【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程，具体涉及一种提高水稻种子千粒重的方法。
技术介绍
1、水稻是我国最重要的粮食作物之一，保证水稻高产、稳产对于保障我国粮食安全具有的重要意义。千粒重是影响水稻产量的重要性状之一，阐明其遗传调控机制，为水稻高产分子设计育种提供重要的理论依据。
2、水稻千粒重是一个由多基因控制的数量性状，遗传基础复杂，受粒型、灌浆等影响。近年来，随着基因编辑技术、高通量测序等现代生物技术的发展，植物遗传学家鉴定克隆了150余个水稻粒重相关基因。转录因子osbhlh57突变导致水稻千粒重与结实率降低，从而降低了水稻产量。wbg1编码一个水稻线粒体定位的三角状五肽重复蛋白，影响线粒体基因nad1内含子的剪切效率，其突变导致水稻籽粒千粒重降低。gs10编码一种具有六个串联armadillo重复序列的蛋白，其突变体表现出细长粒、千粒重降低。gs10通过与tud1相互作用调节油菜素内酯信号传导。然而，水稻千粒重调控的机理极其复杂，亟待挖掘新的千粒重调控基因。
3、泛素化需要e1泛素激活酶、e2泛素结合酶以及e3泛素连接酶共同完成。在蛋白质的细胞器定位、代谢、稳定和降解中，泛素化发挥着无可替代的作用。相关研究表明，e2泛素结合酶在水稻生长发育中起着重要的调控作用。水稻基因组含有48个泛素缀合酶，分为15个不同的亚家族。osubc26编码一种水稻泛素缀合酶，其表达受稻瘟病病菌接种和茉莉酸甲酯处理诱导，并且与ring型e3连接酶ucip2相互作用，介导调节wrky45的表达，在水稻抗病性中发挥重要作用。osubc1
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是为水稻育种提供一种新选择。
2、本专利技术的技术方案是一种调控种子性状的方法，通过阻断或减弱osubc16基因的表达实现。
3、具体的，所述阻断或减弱水稻中osubc16基因的表达方式为敲除osubc16基因或者干扰osubc16基因的表达。
4、其中，所述敲除osubc16基因的方法为基因组编辑法、同源重组法或随机插入突变法中的至少一种。
5、更进一步的，所述基因组编辑法包括巨大核酸酶法、zfn法、talen法或crispr-cas法中的至少一种。
6、特别的，所述crispr-cas法包括如下步骤：
7、a、设计针对loc_os03g06705基因的sgrna；
8、b、构建表达sgrna的cas编辑表达载体；
9、c、将cas编辑表达载体转化水稻。
10、其中，所述crispr-cas法为crispr-cas9、crispr-cas12a、crispr-cas12a或crispr-cas12b。
11、特别的，所述sgrna序列如seq id no.11所示。
12、优选的，所述表达载体为pcambia1305。
13、具体的，所述调控种子性状为提高种子千粒重、提高种子粒宽和/或降低种子长度。
14、本专利技术的有益效果：为了实现高产育种，本专利技术以osubc16基因为目标进行了研究。通过设计水稻种子千粒重调控基因osubc16敲除靶标位点，利用crispr-cas9技术构建基因敲除载体，转化水稻愈伤组织，筛选获得osubc16基因敲除纯合突变体。相比对照，不同敲除突变体的千粒重显著增加。可知，本专利技术提供的敲除水稻种子千粒重调控基因osubc16以增加千粒重的方法，具有重要的应用价值，对水稻产量遗传改良具有重要的意义。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种调控种子性状的方法，其特征在于：通过阻断或减弱OsUBC16基因的表达实现。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述阻断或减弱水稻中OsUBC16基因的表达方式为敲除OsUBC16基因或者干扰OsUBC16基因的表达。
3.根据权利要求3所述方法，其特征在于：所述敲除OsUBC16基因的方法为基因组编辑法、同源重组法或随机插入突变法中的至少一种。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于：所述基因组编辑法包括巨大核酸酶法、ZFN法、TALEN法或CRISPR-Cas法中的至少一种。
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于：所述CRISPR-Cas法包括如下步骤：
6.根据权利要求4所述方法，其特征在于：所述CRISPR-Cas法为CRISPR-Cas9、CRISPR-Cas12a、CRISPR-Cas12a或CRISPR-Cas12b。
7.根据权利要求5所述方法，其特征在于：所述sgRNA序列如SEQ ID No.11所示。
8.根据权利要求5所述方法，其特征在于：所述表达载体为pC
9.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述调控种子性状为提高种子千粒重、提高种子粒宽和/或降低种子长度。
...【技术特征摘要】
1.一种调控种子性状的方法，其特征在于：通过阻断或减弱osubc16基因的表达实现。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述阻断或减弱水稻中osubc16基因的表达方式为敲除osubc16基因或者干扰osubc16基因的表达。
3.根据权利要求3所述方法，其特征在于：所述敲除osubc16基因的方法为基因组编辑法、同源重组法或随机插入突变法中的至少一种。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于：所述基因组编辑法包括巨大核酸酶法、zfn法、talen法或crispr-cas法中的至少一种。
5.根据权利要求4所...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘喜，袁雨茹，许可可，刘梦雨，李亭静，王雪，高清松，
申请(专利权)人：淮阴师范学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。