【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含聚噁唑啉(poz)或聚(2-甲基-2-噁唑啉)(pmoz)-脂质和核酸(优选地mrna)的脂质纳米颗粒，其可用作基于mrna的疫苗或基于mrna的治疗剂。本专利技术还涉及包含脂质纳米颗粒(lnp)的组合物，所述脂质纳米颗粒包含含有poz-或pmoz-部分的脂质(poz-脂质、pmoz-脂质)和mrna，以及所述lnp或包含poz或pmoz-脂质的组合物用于制备药物组合物、尤其是疫苗组合物的用途，例如用于在预防或治疗感染性疾病、肿瘤或癌症疾病、过敏或自身免疫疾病中使用。本专利技术还涉及用于mrna编码的蛋白质替代疗法的基于mrna的治疗性lnp组合物，其中所述lnp组合物包含poz-或pmoz-脂质。其实例是可以通过肝移植恢复的适应症或疾病(例如otc缺乏症)。本专利技术进一步描述了使用前述lnp或包含含有poz-或pmoz-部分的脂质的组合物进行蛋白质替代疗法的疗法。本专利技术还描述了治疗或预防上述疾病的方法。mrna还可以编码抗体、抗体片段、抗体的变体、加合物或衍生物，例如单链可变片段、双抗体或三抗体。
技术介绍
1、通常，疫苗可细分为“第一代”、“第二代”和“第三代”疫苗。“第一代”疫苗通常是全生物体疫苗。它们基于活的减毒的或灭活的病原体，例如病毒、细菌等。活的减毒疫苗的主要缺点是存在恢复为危及生命的变种的风险。因此，尽管已减毒，此类病原体本质上仍可能具有不可预测的风险。灭活的病原体可能无法像期望那样有效产生特异性免疫应答。为了尽量减少这些风险，开发了“第二代”疫苗。这些通常是亚单位疫苗，由源自病原体的确定
2、基因疫苗，即用于基因疫苗接种的疫苗，通常被理解为“第三代”疫苗。它们通常由基因工程核酸分子组成，其允许在体内表达病原体或肿瘤抗原特征的肽或蛋白质(抗原)片段。基因疫苗在施用于患者时在被靶细胞摄取后表达。施用的核酸的表达导致编码蛋白质的产生。如果这些蛋白质被患者的免疫系统识别为外来物，就会触发免疫应答。
3、dna以及rna可以用作在基因疫苗接种的情况下施用的核酸分子。已知dna相对稳定且易于处理。然而，dna的使用存在将所施用的dna片段意外插入患者基因组的风险，可能导致突变事件，例如受损基因的功能的丧失。另一个风险是出现了不希望的抗dna抗体的产生。另一个缺点是在dna施用后可实现的编码肽或蛋白质的表达水平有限，因为dna必须进入细胞核以便进行转录然后才能翻译所得mrna。除其它原因外，所施用的dna的表达水平将取决于调节dna转录的特定转录因子的存在。如果没有这些因子，dna转录将不会产生令人满意的rna量。结果，获得的翻译肽或蛋白质的水平有限。
4、使用信使rna(mrna)将遗传信息传递到靶细胞中为dna提供了一种有吸引力的替代方案。使用mrna的优点包括瞬时表达和非转化特性——mrna不需要进入细胞核而进行表达，而且不会被整合到宿主基因组中，从而消除了肿瘤发生的风险，即，通过使用rna代替dna进行基因疫苗接种，可以最大限度地减少或避免不期望的基因组整合和抗dna抗体产生的风险。然而，rna被认为是一种相当不稳定的分子种类，很容易被普遍存在的rna酶降解。包含与鱼精蛋白复合的抗原编码mrna的mrna疫苗已在现有技术中有所描述(例如pmid27336830或23159882、ep1083232、wo2010037539、wo2012116811、wo2012116810和wo2015024665)。
5、目前在治疗环境中使用rna或mrna面临两个问题。首先，游离rna在血浆中容易被核酸酶消化。其次，游离rna进入相关翻译机器所在的细胞内区室的能力有限。由阳离子脂质与其它脂质成分(例如中性脂质、胆固醇、peg化脂质)和rna或mrna形成的脂质纳米颗粒已被用于阻止血浆中rna的降解并促进寡核苷酸的细胞摄取。在这方面，wo2018078053和wo2016176330描述了包含编码不同抗原的未修饰的和核苷修饰的rna的脂质纳米颗粒组合物；这两篇参考文献均通过引用整体并入本文。除了分子组成之外，参数对递送效率也起着重要作用，例如粒径、电荷或分子组分如聚乙二醇(peg)或配体的接枝。接枝fda批准的peg被认为减少颗粒与血清的相互作用，增加血清稳定性并延长循环时间，有助于某些靶向方法。此外，peg化可用于颗粒工程化改造。例如，如果通过将rna的水相与脂质的有机相混合来制备脂质纳米颗粒(lnp)，则脂质混合物中需要一定量的peg缀合脂质，否则颗粒在混合步骤中聚集。通过改变含有不同摩尔质量的peg的peg-脂质的摩尔分数，可以表明可以调节颗粒尺寸。同样，可以通过改变peg化脂质的peg部分的摩尔质量来调节颗粒尺寸。可用的典型尺寸范围为30至200nm(belliveau等人,2012,molecular therapy-nucleic acids 1(8):e37,pmid:23344179)。以这种方式形成的颗粒具有额外的优点，即由于peg部分，它们与血清成分的相互作用较少，并且具有较长的循环半衰期，这在许多药物递送方法中是理想的。综上所述，没有peg脂质，就无法形成离散尺寸的颗粒；颗粒最终会形成大的聚集体并沉淀。
