【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医用生物材料，具体涉及一种提取i型胶原蛋白的方法。
技术介绍
1、胶原蛋白是一种重要的生物材料，是哺乳动物体内含量最丰富的蛋白质，占体内蛋白质总量的25％～30％，在医疗、美容等领域具有广泛的应用前景。胶原蛋白广泛存在于动物的骨、角膜、皮肤、肌腱等组织中，文献(jafari et al.,polymers,2020；12(10):2230.)报道了胶原蛋白在动物不同身体部位中的含量，其中蹄筋和软骨中的胶原蛋白含量最高。
2、i型胶原蛋白分子量约300kd，其分子长度约为300nm，直径约1.5nm，呈棒状。i型胶原蛋白具有可降解性、生物相容性和止血性等许多优良的生物学特性，因此被作为天然生物材料广泛应用于生物医学和组织工程学领域。
3、然而，从生物组织中提取高质量的胶原蛋白仍然是一个挑战。提取方法主要包括酸碱处理、热处理、酶解等，酸碱处理法虽然可以得到一定纯度的胶原蛋白，但处理过程中会产生大量的废酸碱，对环境造成污染；热处理法则会破坏胶原蛋白的分子结构，影响其生物活性。酶解法相对来说可以得到较高纯度的胶原蛋白，但仍有进一步提升的空间。
4、目前市场上出售的i型胶原蛋白主要从动物皮和跟腱组织中提取制备而成，由于现有的提取方法制备出的i型胶原蛋白受工艺条件的影响，提取产率较低，而且提取的胶原蛋白中含有的杂蛋白较多，严重影响胶原蛋白的质量，而在生物医学和化妆品行业等领域的广泛应用i型胶原蛋白的需求量与日俱增，因此，因此设计一种i型胶原蛋白提取方法以提高胶原蛋白的提取产率来满足i型胶原蛋
技术实现思路
1、本专利技术以动物跟腱组织为原料，加入添加剂，采用酸性酶法技术提取i型胶原蛋白。该方法不仅可以提高i型胶原蛋白的提取产率，而且提取的i型胶原蛋白的杂蛋白含量较低。
2、本专利技术采用的具体技术方案如下：
3、一种提取i型胶原蛋白的方法，主要包括以下步骤：
4、步骤一：清洗、切片、消毒脱脂；
5、步骤二：脱杂蛋白；
6、步骤三：酸处理；
7、步骤四：酶解；
8、步骤五：盐析、透析。
9、在一些具体实施方案中，所述步骤二中加入添加剂。
10、进一步的，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种。
11、在一些具体实施方案中，所述步骤三中加入添加剂。
12、进一步的，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种。
13、一种提取i型胶原蛋白的方法，主要包括以下步骤：
14、步骤一：清洗牛跟腱，剔除筋膜、碎骨、廋肉和脂肪，将牛跟腱冷冻硬化，切成片；置于消毒脱脂溶液中浸泡，滤去溶液，取出后清洗若干次；
15、步骤二：将跟腱片用碱性溶液浸泡进行脱杂蛋白，滤去溶液，取出后清洗至中性；
16、步骤三：绞碎跟腱片，置于酸性溶液中，再加入添加剂，匀浆破碎；
17、步骤四：加入活性酶，搅拌并消化，离心，取上清液；
18、步骤五：盐析，离心后洗涤沉淀；透析。
19、在一些具体实施方案中，所述步骤二的碱性溶液中包括添加剂，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种；所述步骤三中的添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种。
20、一种提取i型胶原蛋白的方法，主要包括以下步骤：
21、步骤一：取牛跟腱，清洗干净，剔除筋膜、碎骨、廋肉和脂肪，将牛跟腱冷冻硬化，切成0.5～3mm厚度的跟腱片；称取1个单位质量的跟腱片，置于消毒脱脂溶液中浸泡，滤去溶液，取出后清洗若干次；所述消毒脱脂溶液为75％乙醇和正己烷的混合溶液，75％乙醇与正己烷的体积比为1:1～5:1。
22、步骤二：将跟腱片用碱性溶液浸泡进行脱杂蛋白，搅拌，定期更换碱性溶液，滤去溶液，取出跟腱片后清洗至中性；所述碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾和碳酸氢钠中一种或多种，浓度为0.01～1.0mol/l；所述碱性溶液还包括添加剂，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种，所述添加剂的浓度为0.001～0.01mol/l。
23、步骤三：绞碎跟腱片，置于5～15个单位体积的酸性溶液中，再加入添加剂，匀浆破碎；所述酸性溶液为乙酸溶液，以质量分数计的浓度为0.01％～2.0％；所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种，所述添加剂的浓度为0.001～0.01mol/l；
24、步骤四：加入活性酶，搅拌并消化，离心，取上清液；所述活性酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、无花果蛋白酶中的一种或多种，浓度为20～1000mg/l；
25、步骤五：0.1～5mol/l氯化钠盐析，离心后洗涤沉淀；0.001～0.1mol/l乙酸透析；
26、所述单位质量与所述单位体积之比等于1克质量与1毫升之比。
27、在一些具体实施方案中，所述步骤一中的消毒脱脂时间为6～24小时；所述步骤二中的脱杂蛋白时间为12～24小时；所述步骤四中的消化时间为12～72小时；所述步骤五中的盐析时间为1～24小时，所述步骤五中的透析时间为1～24小时。
28、在一些具体实施方案中，一种提取i型胶原蛋白的方法还包括干燥所述步骤五中的产物，真空封装。
29、与现有技术相比，本专利技术能够提高i型胶原蛋白的提取产率，而且提取的i型胶原蛋白的杂蛋白含量较低。
30、以下将对本专利技术的构思、产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的、特征和效果。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种提取I型胶原蛋白的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤二中加入添加剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤三中加入添加剂。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤二的碱性溶液中包括添加剂，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种；所述步骤三中的添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
9.根据权利要求1、6、8任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤一中的消毒脱脂时间为6～24小时；所述步骤二中的脱杂蛋白时间为12～24小时；所述步骤四中的消化时间为12～72小时；所述步骤
10.根据权利要求1、6、8任一项所述的方法，其特征在于，还包括干燥所述步骤五中的产物，真空封装。
...【技术特征摘要】
1.一种提取i型胶原蛋白的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤二中加入添加剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤三中加入添加剂。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述添加剂选自椰油酰甘氨酸钠、卵磷脂中的一种或两种。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤二的碱性溶液...
【专利技术属性】
技术研发人员：柯林松，蔡迪，唐小雄，
申请(专利权)人：武汉医佳宝生物材料有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。