【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，是一种ige靶向药物的抗药抗体检测系统及方法。
技术介绍
1、过敏性疾病是一种超敏反应性疾病，常见的有特异性皮炎、过敏性鼻炎和过敏性哮喘。当个体暴露于过敏原时，活化b细胞分化成浆细胞，合成并分泌ige。ige的重链恒定区(fc片段)主要与效应细胞表面的ige受体中的高亲和力受体(fcεri)结合，介导过敏性炎症级联反应，导致个体出现炎症，严重时可能危及生命。由此可见，ige(免疫球蛋白e)在超敏反应中具有关键性作用，是药物治疗的关键点，也是药物开发的首选靶点。
2、以诺华和罗氏合作开发的奥马珠单抗为例，其作为全球首个治疗过敏性哮喘的ige靶向治疗药物，自上市以来累计销售额超过300亿美元，市场表现不俗。它的成功已经证明了ige靶点在过敏性疾病的有效性，反映出ige靶向药物所蕴含的巨大市场潜力，极大的增强了各厂商开发ige靶向药物的信心。当前已有很多厂商的ige靶向药物进入临床试验阶段，如诺华(ligelizumab，临床三期)、张江生物(cmab-007：aomaishu，临床三期)、罗氏(quilizumab，临床二期)、天辰生物(人源化人ige单克隆抗体注射液，临床一期)等，未来将会有越来越多的医药厂商布局ige靶向药物的开发和优化，ige靶向药物的研究已成为过敏性疾病的研究热点。
3、ige靶向药物作为大分子药物，具有免疫原性，可诱发个体的免疫应答，产生抗药抗体(anti-durg antibody,ada)，一方面可能中和药物的生物学活性，导致药效显著降低；另一方面可能与内
4、ige靶向药物靶点ige为分泌型免疫球蛋白，在健康个体中最高含量可达873.4ng/ml，在过敏性患者体内，浓度可显著提升10倍以上，变化显著。在ada检测过程中，一般以ige靶向药物为捕获试剂，而ige靶向药物与ige的特异性结合能力极强，故ige一定会与ada竞争结合捕获试剂，甚至其浓度变化会不同程度的影响检测结果。同时不同个体的ige水平不同，且ige的半衰期短，稳定性差，由此会进一步降低该检测方法的灵敏度、准确性、适用范围和稳定性。
5、针对ada检测过程中干扰去除，研究较多的是游离药物的干扰去除。在中国专利cn109358192a中，公布了一种去除抗药抗体检测样品中游离药物的装置和方法，其特征在于该装置将与药物特异结合的物质与固相载体偶联，且该物质不与除了游离药物以外的其它成分反应。专利技术人通过此药物吸附装置，很好地解决了ada分析中的药物干扰问题，但是根据其应用实例数据计算，该吸附装置在对药物浓度为4.41mg/ml的样品进行吸附测试时，吸附10分钟时的吸附清除率约为32％，在吸附20分钟时的吸附清除率约为33.3％，由此可见其吸附清除率约在30％左右，且不随时间推移而有显著变化。虽然游离药物、捕获试剂和检测试剂三者之间的主要区别在于标记分子或处理方式不同：游离药物为无处理游离状态；捕获试剂可能化学偶联在微珠上，或者物理吸附在孔板上；检测试剂则标记有生物素、荧光素或者钌，但是三者与靶标物质的结合能力无本质差异。当三者浓度差异低于10倍以下时，反应虽仍存在竞争，但检测结果与样品中ada浓度成正比，据此即可获得定性或半定量的检测结果。而ige靶向药物是人工筛选开发出的产品，与ige特异性结合能力强，在竞争反应中，可能是捕获试剂先与ige结合，过量的部分再结合ada，因此ada检测方法对靶点清除率比较敏感，清除率不足或存在细微差异都会显著影响ada的检测结果，因此将该专利技术专利直接转化应用于ada检测的靶点干扰去除，效果无法满足预期。
6、在中国专利cn115856322a中，公布了用于抗奥马株单抗药物抗体检测的试剂及其应用，其特征在于提供用于检测样品中抗奥马株单抗药物抗体的试剂，包括预处理试剂、解离试剂和检测试剂，可有效降低高浓度ige、奥马株单抗药物以及ige-奥马株单抗复合物对抗奥马株单抗药物抗体测定的影响。根据其应用实例的数据，并未测试10μg/ml以上浓度的ige干扰。由于ige对检测方法的干扰程度是随浓度提升而增强的，故无法根据实例数据推测上述方法是否可耐受更高浓度的ige干扰。而在过敏性患者体内，ige浓度通常在5μg/ml～20μg/ml之间，该方法显然无法满足所有样品的检测需求，需要建立至少可抵抗靶点干扰浓度为100μg/ml的检测方法。同时，在ada检测上，仅进行了0.1μg/ml和1μg/ml的抗奥马株单抗抗体检测，根据实例数据中的p/n(阳性样本测定值/阴性样本测定值)值推算，该方法灵敏度远达不到1ng/ml的要求。因而，该方法在实际应用过程中，存在较多不足，使用常规技术手段来改善优化该方法，恐难以达到预期要求。
7、在中国专利cn115667935a中，公布了一种使用抗靶抗体或者靶标受体及其辅因子来耗竭靶标(即靶点)，从而减轻抗药抗体测定中靶标干扰的方法，同时还探究了多个条件下的测试效果，如不同ph、不同抗靶抗体、不同靶标受体及其辅因子浓度等。但根据其实例数据来看，靶标耐受浓度约为5μg/ml，无法满足ige靶向药物的抗药抗体检测的要求。其次根据应用实例显示，抗靶抗体，甚至可能会加剧抗药抗体检测过程中的假阳性，需要进行大量的抗靶抗体筛选。与此同时受体及其辅因子耗竭靶点的方法，并非适用于每个靶点，且重组表达出与人源化一致的受体及其辅因子，仍是一大难题。由此可见，该方法的局限性较大，恐难以广泛推广，进行规模化应用。