6、因此，在由乙醇相和水相形成lnp的技术中，peg脂质的主要功能之一是通过在所得颗粒的表面上形成空间屏障来促进颗粒的自组装，其是当核酸在含有脂质的乙醇溶液中快速混合以结合rna时形成的。空间peg屏障可防止颗粒之间的融合，并促进直径<100nm的lnp的均匀群体的形成。
7、peg是最广泛使用的用于药物递送的“隐形”聚合物，被认为是黄金标准。为了产生均匀且胶体稳定的纳米颗粒群体，由于peg脂质具有亲水性空间位阻特性(peg外壳可防止静电或范德华引力导致聚集)，因此通常将其掺入系统中。peg化允许在聚合物周围引致水包膜，从而保护rna复合物免受血清蛋白的调理作用，增加血清半衰期并降低快速肾脏清除率，从而改善药代动力学行为。脂质酰基链长度的变化(c18、c16或c14)改变了peg-脂质掺入颗粒的稳定性，即peg脱落，从而调节体内生物性能和药代动力学。使用具有短酰基链(c14)的peg-脂质在体内从lnp解离的半衰期小于30分钟，可产生最佳的肝细胞基因沉默效力(chen等人,2014,j control release 196:106-12；ambegia等人,2005,biochimica etbiophysica acta 1669:155-163)。此外，通过改变peg-脂质参数，可以实现对颗粒尺寸的严格控制，即颗粒中较高的peg-mw或较高的peg-脂质摩尔分数会产生较小的颗粒。
8、尽管有这些优点，纳米颗粒的peg化也会导致各种影响，可能不利于药物递送的预期用途。已知脂质体和lnp的peg化会减少细胞摄取和内体逃逸，最终降低整体转染效率。事实上，peg外壳为颗粒与细胞的有效结合提供了空间屏障，并且还通过防止脂质体和内体膜之间的膜融合来阻碍内体释放。因此，必须始终仔细调整peg-脂质的类型和peg-脂质的用量。一方本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.根据式(I)的聚合物缀合脂质：
2.根据权利要求1所述的聚合物缀合脂质，其中[P]是杂聚物部分或均聚物部分，其包含多个选自由以下组成的组的单体单元：
3.根据权利要求1至权利要求2中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述聚合物缀合脂质选自由以下组成的组：POZ-单酰基甘油缀合物、POZ-二酰基甘油缀合物、POZ-二烷氧基丙基缀合物、POZ-类固醇或POZ-甾醇缀合物、POZ-磷脂缀合物、POZ-神经酰胺缀合物及其混合物。
4.根据权利要求1至权利要求3中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中
5.根据权利要求1至权利要求4中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述脂质部分[L]包含至少一个、优选地两个直链或支化、饱和或不饱和烷基链，所述烷基链包含6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个碳原子，优选地10至20个碳原子，更优选地12至18个碳原子，甚至更优选地14、16或18个碳原子，甚至更优选地16或18个碳原子，最优选地14个碳原子，p>
6.根据权利要求1至权利要求5中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述接头基团[接头]选自但不限于由以下组成的组：pH敏感部分、肽键或酰胺键(—CO-NH—)、烷基或烯基部分(C1-9烷基或C2-9烯基)、两性离子接头、不含酯的接头部分和含酯的接头部分(—C(O)O—或—OC(O)—)、酰氨基(—C(O)NH—)、二硫化物(—S—S—)、羰基(—C(O)—)、醚(—O—)、硫醚(—S—)、肟(例如—C(H)＝N—O—或—O—N＝C(H)—)、氨基甲酸酯(—NHC(O)O—)、脲(—NHC(O)NH—)、丁二酰基(—(O)CCH2CH2C(O)—)、琥珀酰胺基(—NHC(O)CH2CH2C(O)NH—)、(—NHC(O)CH2CH2C(O)—)、(—NHC(O)CH2CH2C(O)O—)、—C(R5)＝N—、—N＝C(R5)—、—C(R5)＝N—O—、—O—N＝C(R5)—、—O—C(O)O—、—C(O)N(R5)、—N(R5)C(O)—、—C(S)(NR5)—、(NR5)C(S)—、—N(R5)C(O)N(R5)—、—C(O)S—、—SC(O)—、—C(S)O—、—OC(S)—、—OSi(R5)2O—、—C(O)(CR3R4)C(O)O—、或—OC(O)(CR3R4)C(O)—、碳酸酯(—OC(O)O—)、氮(N)、琥珀酰基、琥珀酸酯、磷酸酯(—O—(O)POH—O—)和磺酸酯，及其组合，其中R3、R4和R5独立地是H或烷基(例如，C1-C4烷基)，优选地其中所述接头基团[接头]选自由以下组成的组：(—NHC(O)CH2CH2C(O)—)、肽键或酰胺键(—CO-NH—)、(—NHC(O)CH2CH2C(O)O—)和—NH-CH2—。
