【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及靶向egfr和axl的双特异性抗体及其药物偶联物与应用。
技术介绍
1、人表皮生长因子受体（epidermal growth factor recptor，egfr）的异常高表达或者突变是多种器官和组织癌变的驱动因素。靶向egfr的药物有多种。从机制和类型上讲，有的是共价结合或者非共价结合的小分子，阻断egfr的磷酸化，从而阻断细胞增殖信号向下游传递，诱导肿瘤细胞的凋亡；有的是靶向egfr分子的大分子，如单克隆抗体类，结合egfr分子的胞外结构域，一方面阻断配体egf与egfr的结合，一方面介导了效应细胞对目标肿瘤细胞的杀伤，从而抑制肿瘤增殖。
2、靶向egfr的药物，特别是抑制其酪氨酸蛋白激酶活性的替尼类药物是肺癌治疗的一线药物，然而，这些药物带给患者的无进展生存期往往小于2年，即病人很快产生耐药。耐药机制多种多样。首先，egfr受体自身往往通过扩增产生新突变，从而对替尼类药物耐受；此外，不依赖egfr的耐药机制更加多种多样，其中，axl受体扩增介导内生性替尼药物耐药或不敏感。肿瘤细胞高表达axl（axl源于希腊语“anexelekto (axl)”，意为“不受控制的”，axl于1988年首次分离，并被鉴定为致癌基因），与肿瘤治疗预后不良高度相关。有研究证据表明，axl还通过增加特殊的转录因子翻译后修饰，促进egfr激酶结构域的突变，更快的产生egfr on-target耐药（指egfr分子本身突变导致的耐药；即药物中靶，但仍耐药）。
3、开发同时靶向egfr和axl的双特异
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种靶向egfr和axl的双特异性抗体及其药物偶联物与应用。
2、第一方面，本专利技术要求保护靶向egfr和axl的双特异性抗体。
3、本专利技术要求保护的靶向egfr和axl的双特异性抗体，含有egfr抗原结合结构域和axl抗原结合结构域。
4、所述egfr抗原结合结构域可为如下（a1）或（a2）：
5、（a1）egfr抗原结合结构域1；所述egfr抗原结合结构域1中包含抗egfr抗体的重链可变区1和抗egfr抗体的轻链可变区1；所述抗egfr抗体的重链可变区1中的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.1的第270-277位、第295-305位和第340-352位所示；所述抗egfr抗体的轻链可变区1中的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.1的第27-32位、第50-51位和第89-97位所示。
6、（a2）egfr抗原结合结构域2；所述egfr抗原结合结构域2中包含抗egfr抗体的重链可变区2和抗egfr抗体的轻链可变区2；所述抗egfr抗体的重链可变区2中的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.2的第270-279位、第297-303位和第342-352位所示；所述抗egfr抗体的轻链可变区2中的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.2的第27-32位、第50-51位和第89-97位所示。
7、所述axl抗原结合结构域可包含抗axl抗体的重链可变区和抗axl抗体的轻链可变区；所述抗axl抗体的重链可变区中的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.3的第275-282位、第300-307位和第346-352位所示；所述抗axl抗体的轻链可变区中的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.3的第27-37位、第55-56位和第94-102位所示。
8、其中，本专利技术所述cdr为“互补决定区”，是抗体可变结构域中在序列上高变并且形成在结构上确定的“超变环”和/或含有抗原接触残基“抗原接触点”的区域。cdr主要负责与抗原表位结合。一个可变区通常包含3个cdr区，从n端起依次为cdr1、cdr2和cdr3。
9、在本专利技术中，所述双特异性抗体为由第一肽链和第二肽链组成的异源二聚体。
10、其中，所述第一肽链自n端到c端可依次包括抗egfr抗体的轻链可变区、轻链恒定区、连接肽、抗egfr抗体的重链可变区、重链恒定区ch1、铰链区（junction）、重链恒定区ch2和重链恒定区ch3。所述第二肽链自n端到c端可依次包括抗axl抗体的轻链可变区、轻链恒定区、连接肽、抗axl抗体的重链可变区、重链恒定区ch1、铰链区（junction）、重链恒定区ch2和重链恒定区ch3。
11、在本专利技术的具体实施方式中，所述第一肽链和所述第二肽链的两个重链恒定区ch3之间分别使用knob-into-hole技术设计成knob结构和hole结构。
12、进一步地，在所述第一肽链和所述第二肽链中，所述轻链恒定区的类别可为κ链或λ链。所述重链恒定区的类别可为igg、igm、ige、iga或igd；如igg1、igg2、igg3和igg4中的任一种。
13、在本专利技术的一个实施案例中，所述轻链恒定区为人kappa恒定区，所述重链恒定区为人igg1恒定区(ch1+junction+ch2+ch3)。
