【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及农业种植，具体涉及一种暗褐网柄牛肝菌yafmf008及其分离方法和菌根苗侵染方法。
技术介绍
1、思茅松（pinus kesiya var. langbianensis）属于松科（pineaceae）松属（pinus）植物，是卡西亚松（pinus kesiya）的地理变种，天然分布于我国云南南亚热带及准热带的湿润及半湿润地区。具有优良的材质特性，速生、纤维长、高产松脂等特点，是云南热区的优良乡土树种之一，在区域林业中发挥着重要作用，具有重要的经济价值、森林生态服务功能和碳汇效益。然而，思茅松的繁育方式存在一些问题，如幼苗存活率低、移栽适应性差、生长缓慢等。当前，人工林中存在生产率低、林地地力衰退等问题，限制了其产业的进一步发展。
2、思茅松是典型的外生菌根共生树种，对外生菌根真菌（ectomycorrhizal fungi，ecf）具有较高的依赖性，这些真菌可能在其营养代谢中发挥重要作用。ecf对于维持生态系统稳定性与多样性、促进植物根际养分循环、恢复生态植被、改良土壤等具有重要生态作用。在林业生产中，菌根技术已广泛应用于引种、育苗、造林和防治苗木根部病害等方面，取得了良好的效果。
3、暗褐网柄牛肝菌（phlebopus portentosus）是一种隶属于牛肝菌目、小牛肝菌科（boletinellaceae）的真菌。其子实体个体肥大，味道鲜美，富含丰富的营养价值。暗褐网柄牛肝菌在栽培过程中主要通过降解谷粒获得营养物质。这种真菌具备较完整的淀粉水解酶体系，能够有效地利用谷粒中的米粒成分获取营
技术实现思路
1、针对现有技术不足，本专利技术提供一种暗褐网柄牛肝菌yafmf008及其分离方法和菌根苗侵染方法，能够提高思茅松幼苗成活率、同时提高菌根食用菌的产量，给农业生产提供产业化基础。
2、为实现以上目的，本专利技术的技术方案通过以下技术方案予以实现：
3、一种暗褐网柄牛肝菌yafmf008，所述暗褐网柄牛肝菌yafmf008保藏名称为暗褐网柄牛肝菌yafmf008（phlebopus portentosus yafmf008），保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是武汉大学；保藏编号：cctcc m 20232694，保藏日期：2023年12月27日。
4、优选的，所述的暗褐网柄牛肝菌的its基因序列包括seq id no.1所示的核苷酸序列。
5、暗褐网柄牛肝菌yafmf008的分离方法，包括以下步骤：
6、（1）采集暗褐网柄牛肝菌的子实体样品制备组织破碎液；
7、（2）将上述组织破碎液稀释后涂布于pdmykas平板上培养15d；
8、（3）将上述平板上培养15d后得到的菌落进行鉴定，获得暗褐网柄牛肝菌，再将暗褐网柄牛肝菌的菌丝转接至pdmy固体培养基上继续培养20d，对菌株进行分子鉴定，得到暗褐网柄牛肝菌yafmf008。
9、优选的，所述pdmykas平板的配方为：新鲜土豆汁500ml/l、酵母提取物1g/l、麦芽浸粉 2.1g/l、葡萄糖 5g/l、卡拉霉素100μg/ml、氨苄青霉素100μg/ml、链霉素100μg/ml、琼脂10g/l。
10、优选的，所述pdmy固体培养基的配方为：新鲜土豆汁500ml/l、酵母提取物1g/l、麦芽浸粉2.1g/l、葡萄糖5g/l、琼脂16g/l。
11、暗褐网柄牛肝菌yafmf008菌根苗侵染方法，所述暗褐网柄牛肝菌对思茅松进行菌根苗侵染，且具体方法包括以下步骤：
12、（1）菌种制备：将分离纯化的暗褐网柄牛肝菌yafmf008培养制备液体暗褐网柄牛肝菌菌丝体；
13、（2）思茅松种子无菌萌发：将思茅松种子无菌处理后置于灭菌后铺有滤纸的培养瓶中进行萌发；
14、（3）菌根苗培育：待上述培养瓶中种子萌发长出幼根后，于无菌条件下用镊子挑取种子置于含有培养基的组培瓶中，同时在萌发种子根部周围接入1ml液体菌种；封口后，置于光照培养室培养获得菌根苗；
15、（4）幼苗移栽：将经过高压灭菌的育苗基质装入备用的育苗盘，将上述菌根苗移栽进育苗盘中。
16、优选的，所述步骤（2）中思茅松种子萌发前，须在-28℃条件下储存5-7d。
17、优选的，所述步骤（2）中定期于无菌条件下向培养瓶中加入无菌水，保持湿润且种子周围不出现水膜，以胚根突破种皮5mm为种子的萌发标准，记录种子的萌发情况。
18、优选的，所述步骤（3）中每个组培瓶内装有的培养基组成为：大米10.5g，生土9g，草炭1.5g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁0.3g，硫酸钙0.3g，葡萄糖0.6g，自来水55ml。
19、优选的，所述步骤（4）中育苗基质为蛭石、腐植土、珍珠岩和有机肥的混合物。
20、本专利技术提供一种暗褐网柄牛肝菌yafmf008及其分离方法和菌根苗侵染方法，与现有技术相比优点在于：