7.根据权利要求1至权利要求6中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述接头基团[接头]包含酰胺接头部分、优选地酯接头部分，或其中所述接头基团[接头]包含琥珀酸酯、肽键或酰胺键(—CO-NH—)、胺或仲胺，最优选地其中所述接头基团[接头]包含(-NHC(O)CH2CH2C(O)-)。
8.根据权利要求1至权利要求7中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述聚合物缀合脂质选自由“PMOZ 1”、“PMOZ 2”、“PMOZ 3”、“PMOZ 4”和“PMOZ 5”组成的组，最优选地所述聚合物缀合脂质是“PMOZ 4”；
9.一种脂质纳米颗粒，包含均聚物部分，所述均聚物部分包含至少一个聚噁唑啉(POZ)单体单元
10.根据权利要求9所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒还包含阳离子或可电离脂质。
11.根据权利要求9至权利要求10所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒
12.根据权利要求9至权利要求11中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述阳离子或可电离脂质优选地在生理pH下携带净正电荷，更优选地其中所述阳离子或可电离脂质包含叔氮基团或季氮基团。
13.根据权利要求9至权利要求12中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒还包含磷脂，其中优选地所述磷脂是两性离子化合物，选自但不限于以下的组：1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPhyPE；1,2-二-(3,7,11,15-四甲基十六酰基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPhyPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC；二油酰基磷脂酰胆碱)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC；二棕榈酰...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.根据式(i)的聚合物缀合脂质：
2.根据权利要求1所述的聚合物缀合脂质，其中[p]是杂聚物部分或均聚物部分，其包含多个选自由以下组成的组的单体单元：
3.根据权利要求1至权利要求2中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述聚合物缀合脂质选自由以下组成的组：poz-单酰基甘油缀合物、poz-二酰基甘油缀合物、poz-二烷氧基丙基缀合物、poz-类固醇或poz-甾醇缀合物、poz-磷脂缀合物、poz-神经酰胺缀合物及其混合物。
4.根据权利要求1至权利要求3中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中
5.根据权利要求1至权利要求4中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述脂质部分[l]包含至少一个、优选地两个直链或支化、饱和或不饱和烷基链，所述烷基链包含6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个碳原子，优选地10至20个碳原子，更优选地12至18个碳原子，甚至更优选地14、16或18个碳原子，甚至更优选地16或18个碳原子，最优选地14个碳原子，
6.根据权利要求1至权利要求5中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述接头基团[接头]选自但不限于由以下组成的组：ph敏感部分、肽键或酰胺键(—co-nh—)、烷基或烯基部分(c1-9烷基或c2-9烯基)、两性离子接头、不含酯的接头部分和含酯的接头部分(—c(o)o—或—oc(o)—)、酰氨基(—c(o)nh—)、二硫化物(—s—s—)、羰基(—c(o)—)、醚(—o—)、硫醚(—s—)、肟(例如—c(h)＝n—o—或—o—n＝c(h)—)、氨基甲酸酯(—nhc(o)o—)、脲(—nhc(o)nh—)、丁二酰基(—(o)cch2ch2c(o)—)、琥珀酰胺基(—nhc(o)ch2ch2c(o)nh—)、(—nhc(o)ch2ch2c(o)—)、(