14、在所述第一肽链中，所述抗egfr抗体的轻链可变区的氨基酸序列可如seq idno.1的第1-107位或seq id no.2的第1-107位所示，或者与上述序列具有99%以上、95%以上、90%以上、85%以上、80%以上或者75%以上的一致性（不一致处优选在骨架区(fr)）。和/或，所述轻链恒定区的氨基酸序列可如seq id no.1的第108-214位或seq id no.2的第108-214位所示，或者与上述序列具有99%以上、95%以上、90%以上、85%以上、80%以上或者75%以上的一致性。和/或，所述连接肽的氨基酸序列可如seq id no.1的第215-244位或seqid no.2的第215-244位所示，或者与上述序列具有99%以上、95%以上、90%以上、85%以上、80%以上或者75%以上的一致性。和/或，所述抗egfr抗体的重链可变区的氨基酸序列可如seq id no.1的第245-363位或seq id no.2的第245-363位所示，或者与上述序列具有99%以上、95%以上、90%以上、85%以上、80%以上或者75%以上的一致性（不一致处优选在骨架区(fr)）。和/或，所述重链恒定区ch1的氨基酸序列可如seq id no.1的第364-461位或seq idno.2的第364-461位所示，或者与上述序列具有99%以上、95%以上、90%以上、85%以上、80%以上或者75%以上的一致性。和/或，所述铰链区的氨基酸序列可如seq id no.1的第462-476位或s本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.靶向EGFR和AXL的双特异性抗体，含有EGFR抗原结合结构域和AXL抗原结合结构域；
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述双特异性抗体为由第一肽链和第二肽链组成的异源二聚体；
3. 根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其特征在于：在所述第一肽链中，所述抗EGFR抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第1-107位或SEQ ID No.2的第1-107位所示；所述轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第108-214位或SEQ ID No.2的第108-214位所示；所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第215-244位或SEQ ID No.2的第215-244位所示；所述抗EGFR抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第245-363位或SEQ ID No.2的第245-363位所示；所述重链恒定区CH1的氨基酸序列如SEQ IDNo.1的第364-461位或SEQ ID No.2的第364-461位所示；所述铰链区的氨基酸序列如SEQID No.1的第462-476位或SEQ
4. 根据权利要求3所述的双特异性抗体，其特征在于：所述第一肽链的氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示；
5.如下任一生物材料：
6.一种抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述抗体药物偶联物包含权利要求1-4中任一所述双特异性抗体以及与所述双特异性抗体相偶联的药物部分；所述药物部分中含有一种、两种或两种以上药物。
7.根据权利要求6所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述药物为Dxd。
8.权利要求7所述抗体药物偶联物的制备方法，包括如下步骤：采用TCEP还原权利要求1-4中任一所述双特异性抗体，从而使所述双特异型抗体中的半胱氨酸生成巯基，然后将马来酰胺-GGFG-Dxd分子偶联至抗体分子上，得到所述抗体药物偶联物；
9.如下任一应用：
10. 一种抗AXL的抗体，包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.7的第26-33位、第51-58位和第97-103位所示；所述轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.8的第27-37位、第55-56位和第94-102位所示。
...【技术特征摘要】
1.靶向egfr和axl的双特异性抗体，含有egfr抗原结合结构域和axl抗原结合结构域；
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述双特异性抗体为由第一肽链和第二肽链组成的异源二聚体；
3. 根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其特征在于：在所述第一肽链中，所述抗egfr抗体的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.1的第1-107位或seq id no.2的第1-107位所示；所述轻链恒定区的氨基酸序列如seq id no.1的第108-214位或seq id no.2的第108-214位所示；所述连接肽的氨基酸序列如seq id no.1的第215-244位或seq id no.2的第215-244位所示；所述抗egfr抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.1的第245-363位或seq id no.2的第245-363位所示；所述重链恒定区ch1的氨基酸序列如seq idno.1的第364-461位或seq id no.2的第364-461位所示；所述铰链区的氨基酸序列如seqid no.1的第462-476位或seq id no.2的第462-476位所示；所述重链恒定区ch2的氨基酸序列如seq id no.1的第477-586位或seq id no.2的第477-586位所示；所述重链恒定区ch3的氨基酸序列如seq id ...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋其峰，朱永强，李理想，
申请(专利权)人：北京星基贝勤生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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