【技术实现步骤摘要】
本申请涉及非洲猪瘟mrna疫苗，特别是涉及一种非洲猪瘟mrna表位疫苗及其应用。
技术介绍
1、非洲猪瘟(asf)是由非洲猪瘟病毒引起的一种病毒性出血热，具有极高的传染性和致死率。由于没有商业化的安全有效的疫苗，一旦发生疫情，只能集中扑杀，给养猪业带来巨大的损失。世界动物卫生组织(oie)将其列为必须通报的传染病。
2、非洲猪瘟病毒(asfv)属非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属，是一种虫媒dna病毒。该病毒基因组巨大，约为170-190kb，编码超过150个蛋白；结构上大而复杂，直径约260nm，由外向内共包括外膜、衣壳、内膜、核膜和核五层结构。asfv自身理化性质稳定，对环境的适应性极强，能够耐受ph3.9-11.5的范围，在低温下可以长时间存活，并还可附着于蜱虫和运输工具，使得它的传染性更强。asfv按毒力可分为强、中、低毒力毒株。强、中毒力毒株能引起急性感染或超急性感染，有极高的死亡率；而低毒力毒株虽然没有较高的死亡率，但是通常会导致猪发热、精神沉郁、食欲不佳和流产等，对于养猪业同样十分不利。
3、因此，开发安全、有效、商业化的非洲猪瘟疫苗十分重要。采用现代分子生物学、免疫学等技术研制安全、有效的非洲猪瘟新型疫苗是实现非洲猪瘟防治规划的技术保障，也是提高非洲猪瘟防控能力、保障养猪业可持续发展的基础，是新农业发展的战略需求。
4、目前开发非洲猪瘟疫苗的思路主要分为两类：一是传统的基于病毒的减毒策略，包括开发灭活疫苗、减毒活疫苗、减毒细胞系适应性疫苗和基因缺失疫苗；二是新型的基于蛋白的递送策略，
5、基于病毒的减毒策略中，灭活疫苗在实际应用过程中没有良好的效果，而减毒活疫苗、减毒细胞系适应性疫苗和基因缺失疫苗虽然有一定的保护率，但是始终存在病毒变异、毒力返强、对非同源毒株保护率不高的缺点，加之多次免疫后难以区分免疫动物和感染动物，不利于非洲猪瘟净化，也不利于后续的猪肉产品加工和出口。此外，此种疫苗策略最终需要病毒本身或其部分基因，存在加重病情或诱发其他临床症状的风险。
6、相对的，基于蛋白的疗法能靶向特定抗原发挥作用，具有高度特异性，因而在疫苗开发中更具有优势。基于蛋白的递送策略中，目前已有非洲猪瘟亚单位疫苗、载体疫苗和dna疫苗的研究；但是，对于非洲猪瘟病毒mrna疫苗的研究相对较少。并且，在目前对非洲猪瘟病毒结构、蛋白功能和免疫逃逸机制等没有充分了解前，现有的疫苗普遍存在难以产生足够保护率的问题。
技术实现思路
1、本申请的目的是提供一种新的非洲猪瘟mrna表位疫苗及其应用。
2、为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
3、本申请的第一方面公开了一种非洲猪瘟mrna表位疫苗，其由编码表位蛋白的核糖核酸和mrna元件组成，其中，表位蛋白包括来源于非洲猪瘟病毒的7种抗原蛋白的表位，7种抗原蛋白为cd2v、ep153r、p30、p49、p54、p72和pp220。
4、需要说明的是，本申请从非洲猪瘟病毒编码的众多蛋白中创造性的选择cd2v、ep153r、p30、p49、p54、p72和pp220作为非洲猪瘟mrna疫苗的抗原表位，使得由此制备的mrna表位疫苗免疫效果好、质量稳定，能诱导机体产生特定的体液免疫和细胞免疫，从而有效的预防非洲猪瘟病毒。可以理解，本申请的关键在于采用这7种抗原蛋白作为非洲猪瘟mrna疫苗的抗原表位，至于具体的表位序列，可以利用表位预测工具预测获得；但是，为了确保非洲猪瘟mrna表位疫苗的免疫效果和质量，本申请优选的方案中不仅对表位序列进行了明确限定，甚至对各表位的连接顺序也进行了限定。
5、还需要说明的是，本申请的关键在于采用cd2v、ep153r、p30、p49、p54、p72和pp220这7种抗原蛋白作为非洲猪瘟mrna疫苗的抗原表位，至于mrna元件，例如5’cap(即5’帽)、5’utr(即5’端非编码区)、3’utr(即3’端非编码区)和poly a尾(即多腺苷酸化尾)等，其主要是起修饰作用，增加mrna的稳定性、翻译效率和免疫反应等。因此，本申请的mrna元件可以参考现有的mrna疫苗中常规使用的mrna元件。