—nhc(o)ch2ch2c(o)o—)、—c(r5)＝n—、—n＝c(r5)—、—c(r5)＝n—o—、—o—n＝c(r5)—、—o—c(o)o—、—c(o)n(r5)、—n(r5)c(o)—、—c(s)(nr5)—、(nr5)c(s)—、—n(r5)c(o)n(r5)—、—c(o)s—、—sc(o)—、—c(s)o—、—oc(s)—、—osi(r5)2o—、—c(o)(cr3r4)c(o)o—、或—oc(o)(cr3r4)c(o)—、碳酸酯(—oc(o)o—)、氮(n)、琥珀酰基、琥珀酸酯、磷酸酯(—o—(o)poh—o—)和磺酸酯，及其组合，其中r3、r4和r5独立地是h或烷基(例如，c1-c4烷基)，优选地其中所述接头基团[接头]选自由以下组成的组：(—nhc(o)ch2ch2c(o)—)、肽键或酰胺键(—co-nh—)、(—nhc(o)ch2ch2c(o)o—)和—nh-ch2—。
7.根据权利要求1至权利要求6中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述接头基团[接头]包含酰胺接头部分、优选地酯接头部分，或其中所述接头基团[接头]包含琥珀酸酯、肽键或酰胺键(—co-nh—)、胺或仲胺，最优选地其中所述接头基团[接头]包含(-nhc(o)ch2ch2c(o)-)。
8.根据权利要求1至权利要求7中任一项所述的聚合物缀合脂质，其中所述聚合物缀合脂质选自由“pmoz 1”、“pmoz 2”、“pmoz 3”、“pmoz 4”和“pmoz 5”组成的组，最优选地所述聚合物缀合脂质是“pmoz 4”；
9.一种脂质纳米颗粒，包含均聚物部分，所述均聚物部分包含至少一个聚噁唑啉(poz)单体单元
10.根据权利要求9所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒还包含阳离子或可电离脂质。
11.根据权利要求9至权利要求10所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒
12.根据权利要求9至权利要求11中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述阳离子或可电离脂质优选地在生理ph下携带净正电荷，更优选地其中所述阳离子或可电离脂质包含叔氮基团或季氮基团。
13.根据权利要求9至权利要求12中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒还包含磷脂，其中优选地所述磷脂是两性离子化合物，选自但不限于以下的组：1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dphype；1,2-二-(3,7,11,15-四甲基十六酰基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dphypc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dopc；二油酰基磷脂酰胆碱)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc；二棕榈酰基磷脂酰胆碱)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dope)、磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二油酰基-磷脂酰乙醇胺(dopea)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dspe)、棕榈酰油酰基磷脂酰胆碱(popc)、棕榈酰油酰基-磷脂酰乙醇胺(pope)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dppe)、二油酰基-磷脂酰乙醇胺4-(n-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯(dope-mal)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dmpe)、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dlope)、二硬脂酰基-磷脂酰乙醇胺(dspe)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(pope)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dlpe)、16-o-单甲基磷酸乙醇胺、16-o-二甲基磷脂酰乙醇胺、1,2-二芥酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(depe)、18-