【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学分析领域，具体涉及一种尿液中羟基多环芳烃检测方法及其应用。
技术介绍
1、多环芳烃是关注度较高的致癌性环境有机污染物，多环芳烃具有种类多、挥发性差、难降解和生物毒性作用显著等特征，广泛存在于大气、地表水和底泥等介质中，易被生物体富集，并可通过呼入、食入和皮肤接触等途径进入人体，对生物体产生致癌、致畸和致突变等毒性作用危害人体健康。
2、羟基多环芳烃是多环芳烃在人体内重要的代谢产物，也是目前使用最广泛的多环芳烃内暴露生物标志物，其在多环芳烃暴露及其健康风险评价研究中具有重要意义。多环芳烃进入人体后分布在各个组织器官，并在体内代谢成羟基多环芳烃，后者通过尿液排出体外，因此，尿液是评估多环芳烃内暴露水平最常见的生物样本。
3、目前，多数研究主要集中于环境介质中多环芳烃的污染特征，而针对环境中多环芳烃在人群中的暴露水平以及多环芳烃暴露与人体健康效应之间的关联性研究并未得到系统研究报道。因此，建立一种快速、简便、准确检测羟基多环芳烃的新方法对研究多环芳烃的暴露与人体健康风险之间的关联性具有重要意义。
4、国内外环境、食品和生物样本中羟基多环芳烃的检测分析方法主要包括气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法、拉曼光谱法、电化学发光法等。但上述方法对样品前处理的要求较高。固相萃取、液液萃取、quechers、凝胶渗透色谱等前处理方法已被应用于复杂体系中羟基多环芳烃的分离检测，但方法存在操作复杂、耗时长、净化能力不足、有机溶剂消耗大、灵敏度低等问题。
技术实现思路b>
1、针对现有技术中存在的问题和不足，本专利技术的目的在于提供一种尿液中羟基多环芳烃检测方法及其应用。
2、基于上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术提供了一种尿液中羟基多环芳烃检测方法，包括以下步骤：
4、s1：样品预处理：向水解后的尿液样品中加入有机试剂，离心，取上清液，浓缩，得到粗提物；将粗提物与碱性试剂混合，得到尿液样品溶液；
5、s2：萃取与检测：以步骤s1得到的尿液样品溶液为供体相，进行三相电膜萃取得到供体相中的羟基多环芳烃，萃取完成后检测接收相中羟基多环芳烃的浓度。
6、优选地，通过向尿液样品中加入水解酶溶液和酸性溶液，得到水解后的尿液样品。
7、优选地，所述水解酶溶液为β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶溶液。
8、优选地，所述酸性溶液为乙酸-乙酸钠缓冲溶液、乙酸-乙酸铵缓冲溶液中的至少一种。
9、更加优选地，所述酸性溶液为ph＝4.0～6.0乙酸-乙酸钠缓冲溶液。
10、更加优选地，所述乙酸-乙酸钠缓冲溶液ph＝5.0。
11、优选地，所述水解过程在避光条件下完成。
12、优选地，步骤s1所述有机试剂为乙腈、甲醇、乙醇、聚乙二醇中的至少一种。
13、优选地，步骤s1所述碱性试剂为氢氧化钠水溶液或加标标准溶液，所述加标标准溶液由羟基多环芳烃与氢氧化钠水溶液混合而成。
14、更加优选地，所述碱性试剂为ph＝11～13的氢氧化钠水溶液；所述加标标准溶液为含浓度为2、50或100ng/ml羟基多环芳烃的混合标准溶液。
15、更加优选地，所述碱性试剂为ph＝13的氢氧化钠水溶液。
16、优选地，步骤s1中所述碱性试剂浓度为0.1mol/l～0.5mol/l。
17、优选地，所述三相电膜萃取中采用的膜为高分子多孔膜。
18、优选地，所述高分子多孔膜为聚丙烯膜、聚四氟乙烯膜或聚偏氟乙烯膜。
19、更加优选地，所述高分子多孔膜为聚丙烯膜。
20、优选地，所述高分子多孔膜孔径为0.2μm，厚度为100μm～200μm。
21、优选地，所述高分子多孔膜上负载有机萃取溶剂；所述有机萃取溶剂为正辛醇、正丁醇、正庚醇、正壬醇中的至少一种。
22、优选地，步骤s2所述萃取时接收相为ph＝10～14氢氧化钠水溶液。
23、更加优选地，步骤s2所述萃取时接收相为ph＝13氢氧化钠水溶液。
24、优选地，步骤s2所述萃取时在供体相和接收相之间施加电场的电压为0.001v～20v。
25、更加优选地，步骤s2所述萃取时在供体相和接收相之间施加电场的电压为5v～20v。
26、优选地，步骤s2所述萃取时间为10min～40min。
27、更加优选地，步骤s2所述萃取时间为10min～40min。
28、优选地，所述羟基多环芳烃为2-萘酚、2-羟基芴、3-羟基菲、1-羟基菲中的任意一种或几种。
29、本专利技术采用三相电膜萃取技术萃取尿液样品中羟基多环芳烃，其中一种操作方法为：
30、(a)将高分子多孔膜固定在两端开口的中空管的其中一端，然后将有机萃取溶剂均匀涂抹于所述高分子多孔膜至少一侧，形成支撑液膜；所述高分子多孔膜与中空管形成的空间作为接收相容器，向接收相容器内腔中注入接收相；
