【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及一种用于装载药物的囊泡及其制备方法和应用。
技术介绍
1、肿瘤作为一类威胁人类健康的重大疾病，受到人们的广泛关注。经典疗法，如手术切除、放疗和化疗，仍然是最常见的癌症治疗方案。然而，并不是所有的癌症都对经典疗法有反应，这促使进一步研究发现新的治疗策略。随着对免疫学了解逐步深入，越来越多的免疫疗法被研究并且应用于肿瘤的治疗。cgas-sting信号通路已成为感染、细胞应激和组织损伤环境中炎症的关键介导者，可激活干扰素通路激活，随后诱导对各种含dna病原体的保护性免疫防御，并提供抗肿瘤免疫。临床前研究表明，肿瘤内注射基于环二核苷酸(cdn)的sting激动剂可显著抑制肿瘤生长。然而，全身应用sting激动剂，由于其血清不稳定和低细胞穿透效率，同时难以在胞质释放，达不到良好的治疗效果。因此，迫切需要开发创新的药物递送策略来增强sting激动剂的药理活性和增强癌症免疫治疗。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供一种用于装载药物的囊泡，该囊泡结构均一，通过病毒和肿瘤细胞共同孵育得到，结合了病毒蛋白和肿瘤细胞的特性，同时兼具病毒来源的病毒蛋白和免疫原性细胞死亡产生的钙网蛋白，可靶向且高效到达肿瘤和淋巴结，有效提高树突状细胞的摄取和活化，能够促进抗原和药物在胞质中的释放，从而提高疾病的治疗效果。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供一种用于装载药物的囊泡，该囊泡包括钙网蛋白和vsvg蛋白。
3、现有技术中有人利用聚合物材料制备递送系
4、本专利技术还提供了所述囊泡的制备方法，包括以下步骤：将肿瘤细胞与病毒共同孵育至肿瘤细胞病变，收集上清液，离心，收集上清液，离心，收集上清液，离心，收集沉淀，即得。
5、采用上述方法制备得到的囊泡，利用wb方法分析验证，囊泡上的蛋白分别具有病毒蛋白和免疫原性死亡蛋白；第一次和第二次的离心可以去除多余的死细胞和一些细胞碎片，第三次离心收集离心下来的囊泡。
6、在其中一个实施例中，所述制备方法包括以下步骤：将肿瘤细胞与病毒共同孵育至肿瘤细胞病变，收集上清液，以900-1100g离心8-12min，收集上清液，以14300-14700g离心0.8-1.2min，收集上清液，以14300-14700g离心0.8-1.2h，收集沉淀，即得。
7、在其中一个实施例中，所述肿瘤细胞病变的判断规则包括：所述肿瘤细胞呈圆形，至少半数呈漂浮状；
8、所述肿瘤细胞病变的moi值为0.08-0.12；所述孵育的时间为45-55h；所述病毒为水疱性口炎病毒。
9、在其中一个实施例中，所述肿瘤细胞病变的moi值为0.1。
10、moi(multiplicity of infection)为感染复数或感染指数，是指成功感染时的慢病毒和细胞数量比值。
11、在其中一个实施例中，所述肿瘤细胞为乳腺癌细胞。
12、在其中一个实施例中，所述囊泡的制备方法还包括收集沉淀后的挤出，所述挤出包括以下步骤：将所述沉淀重悬，得到囊泡溶液，将所述囊泡溶液通过多孔膜挤出，得到挤出囊泡。
13、在其中一个实施例中，所述挤出囊泡的粒径为100nm-150nm。
14、在其中一个实施例中，所述多孔膜为聚碳酸酯多孔膜。
15、在其中一个实施例中，所述多孔膜的孔径为100-400nm。
16、在其中一个实施例中，所述挤出的次数≥21次。
17、在其中一个实施例中，所述挤出包括以下步骤：将所述囊泡溶液采用孔径为400nm、200nm、100nm的多孔膜依次挤出，离心；各孔径多孔膜的挤出次数分别≥21次。
18、在其中一个实施例中，所述挤出通过脂质体挤出器实现。
19、在其中一个实施例中，所述挤出在缓冲液中进行。
20、在其中一个实施例中，所述缓冲液为pbs缓冲液。
21、在其中一个实施例中，所述挤出中的离心的条件为：99900-100100g，1.8-2.2h。
22、本专利技术还提供了一种用于治疗癌症的药物，包括药物活性成分和用于递送药物的载体，所述载体包括所述囊泡；所述药物活性成分装载于所述囊泡。
23、在其中一个实施例中，所述药物活性成分为sting激动剂。