1-反式磷脂酰乙醇胺、1-硬脂酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(sope)、1,2-二角鲨烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dsqpe)、1,2-二反油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(反式dope)、1-硬脂酰基-2-亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(slpe)、1-十三烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1-油酰基-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)(pops)、1-1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)(dops)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸-l-丝氨酸(钠盐)、1-o-十六烷基-2-o-(9z-十八烯基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1,2-二-o-植烷基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1-棕榈酰基-2-胆固醇半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(pchemspc)、1,2-二胆固醇半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dchemspc)、2-((2,3-双(油酰氧基)丙基)二甲基铵)磷酸氢乙酯(docp)、2-((2,3-双(油酰氧基)丙基)二甲基铵)乙基乙基磷酸酯(docpe)和1-o-十八烷基-2-o-甲基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(依地福新)，优选地其中所述磷脂是dspc或dphype，最优选地dphype。
14.根据权利要求9至权利要求13中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒还包含甾醇或类固醇，优选地选自由胆固醇、胆固醇半琥珀酸酯(chems)及其衍生物组成的组，优选地其中所述脂质纳米颗粒还包含胆固醇。
15.根据权利要求9至权利要求14中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中优选地基于100％的所有脂质组分或辅料的组合物的摩尔百分比，所述脂质纳米颗粒包含
16.根据权利要求9至权利要求15中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述聚合物缀合脂质是根据权利要求1至权利要求8中任一项所述的pmoz-脂质。
17.根据权利要求9至权利要求16中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒包含以选自由以下组成的组的比例的辅料：
18.根据权利要求9至权利要求17中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中根据权利要求1至权利要求8所述的聚合物缀合脂质抑制所述脂质纳米颗粒的聚集。
19.根据权利要求9至权利要求18中任一项所述的脂质纳米颗粒，进一步包含生物活性成分。
20.根据权利要求19所述的脂质纳米颗粒，其中所述生物活性成分是选自由以下组成的组的核酸化合物：rna、人工mrna、包含至少一个编码序列的化学修饰或未修饰的信使rna(mrna)、自我复制rna、环状rna、病毒rna和复制子rna；或其任意组合，更优选地，其中所述生物活性成分是化学修饰的mrna或化学未修饰的mrna。
21.根据权利要求9至权利要求20中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述mrna与所述脂质纳米颗粒缔合，优选地其中所述mrna被封装在所述脂质纳米颗粒中。
22.根据权利要求9至权利要求21中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒包含使得实现范围在约5至约20、更优选地约10至约18、甚至更优选地约12至约16、最优选地约14的n/p比的量的mrna。
23.根据权利要求9至权利要求22中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒是用于用无菌液体载体重构的无菌固体组合物，并且其中所述脂质纳米颗粒还包含一种或多种选自ph调节剂、填充剂、稳定剂、非离子型表面活性剂和抗氧化剂的非活性成分，并且其中所述无菌液体载体是水性载体。