31、(b)在供体相容器中加入供体相，即尿液样品，分别向供体相和接收相中插入工作电极和对电极，然后将接收相容器置于供体相容器中，并使所述支撑液膜与尿液样品溶液液面刚好接触；
32、(c)将工作电极与电源负极连接，将对电极与电源正极连接，向工作电极和对电极施加电压形成电场，在电场作用下萃取供体相中的羟基多环芳烃。
33、本专利技术采用三相电膜萃取技术萃取尿液样品中羟基多环芳烃的另外一种操作方法为：
34、(a)将中空纤维膜一端封闭，在中空纤维膜上负载有机萃取溶剂；所述中空纤维膜内部空间作为接收相容器，向接收相容器内腔中注入接收相；
35、(b)在供体相容器中加入供体相，即尿液样品，分别向供体相和接收相中插入工作电极和对电极，然后将接收相容器置于供体相容器中，并使所述中空纤维膜封闭端浸没在尿液样品溶液中；
36、(c)将工作电极与电源负极连接，将对电极与电源正极连接，向工作电极和对电极施加电压形成电场，在电场作用下萃取供体相中的羟基多环芳烃。
37、优选地，步骤s2中所述检测用仪器为高效液相色谱仪。
38、优选地，所述高效液相色谱测定的条件为：色谱柱：eclipse pah(4.6×250mm,5.0μm)；柱温：15℃；进样量：5.0μl；流速：0.5ml/min；流动相由流动相a和流动相b组成，其中，流动相a为乙腈，流动相b为水；所述高效液相色谱的梯度洗脱程序为：0～5min时，流动相为50％a-50％b；5～20min时，流动相从50％a-50％b变化为100％a-0％b；检测器：荧光检测器；激发/发射波长设定：0min时，227/355nm；3.7min时，270/324nm；5min时，250/358nm；8.2min时，284/383nm。
39、本专利技术第二方面提供了上述第一方面所述检测方法在检测尿液中羟基多环芳烃中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种尿液中羟基多环芳烃检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤S1所述碱性试剂为氢氧化钠水溶液或加标标准溶液，所述加标标准溶液由羟基多环芳烃与氢氧化钠水溶液混合而成。
3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述三相电膜萃取中采用高分子多孔膜；所述高分子多孔膜为聚丙烯膜、聚四氟乙烯膜或聚偏氟乙烯膜。
4.根据权利要求3所述检测方法，其特征在于，所述高分子多孔膜上负载有机萃取溶剂；所述有机萃取溶剂为正辛醇、正丁醇、正庚醇、正壬醇中的至少一种。
5.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述萃取时在供体相和接收相之间施加电场的电压为0.001 V~20 V；所述萃取时间为10 min~40 min。
6.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤S2所述萃取时接收相为氢氧化钠水溶液。
7.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤S1中所述有机试剂为乙腈、甲醇、乙醇、聚乙二醇中的至少一种。
8.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，通过向尿
9.根据权利要求1-8任一所述检测方法，其特征在于，所述羟基多环芳烃为2-萘酚、2-羟基芴、3-羟基菲、1-羟基菲中的任意一种或几种。
10.权利要求1-9任一所述检测方法在检测尿液中羟基多环芳烃中的应用；所述尿液包括人的尿液。
...【技术特征摘要】
1.一种尿液中羟基多环芳烃检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤s1所述碱性试剂为氢氧化钠水溶液或加标标准溶液，所述加标标准溶液由羟基多环芳烃与氢氧化钠水溶液混合而成。
3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述三相电膜萃取中采用高分子多孔膜；所述高分子多孔膜为聚丙烯膜、聚四氟乙烯膜或聚偏氟乙烯膜。
4.根据权利要求3所述检测方法，其特征在于，所述高分子多孔膜上负载有机萃取溶剂；所述有机萃取溶剂为正辛醇、正丁醇、正庚醇、正壬醇中的至少一种。
5.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述萃取时在供体相和接收相之间施加电场的电压为0.001 v~20 v；所述萃取时间为10 min~40 min。
...【专利技术属性】
技术研发人员：高海东，万丽斌，高树财，吕明，刘业茹，姚静静，刘晓，张梦雪，高火亮，
申请(专利权)人：河南省商业科学研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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