6、本申请的一种实现方式中，来源于抗原蛋白cd2v的表位的氨基酸序列为seq idno.5至10所示序列，来源于抗原蛋白ep153r的表位的氨基酸序列为seq id no.11和12所示序列，来源于抗原蛋白p30的表位的氨基酸序列为seq id no.13至17所示序列，来源于抗原蛋白p49的表位的氨基酸序列为seq id no.18至21所示序列，来源于抗原蛋白p54的表位的氨基酸序列为seq id no.22至24所示序列，来源于抗原蛋白p72的表位的氨基酸序列为seqid no.25至32所示序列，来源于抗原蛋白pp220的表位的氨基酸序列为seq id no.33至46所示序列。
7、需要说明的是，序列为seq id no.5至46所示的氨基酸序列，仅仅是证明了本申请的7种抗原蛋白能够作为非洲猪瘟mrna疫苗的抗原表位；可以理解，在此基础上，按照本申请的专利技术构思，不排除还能够采用表位预测工具预测获得更多的表位氨基酸序列。
8、本申请的一种实现方式中，来源于非洲猪瘟病毒的7种抗原蛋白的表位按照以下顺序连接成串联表位：
9、seq id no.32～seq id no.7～seq id no.8～seq id no.9～seq id no.6～seqid no.10～seq id no.11～seq id no.12～seq id no.38～seq id no.39～seq idno.40～seq id no.41～seq id no.42～seq id no.43～seq id no.44～seq id no.45～seq id no.46～seq id no.25～seq id no.26～seq id no.27～seq id no.28～seq idno.29～seq id no.30～seq id no.31～seq id no.5～seq id no.6～seq id no.22～seq id no.23～seq id no.24～seq id no.13～seq id no.14～seq id no.15～seq idno.16～seq id no.17～seq id no.33～seq id no.34～seq id no.35～seq id no.36～seq id no.37～seq id no.18～seq id no.19～seq id no.20～seq id no.21；
10、其中，各表位之间采用linker序列连接。
11、需要说明的是，以上顺序连接的串联表位仅仅是本申请的一种具体实现方式中采用的连接顺序，按照以上连接顺序获得的串联表位形成的非洲猪瘟mrna表位疫苗具有免疫效果好、质量稳定等效果。可以理本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种非洲猪瘟mRNA表位疫苗，其特征在于：所述非洲猪瘟mRNA表位疫苗由编码表位蛋白的核糖核酸和mRNA元件组成，所述表位蛋白包括来源于非洲猪瘟病毒的7种抗原蛋白的表位，所述7种抗原蛋白为CD2V、EP153R、P30、P49、P54、P72和PP220。
2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟mRNA表位疫苗，其特征在于：来源于抗原蛋白CD2V的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.5至10所示序列，来源于抗原蛋白EP153R的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.11和12所示序列，来源于抗原蛋白P30的表位的氨基酸序列为SEQIDNo.13至17所示序列，来源于抗原蛋白P49的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.18至21所示序列，来源于抗原蛋白P54的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.22至24所示序列，来源于抗原蛋白P72的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.25至32所示序列，来源于抗原蛋白PP220的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.33至46所示序列；