21、本专利技术提供一种暗褐网柄牛肝菌yafmf008菌株，并且提供思茅松暗褐网柄牛肝菌侵染方法，充分综合了无菌条件下的菌种制备和菌根苗培育技术，结合成功的接种和无菌基质的移栽操作，显著提高了暗褐网柄牛肝菌的单一侵染率；能够促进思茅松幼苗与暗褐网柄牛肝菌之间的有效菌根合成，为下一步暗褐网柄牛肝菌子实体的形成奠定了坚实的基础；通过思茅松幼苗与暗褐网柄牛肝菌形成菌根后，显著提高了思茅松幼苗的生长指标，这为培育出优良的思茅松苗木创造了有利的条件；这一综合的侵染方法为思茅松和暗褐网柄牛肝菌共生系统的建立提供了创新和可行的途径，为推动相关产业的发展和提高经济效益提供了有力的技术支持。
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1.一种暗褐网柄牛肝菌YAFMF008，其特征在于，所述暗褐网柄牛肝菌YAFMF008保藏名称为Phlebopus portentosus YAFMF008，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是武汉大学；保藏编号：CCTCC M 20232694。
2.根据权利要求1所述的一种暗褐网柄牛肝菌YAFMF008，其特征在于：所述的暗褐网柄牛肝菌的ITS基因序列包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
3.暗褐网柄牛肝菌YAFMF008的分离方法，其特征在于：所述分离方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的暗褐网柄牛肝菌YAFMF008的分离方法，且特征在于，所述PDMYKAS平板的配方为：新鲜土豆汁500ml/L、酵母提取物1g/L、麦芽浸粉 2.1g/L、葡萄糖5g/L、卡拉霉素100μg/ml、氨苄青霉素100μg/ml、链霉素100μg/ml、琼脂10g/L。
5.根据权利要求3所述的暗褐网柄牛肝菌YAFMF008的分离方法，且特征在于，所述PDMY固体培养基的配方为：新鲜土豆汁500ml/L、酵母提取物1g/L、麦芽
6.暗褐网柄牛肝菌YAFMF008菌根苗侵染方法，其特征在于，所述暗褐网柄牛肝菌对思茅松进行菌根苗侵染，且具体方法包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的暗褐网柄牛肝菌YAFMF008菌根苗侵染方法，其特征在于：所述步骤（2）中思茅松种子萌发前，须在-28℃条件下储存5-7d。
8.根据权利要求6所述的暗褐网柄牛肝菌YAFMF008菌根苗侵染方法，其特征在于：所述步骤（2）中定期于无菌条件下向培养瓶中加入无菌水，保持湿润且种子周围不出现水膜，以胚根突破种皮5mm为种子的萌发标准，记录种子的萌发情况。
9.根据权利要求6所述的暗褐网柄牛肝菌YAFMF008菌根苗侵染方法，其特征在于，所述步骤（3）中每个组培瓶内装有的培养基组成为：大米10.5g，生土9g，草炭1.5g，磷酸二氢钾0.3g，硫酸镁0.3g，硫酸钙0.3g，葡萄糖0.6g，自来水55mL。
10.根据权利要求6所述的暗褐网柄牛肝菌YAFMF008菌根苗侵染方法，其特征在于，所述步骤（4）中育苗基质为蛭石、腐植土、珍珠岩和有机肥的混合物。
...【技术特征摘要】
1.一种暗褐网柄牛肝菌yafmf008，其特征在于，所述暗褐网柄牛肝菌yafmf008保藏名称为phlebopus portentosus yafmf008，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是武汉大学；保藏编号：cctcc m 20232694。
2.根据权利要求1所述的一种暗褐网柄牛肝菌yafmf008，其特征在于：所述的暗褐网柄牛肝菌的its基因序列包括seq id no.1所示的核苷酸序列。
3.暗褐网柄牛肝菌yafmf008的分离方法，其特征在于：所述分离方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的暗褐网柄牛肝菌yafmf008的分离方法，且特征在于，所述pdmykas平板的配方为：新鲜土豆汁500ml/l、酵母提取物1g/l、麦芽浸粉 2.1g/l、葡萄糖5g/l、卡拉霉素100μg/ml、氨苄青霉素100μg/ml、链霉素100μg/ml、琼脂10g/l。
5.根据权利要求3所述的暗褐网柄牛肝菌yafmf008的分离方法，且特征在于，所述pdmy固体培养基的配方为：新鲜土豆汁500ml/l、酵母提取物1g/l、麦芽浸粉2.1g/...
【专利技术属性】
技术研发人员：王毅，李江，张亚东，
申请(专利权)人：云南省林业和草原科学院，
类型：发明
国别省市：
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