8、同时由于ige与ada同为免疫球蛋白，二者在结构上、理化性质上有较多的相似之处，常规的物理化学等处理方式，如酸化、加热、peg沉淀等处理方式，可能会导致ada与ige同步被去除。
9、因此，鉴于ige靶向药物靶点干扰的特殊情况，以及上述专利或方法存在的缺点，开发一种ige靶向药物的抗药抗体检测方法，以克服现有技术中靶点干扰严重的问题，提升ige靶向药物的抗药抗体检测方法的灵敏度、准确性和稳定性，是非常必要的。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种ige靶向药物的抗药抗体检测系统及方法，解决现有技术中靶点干扰严重，检测方法灵敏度低、准确性低、稳定性弱的技术问题，实现对ige靶向药物的抗药抗体准确高效的检测。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种ige靶向药物的抗药抗体检测系统，主要分为两个部分：第一部分是样品处理系统，第二部分是检测系统。
3、所述样品处理系统，主要用于消除ada检测过程中药物干扰、靶点干扰以及可能存在的干扰，如类风湿因子干扰、基质效应干扰等，其中ige靶点干扰对ada检测结果具有非常关键的影响，消除ige靶点干扰是本专利技术的重点。
4、所述样品处理系统，包括复合微珠试剂和本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种IgE靶向药物的抗药抗体检测系统，包括样品处理系统和检测系统，其特征在于，所述样品处理系统包括偶联有抗人IgE抗体的微珠和解离中和试剂；所述检测系统，包括包被有奥马珠单抗的酶标板、生物素标记的奥马珠单抗、钌标记的奥马珠单抗、包被有链霉亲和素的MSD板。
2.根据权利要求1所述的一种IgE靶向药物的抗药抗体检测系统，其特征在于，所述微珠为复合微珠，包括磁性微珠和聚苯乙烯微球。
3.根据权利要求1所述的一种IgE靶向药物的抗药抗体检测系统，其特征在于，所述微珠为复合微珠，包括抗人IgE抗体的3μm磁性微珠、抗人IgE抗体的30μm磁性微珠和抗人IgE抗体的1μm聚苯乙烯微球。
4.根据权利要求1所述的一种IgE靶向药物的抗药抗体检测系统，其特征在于，所述微珠在使用前与液体进行分离。
5.根据权利要求1所述的一种IgE靶向药物的抗药抗体检测系统，其特征在于，所述解离中和试剂为醋酸和Tris溶液。
6.一种IgE靶向药物的抗药抗体检测方法，其特征在于，在检测前，消除样品中IgE。
7.根据权利要求6所述的一种
8.根据权利要求7所述的一种IgE靶向药物的抗药抗体检测方法，其特征在于，使用复合微珠消除样品中IgE，复合微珠包括抗人IgE抗体的3μm磁性微珠、抗人IgE抗体的30μm磁性微珠和抗人IgE抗体的1μm聚苯乙烯微球。
9.根据权利要求7所述的一种IgE靶向药物的抗药抗体检测方法，其特征在于，包括前处理过程和后处理过程，所述前处理过程，是使用复合微珠试剂中的磁性微珠抓取分离IgE，又可称为磁珠抓取过程；所述后处理过程分为两个部分，一部分是使用300mM醋酸(pH2.00±0.05)将抗药抗体与药物解离，另一部分是使用复合微珠试剂中的聚苯乙烯微球来结合耗竭样品中剩余的IgE。
10.根据权利要求9所述的一种IgE靶向药物的抗药抗体检测方法，其特征在于，检测灵敏度可达0.69ng/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种ige靶向药物的抗药抗体检测系统，包括样品处理系统和检测系统，其特征在于，所述样品处理系统包括偶联有抗人ige抗体的微珠和解离中和试剂；所述检测系统，包括包被有奥马珠单抗的酶标板、生物素标记的奥马珠单抗、钌标记的奥马珠单抗、包被有链霉亲和素的msd板。
2.根据权利要求1所述的一种ige靶向药物的抗药抗体检测系统，其特征在于，所述微珠为复合微珠，包括磁性微珠和聚苯乙烯微球。
3.根据权利要求1所述的一种ige靶向药物的抗药抗体检测系统，其特征在于，所述微珠为复合微珠，包括抗人ige抗体的3μm磁性微珠、抗人ige抗体的30μm磁性微珠和抗人ige抗体的1μm聚苯乙烯微球。
4.根据权利要求1所述的一种ige靶向药物的抗药抗体检测系统，其特征在于，所述微珠在使用前与液体进行分离。
5.根据权利要求1所述的一种ige靶向药物的抗药抗体检测系统，其特征在于，所述解离中和试剂为醋酸和tris溶液。
6.一种ige靶向药物的抗药抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄启宽，祝水琴，吴齐全，
申请(专利权)人：宁波熙宁检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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