3.根据权利要求2所述的非洲猪瘟mRNA表位疫苗，其特征在于：所述表位蛋白还包
4.根据权利要求1-3任一项所述的非洲猪瘟mRNA表位疫苗，其特征在于：所述mRNA元件依序包括5’Cap、5’UTR、Kozak序列、3’UTR和Poly A尾；所述编码表位蛋白的核糖核酸位于Kozak序列和3’UTR之间；
5.一种编码权利要求1-4任一项所述的非洲猪瘟mRNA表位疫苗的DNA片段。
6.一种含有权利要求1-4任一项所述的非洲猪瘟mRNA表位疫苗或权利要求5所述的DNA片段的重组质粒。
7.一种含有权利要求1-4任一项所述的非洲猪瘟mRNA表位疫苗、权利要求5所述的DNA片段或权利要求6所述的重组质粒的重组细胞。
8.一种非洲猪瘟表位融合蛋白，其特征在于：所述非洲猪瘟表位融合蛋白包括来源于非洲猪瘟病毒的7种抗原蛋白的表位，所述7种抗原蛋白为CD2V、EP153R、P30、P49、P54、P72和PP220。
9.根据权利要求8所述的非洲猪瘟表位融合蛋白，其特征在于：来源于抗原蛋白CD2V的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.5至10所示序列，来源于抗原蛋白EP153R的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.11和12所示序列，来源于抗原蛋白P30的表位的氨基酸序列为SEQIDNo.13至17所示序列，来源于抗原蛋白P49的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.18至21所示序列，来源于抗原蛋白P54的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.22至24所示序列，来源于抗原蛋白P72的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.25至32所示序列，来源于抗原蛋白PP220的表位的氨基酸序列为SEQ ID No.33至46所示序列；
10.一种含有权利要求1-4任一项所述的非洲猪瘟mRNA表位疫苗、权利要求5所述的DNA片段、权利要求6所述的重组质粒、权利要求7所述的重组细胞或权利要求8或9所述的非洲猪瘟表位融合蛋白的非洲猪瘟疫苗。
...【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟mrna表位疫苗，其特征在于：所述非洲猪瘟mrna表位疫苗由编码表位蛋白的核糖核酸和mrna元件组成，所述表位蛋白包括来源于非洲猪瘟病毒的7种抗原蛋白的表位，所述7种抗原蛋白为cd2v、ep153r、p30、p49、p54、p72和pp220。
2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟mrna表位疫苗，其特征在于：来源于抗原蛋白cd2v的表位的氨基酸序列为seq id no.5至10所示序列，来源于抗原蛋白ep153r的表位的氨基酸序列为seq id no.11和12所示序列，来源于抗原蛋白p30的表位的氨基酸序列为seqidno.13至17所示序列，来源于抗原蛋白p49的表位的氨基酸序列为seq id no.18至21所示序列，来源于抗原蛋白p54的表位的氨基酸序列为seq id no.22至24所示序列，来源于抗原蛋白p72的表位的氨基酸序列为seq id no.25至32所示序列，来源于抗原蛋白pp220的表位的氨基酸序列为seq id no.33至46所示序列；
3.根据权利要求2所述的非洲猪瘟mrna表位疫苗，其特征在于：所述表位蛋白还包括分子佐剂，分子佐剂与串联表位之间采用linker序列连接；
4.根据权利要求1-3任一项所述的非洲猪瘟mrna表位疫苗，其特征在于：所述mrna元件依序包括5’cap、5’utr、kozak序列、3’utr和poly a尾；所述编码表位蛋白的核糖核酸位于kozak序列和3’utr之间；
5.一种编码权利要求1-4任一项所述的非洲猪瘟...
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