【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于蔬菜品质性状分子标记开发和分子标记辅助育种，涉及甜瓜苗期抗旱性相关基因及辅助育种，具体涉及一个甜瓜中抗旱相关基因cmppr及其用途。
技术介绍
1、干旱严重胁迫植物的生长发育，是限制产量的主要环境因子。甜瓜作为葫芦科三大经济作物之一，广受世界范围内消费者的喜爱。露天栽培时的田间干旱以及设施栽培时由于灌水不足或灌溉不及导致的干旱会严重影响收获甜瓜的产量和品质。当前对于甜瓜干旱条件下生理生化特性的研究已较为全面与深入，但是从分子层面切入而进行的遗传基础上的研究还是以反向遗传学的思路为主，鲜有利用正向遗传学手段对甜瓜抗旱相关基因进行定位与功能验证的报道。挖掘定位甜瓜抗旱相关遗传变异位点并加以功能验证，开发对应的分子标记，对于提高育种效率、规避育种盲目性，促进节水抗旱型绿色农业的发展有着重要意义。
2、近年来，在对植株进行准确抗旱性评价的基础上，借助基因编辑等分子技术以及生物信息学手段，以模式植物拟南芥、水稻、番茄等为典型的部分抗旱相关基因及其机制被解析，其抗旱响应通路也越专利技术晰。围绕各抗旱指标，与干旱胁迫相关的脱落酸、细胞分裂素、生长素、赤霉素等植物内源激素，wrky、myb、nac等转录因子以及水通道蛋白、过氧化物酶、胚胎晚期富集蛋白（lea）等蛋白进行的基因组学、转录组学、蛋白组学以及代谢组学等多组学的研究使得我们对植物在干旱胁迫下的响应机制越发清楚，但仍有许多未知通路，还需更深入的研究。
3、21世纪初至如今，有许多关于甜瓜不同生育时期受到干旱胁迫时的外部形态、内部结构以及生理生化特性的
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是提供一个甜瓜中抗旱相关基因cmppr及其用途。
2、本专利技术的第一方面，提供了一个甜瓜中抗旱相关基因cmppr，该基因与苗期干旱复水存活率相关，所述基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
3、本专利技术的第二方面，还同时提供了上述甜瓜中抗旱相关基因cmppr编码的蛋白质，该蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、本专利技术的第三方面，还同时提供了鉴定甜瓜中抗旱相关基因cmppr的分子标记cmdsr(与甜瓜抗旱性cmppr基因有关的分子标记cmdsr (drought survival rate))的引物对，包括：
5、pa型正向引物：
6、5’-gaaggtgaccaagttcatgctctggctaaaacaacgtagccag-3’
7、pb型正向引物：
8、5’-gaaggtcggagtcaacggattctggctaaaacaacgtagccac-3’
9、反向引物：
10、5’-caggcttgtaaccaattgactgcat-3’
11、进一步地，引物(分子标记)可委托上海桑尼生物科技有限公司合成，在abiveriti96pcr仪上进行pcr扩增，并利用abi公司stepone荧光定量pcr仪检测荧光信号并分析基因分型。
12、本专利技术的第四方面，还同时提供了上述引物对的用途：用于甜瓜抗旱系或其后代辅助选择育种。具体为：
13、（1）提取待测甜瓜品种基因组dna；
14、（2）利用所述的引物对对待测甜瓜基因组dna进行pcr扩增；
15、（3）根据pcr产物荧光信号的差异，利用kraken软件，检测pcr扩增结果的荧光信号判断待测甜瓜是否抗旱，其中，若pcr扩增结果荧光信号颜色与pa型正向引物的荧光接头颜色一致，则待测甜瓜为纯合aa型基因型，表型为抗旱型，若pcr扩增结果荧光信号颜色与pb型正向引物的荧光接头颜色一致，则待测甜瓜为纯合bb型基因型，表型为不抗旱；若pcr扩增结果荧光信号颜色均与pa型正向引物、pb型正向引物的荧光接头颜色不同，则为杂合ab基因型。
16、进一步地，所述步骤（2）中，pcr扩增时，pcr反应体系为：20～50ng/μl甜瓜基因组dna 5.0μl，kasp master mix 5.0μl，kasp assay mix(pa型正向引物： pb型正向引物：反向引物＝2:2:5的摩尔浓度比)0.14μl，共10.14μl；
17、pcr程序为：94℃预变性，15分钟；94℃，20秒(变性) ；61℃(-0 .6℃/循环)退火60s， 10个循环；再94℃变性20s，55℃退火60s，26个循环。
18、进一步地，扩增结束后，利用bmg pherastar仪器检测荧光信号并查看分型情况。若分型不充分，则继续扩增，每3个循环查看分型情况，直至分型完全，从kraken软件中导出实验结果。
19、按照本专利技术的设定，扩增26个循环，即能实现分型完全。
20、本专利技术的有益本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一个甜瓜中抗旱相关基因CmPPR，其特征在于，所述甜瓜中抗旱相关基因CmPPR的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述的甜瓜中抗旱相关基因CmPPR编码的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.鉴定甜瓜中抗旱相关基因CmPPR的分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对包括：
4.权利要求3所述的引物对在甜瓜抗旱系或其后代辅助选择育种中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，具体为：
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述步骤（2）中，PCR扩增时，PCR反应体系为：20~50 ng/μL甜瓜基因组DNA5.0μL，KASP Master Mix5.0μL，KASP Assay Mix 0.14μL，共10.14μL；KASP Assay Mix中，Pa型正向引物：Pb型正向引物：反向引物的摩尔浓度比为2:2:5；Pa型正向引物、Pb型正向引物前分别设置各自的不同颜色的荧光接头。
7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述步
8.一种鉴定甜瓜抗旱系的方法，其特征在于，具体为：
...【技术特征摘要】
1.一个甜瓜中抗旱相关基因cmppr，其特征在于，所述甜瓜中抗旱相关基因cmppr的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.权利要求1所述的甜瓜中抗旱相关基因cmppr编码的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。
3.鉴定甜瓜中抗旱相关基因cmppr的分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对包括：
4.权利要求3所述的引物对在甜瓜抗旱系或其后代辅助选择育种中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，具体为：
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述步骤（2）中，pcr扩增时，pcr反应体系为：20~50...
【专利技术属性】
技术研发人员：张明方，夏玥琳，吕小龙，杨景华，胡仲远，
申请(专利权)人：浙江大学海南研究院，
类型：发明
国别省市：
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