密度标记牛血清蛋白，荧光基团在高密度下自抑制产生荧光猝灭，当溶酶体中的蛋白酶将bsa水解成为单个染料标记的肽时，猝灭解除，产生明亮的荧光产物，从而根据荧光变化反映溶酶体的酶活。该荧光探针可快速、准确的检测溶酶体的活性。
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1.一种溶酶体功能检测用荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的载体为牛血清蛋白，所述牛血清蛋白所有的赖氨酸分子上均标记有荧光基团。
2.一种权利要求1所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，在磷酸盐缓冲液中，将荧光染料与牛血清蛋白混合反应，纯化后得到荧光探针。
3.根据权利要求2所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH为8.0～8.5。
4.根据权利要求2所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，所述荧光染料与牛血清蛋白的摩尔比为45～55：1。
5.根据权利要求2所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，所述荧光染料与牛血清蛋白混合反应的条件为：在4℃下反应8～16h。
6.根据权利要求2所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，所述纯化的具体步骤为：通过分子筛筛除未反应的自由染料。
7.根据权利要求2所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，所述荧光染料为SuperFluor488或YF568。
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9.根据权利要求8所述的溶酶体功能检测方法，其特征在于，所述孵育反应为：在37℃下反应12～24h。
10.根据权利要求8所述的溶酶体功能检测方法，其特征在于，所述荧光探针真空冻干保存，冻干的荧光探针重悬后再加入培养细胞中进行孵育反应。
...【技术特征摘要】
1.一种溶酶体功能检测用荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的载体为牛血清蛋白，所述牛血清蛋白所有的赖氨酸分子上均标记有荧光基团。
2.一种权利要求1所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，在磷酸盐缓冲液中，将荧光染料与牛血清蛋白混合反应，纯化后得到荧光探针。
3.根据权利要求2所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的ph为8.0～8.5。
4.根据权利要求2所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，所述荧光染料与牛血清蛋白的摩尔比为45～55：1。
5.根据权利要求2所述的溶酶体功能检测用荧光探针的制备方法，其特征在于，所述荧光染料与牛血清蛋白混合反应的条件为：在4℃下反应8～16h。
...【专利技术属性】
技术研发人员：李林森，徐可，
申请(专利权)人：上海圣尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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