24、采用sting激动剂可有效增强t细胞的肿瘤浸润和杀伤活性。
25、本专利技术还提供所述药物的制备方法，包括以下步骤：将药物活性成分与所述囊泡混合，采用电穿孔法将所述药物活性成分装载于所述囊泡，得到所述药物。
26、上述制备方法简单高效，且操作容易，需要利用的囊泡来源简单，获取成本低，提取时间较短。
27、在其中一个实施例中，所述药物活性成分与所述囊泡的质量比为(1-5)：1；所述电穿孔法的电压为50-150v，电阻为180-220ω，电容为80-120μf，电转时间为13-18s。
28、在其中一个实施例中，所述混合的温度为负5℃-5℃，所述电穿孔法的温度为负5℃-5℃。
29、在其中一个实施例中，所述药物的制备方法还包括装载步骤后的静置、离心。
30、在其中一个实施例中，所述装载步骤后的静置为冰上静置25-35min，所述离心的离心力为14000-15000g，离心时间为0.8-1.2h。
31、本专利技术还提供了所述囊泡在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
32、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
33、本专利技术的一种用于装载药物的囊泡及其制备方法和应用，该囊泡结构均一，通过病毒和肿瘤细胞共同孵育得到，结合了病毒蛋白和肿瘤细胞的特性，同时兼具病毒来源的病毒蛋白和免疫原性细胞死亡产生的钙网蛋白，可靶向且高效到达肿瘤和淋巴结，有效提高树突状细胞的摄取和活化，能够促进抗原和药物在胞质中的释放，从而提高疾病的治疗效果。
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1.一种用于装载药物的囊泡，其特征在于，该囊泡包括钙网蛋白和VSVG蛋白。
2.权利要求1所述囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将肿瘤细胞与病毒共同孵育至肿瘤细胞病变，收集上清液，离心，收集上清液，离心，收集上清液，离心，收集沉淀，即得。
3.根据权利要求2所述囊泡的制备方法，其特征在于，所述肿瘤细胞病变的判断规则包括：所述肿瘤细胞呈圆形，至少半数呈漂浮状；
4.根据权利要求2所述囊泡的制备方法，其特征在于，所述囊泡的制备方法还包括收集沉淀后的挤出，所述挤出包括以下步骤：将所述沉淀重悬，得到囊泡溶液，将所述囊泡溶液通过多孔膜挤出，得到挤出囊泡。
5.根据权利要求4所述囊泡的制备方法，其特征在于，所述挤出囊泡的粒径为100-150nm。
6.一种用于治疗癌症的药物，其特征在于，包括药物活性成分和用于递送药物的载体，所述载体包括权利要求1所述的囊泡；所述药物活性成分装载于所述囊泡。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物活性成分为STING激动剂。
8.权利要求6-7中任一项所述药
9.根据权利要求8所述药物的制备方法，其特征在于，所述药物活性成分与所述囊泡的质量比为(1-5)：1；所述电穿孔法的电压为50-150V，电阻为180-220Ω，电容为80-120μF，电转时间为13-18s。
10.权利要求1所述囊泡在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于装载药物的囊泡，其特征在于，该囊泡包括钙网蛋白和vsvg蛋白。
2.权利要求1所述囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将肿瘤细胞与病毒共同孵育至肿瘤细胞病变，收集上清液，离心，收集上清液，离心，收集上清液，离心，收集沉淀，即得。
3.根据权利要求2所述囊泡的制备方法，其特征在于，所述肿瘤细胞病变的判断规则包括：所述肿瘤细胞呈圆形，至少半数呈漂浮状；
4.根据权利要求2所述囊泡的制备方法，其特征在于，所述囊泡的制备方法还包括收集沉淀后的挤出，所述挤出包括以下步骤：将所述沉淀重悬，得到囊泡溶液，将所述囊泡溶液通过多孔膜挤出，得到挤出囊泡。
5.根据权利要求4所述囊泡的制备方法，其特征在于，所述挤出囊泡的粒径为100-150nm。
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