【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种耐胃酸、单菌包裹的层层自组装益生菌制剂及其制备方法。
技术介绍
1、益生菌定殖于人或动物肠道，是一类有益于人体健康的活性微生物，在给予足够剂量时，能够调节宿主肠道菌群，维持人体肠道稳态，促进机体营养物质摄取及吸收，同时对降低胆固醇、调节免疫系统、预防癌症及抑制肿瘤具有一定作用。因此，益生菌与食品配合使用，创造可将益生优势最大化的保健食品、功能性食品等成为市场热点。比如，将益生菌引入面点、酸奶、乳饮料、果冻及其他保健品配方中，得到富含益生菌的固体粉末、液态制剂等。目前开发的益生菌制剂或益生菌乳制品，主要使用益生菌有乳双歧杆菌、长双歧杆菌德氏乳杆菌保加利亚亚种、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌、格氏乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌、粪肠球菌等。要发挥益生菌的益生功能，就必须保证肠道具有一定数量活菌。世界卫生组织要求益生菌产品活菌数不少于106cfu/ml。然而，在实际应用场景中，益生菌的活性经常受多种外源性条件影响(例如，温度、湿度、加工方式、运输途径、储存方式以及人体消化道中胃酸、胆汁盐等)，使其生物活性大量丧失，益生菌制剂效果大打折扣。
2、为解决益生菌对酸的不耐受、储存稳定性差的问题，研究人员通过将产品冻干，降低益生菌含水量，以实现便捷储存运输，但此方法稳定性不足，易氧化且益生菌在低温处理过程中活性损失较大；利用微胶囊技术(如喷入干燥法、乳化法、凝胶技术等)，将益生菌包裹于各类天然或合成类包材中，减少外界环境接触，可有效增强耐酸性及储存稳定性，提高使用活性，但其程序复杂，成本较高，
3、因此，开发一种经济、环保、高效的益生菌制剂制备方式，帮助降低益生菌与外界接触可能性，提升抵抗外界不利因素能力，提升益生菌耐酸性能，避免益生菌氧化及活性损失，提升益生菌在实际应用中的保健功效，具有重要意义。
技术实现思路
1、为克服现有益生菌制剂技术缺陷，本专利技术的首要目的为提供一种层层自组装型耐胃酸、可单菌包裹的益生菌制剂，耐胃酸、可实现单菌包裹的层层自组装益生菌制剂的制备方法，利用益生菌表面带负电荷的性质，引入阳离子聚合物对益生菌进行改性，使其表面带上大量正电荷，通过静电相互作用形成一层保护，再利用阳离子聚合物与预水解硅烷化试剂相互作用，实现硅烷化试剂的自发沉积，得到层层自组装的益生菌制剂。
2、本专利技术的另一目的为提供上述制备方法得到的益生菌制剂。
3、本专利技术的上述目的通过以下技术方案实现：
4、一种耐胃酸、单菌包裹的、层层自组装的益生菌制剂的制备方法，包括以下步骤：
5、(1)在益生菌的悬浮液中加入阳离子聚合物，混合均匀，反应后离心收集沉淀菌体，洗涤；
6、(2)在硅烷化试剂中加入ph调节剂、离子浓度调节剂和水，得到硅烷化试剂混合溶液，进行预水解；
7、(3)将经步骤(1)处理的菌体以步骤(2)制备得到的硅烷化试剂混合溶液进行悬浮，混合均匀，反应后离心收集沉淀菌体，洗涤，得到益生菌制剂。
8、优选地，步骤(1)中所述的益生菌包括乳双歧杆菌、长双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌、格氏乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌、粪肠球菌中的至少一种；更优选包括长双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌、格氏乳杆菌、植物乳杆菌、粪肠球菌中的至少一种。
9、优选地，步骤(1)中所述的益生菌的悬浮液中的液体为离子浓度调节溶液。
10、更优选地，步骤(1)中所述的益生菌的悬浮液的制备步骤包括如下步骤：
11、将益生菌接种到液体培养基中振荡，活化培养，然后接种到相同成分的液体培养基中，恒温振荡培养，离心，弃上清液后收集菌体；用离子浓度调节溶液进行悬浮。所述的液体培养基优选为mrs液体培养基。所述的离子浓度调节剂优选为氯化钠、氯化钾、氯化铵、磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾和醋酸钠中的至少一种；更优选为氯化钠、磷酸一氢钠-磷酸二氢钠、醋酸钠和氯化铵中的至少一种。
12、优选地，步骤(1)中所述的益生菌量和阳离子聚合物的比例为1×108-3×109cfu:10×10-5-50×10-3mg；更优选为1×108-1×109cfu:10×10-3-20×10-3mg。