24.根据权利要求9至权利要求23中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒是无菌液体组合物，并且其中所述脂质纳米颗粒的通过动态激光散射测定的平均流体动力学直径为约50nm至约300nm、或约60nm至约250nm、或约60nm至约200nm、或约70至200nm、或约75nm至约160nm、或约85nm至约140nm、或约90nm至约130nm、或约50nm至约120nm。
25.根据权利要求9至权利要求24中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒的ζ电位在-50mv至+50mv的范围内、优选地在-25mv至+25mv的范围内、更优选地在-10mv至+10mv的范围内、最优选地在-5mv至+5mv的范围内。
26.根据权利要求9至权利要求25中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述mrna化合物是单、双或多顺反子mrna。
27.根据权利要求9至权利要求26中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述mrna化合物包含至少一种化学修饰。
28.根据权利要求27所述的脂质纳米颗粒，其中所述化学修饰选自由碱基修饰、糖修饰、骨架修饰和脂质修饰组成的组，优选地其中所述化学修饰是碱基修饰，更优选地其中所述碱基修饰优选地选自由以下组成的组：假尿苷(psi或ψ)、n1-甲基假尿苷(n1mpu、n1mpsi或n1mψ)、1-乙基假尿嘧啶、2-硫尿嘧啶(s2u)、4-硫尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶及其任意组合。
29.根据权利要求9至权利要求28中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述mrna化合物包含编码肽或蛋白质的编码区，其中所述编码区表现出序列修饰。
30.根据权利要求29所述的脂质纳米颗粒，其中所述序列修饰选自序列的g/c含量修饰、密码子修饰、密码子优化或c优化；优选地其中，与相应野生型mrna的编码区相比，
31.根据权利要求9至权利要求30中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述mrna化合物还包含
32.根据权利要求9至权利要求31中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中至少一个编码rna包含5’-cap结构，优选地m7g、cap0、cap1、cap2、修饰的cap0或修饰的cap1结构。
33.根据权利要求9至权利要求32中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中至少一个编码rna包含至少一个异源5’-utr和/或至少一个异源3’-utr，优选地其中所述至少一个异源5’-utr包含源自选自hsd17b4、rpl32、asah1、atp5a1、mp68、ndufa4、nosip、rpl31、slc7a3、tubb4b和ubqln2的基因或源自这些基因中任一个基因的同源物、片段或变体的5’-utr的核酸序列；和/或
34.根据权利要求9至权利要求33中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述至少一个编码rna包含(i)hsd17b4 5’-utr和psmb3 3’-utr或(ii)rpl32 5’-utr和alb7 3’-utr，优选地突变的α-珠蛋白3’-utr(seq id no:11/12)，更优选地hsd17b4 5’-utr(seq id no:21/22)和psmb3 3’-utr(seq id no:19/20)。
35.根据权利要求9至权利要求34中任一项所述的脂质纳米颗粒，其在5’至3’方向上包含以下元件：
36.根据权利要求9至权利要求35中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述生物活性成分是
37.根据权利要求36分项(a)所述的脂质纳米颗粒，其中所述至少一个编码病原性抗原的编码序列选自由细菌、病毒、真菌和原生动物抗原组成的组。
38.根据权利要求37所述的脂质纳...
【专利技术属性】
技术研发人员：帕特里克·鲍姆霍夫，杰玛·纳瓦罗，托比亚斯·博尔赫斯特，利维亚·帕尔默斯顿·门德斯，卡罗琳·蒂勒苏斯，
申请(专利权)人：库瑞瓦格欧洲公司，
类型：发明
国别省市：
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