13、优选地，步骤(1)中所述的阳离子聚合物包括聚乙烯亚胺(pei)、聚l-赖氨酸(pll)、聚酰胺酯(pae)、聚酰胺胺(pamam)、聚(2-二甲氨基甲基丙烯酸乙酯)(pdmaema)、聚乙二醇(peg)、壳聚糖、磷胆碱修饰的聚乙烯亚胺、半乳糖修饰的三甲基壳聚糖-半胱氨酸、聚乙二醇、聚谷氨酸(pga)、聚己内酯(pcl)、聚(d，l-丙交酯-乙交酯)(plga)、聚乳酸(pla)、n-(2-羟丙基)甲基丙烯酸酯共聚物(hpma)、聚苯乙烯-马来酸酐共聚物中的至少一种；更优选包括聚乙二亚胺(pei)、聚l-赖氨酸(pll)、聚酰胺酯(pae)、聚酰胺胺(pamam)、聚乙二醇、聚乳酸、聚谷氨酸、壳聚糖、多巴胺中的至少一种；最优选包括聚酰胺酯、聚l-赖氨酸壳聚糖中的至少一种。
14、优选地，步骤(1)中所述的反应为在混匀器15-20rpm/min反应5-40min；更优选为在混匀器15-20rpm/min反应10-30min；最优选为在混匀器20rpm/min反应20min。
15、优选地，步骤(2)中所述的硅烷化试剂保护剂为能够形成硅纳米层的试剂，包括甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、二甲基二乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(teos)、正硅酸四甲酯(tmos)、双(三甲基硅烷基)乙酰胺(bsa)、3-氨丙基三乙氧基硅烷(aptes)、3-巯丙基三甲氧基硅烷(mptms)、三甲基氯硅烷(tmcs)、二乙烯三胺基丙基三甲氧基硅烷、氯三乙氧基硅烷(tecs)、n-氨乙基-γ-氨丙基三甲氧基硅烷、辛基三甲氧基硅烷、环己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、丙基三乙氧基硅烷、苄基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷和异丁基三乙氧基硅烷中的至少一种；更优选地，所述硅烷化试剂保护剂包括甲基三乙氧基硅烷、二甲基二乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(teos)、正硅酸四甲酯(tmos)、3-氨丙基三乙氧基硅烷(aptes)、二乙烯三胺基丙基三甲氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、n-氨乙基-γ-氨丙基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷、丙基三乙氧基硅烷中的至少一种。
16、优选地，步骤(2)中所述的ph调节剂包括盐酸、醋酸、磷酸、硫酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水和三羟甲基氨基甲烷(tris)中的至少一种；更优选包括盐酸、磷酸、醋酸、氨水中的至少一种。
17、优选地，步骤(2)中所述的离子浓度调节剂包括氯化钠、氯化钾、氯化铵、磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾和醋酸钠中的至少一种；更优选包括氯化钠、磷酸一氢本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种耐胃酸、单菌包裹的、层层自组装的益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1的方法，其特征在于，
3.根据权利要求2的方法，其特征在于，
4.根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的益生菌的悬浮液中的液体为离子浓度调节溶液，所述的离子浓度调节剂为氯化钠、氯化钾、氯化铵、磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾和醋酸钠中的至少一种。
5.根据权利要求1的方法，其特征在于，
6.根据权利要求5的方法，其特征在于，
7.根据权利要求1的方法，其特征在于，
8.根据权利要求1的方法，其特征在于，
9.一种耐胃酸、可实现单菌包裹的层层自组装的益生菌制剂，通过权利要求1-8任一项所述的制备方法制备得到。
10.权利要求9所述的益生菌制剂在制备含益生菌的口服药物或食品中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种耐胃酸、单菌包裹的、层层自组装的益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1的方法，其特征在于，
3.根据权利要求2的方法，其特征在于，
4.根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的益生菌的悬浮液中的液体为离子浓度调节溶液，所述的离子浓度调节剂为氯化钠、氯化钾、氯化铵、磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾和醋酸钠中的...
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