【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、需要用于生产和加工环状多核糖核苷酸的方法。
技术实现思路
1、本专利技术总体上涉及用于制备和加工环状多核糖核苷酸的装置、系统、以及方法。
2、在一方面，本专利技术的特征在于一种加工环状多核糖核苷酸的方法。该方法包括以下步骤：(a)提供一种装置，该装置包括储器，该储器具有(i)设置在(ii)滤液腔室与(iii)废物收集腔室之间的过滤器，该储器进一步包括具有压力进入端口的可拆卸盖帽；其中，该装置通过压力进入端口与正压源流体连通；(b)向该滤液腔室中的第一流体中提供环状多核糖核苷酸；(c)用正压源对储器进行加压，使得第一流体穿过过滤器而环状多核糖核苷酸不穿过过滤器；(d)将第二流体施用至储器；以及(e)用正压源对储器进行加压，使得第二缓冲液穿过过滤器而环状多核糖核苷酸不穿过过滤器。
3、在一些实施例中，该方法进一步包括重复步骤(d)和步骤(e)1至5次的步骤。在一些实施例中，该方法进一步包括在步骤(e)之后从过滤器抽吸环状多核苷酸的步骤(f)。在一些实施例中，从过滤器抽吸1mg至1000mg环状多核糖核苷酸。在一些实施例中，从过滤器抽吸50mg至150mg环状多核糖核苷酸。在一些实施例中，从过滤器抽吸约100mg环状多核糖核苷酸。
4、在一些实施例中，第二流体通过流体进入端口被施用到盖帽中。在一些实施例中，流体进入端口与流体源流体连通。在一些实施例中，第一和/或第二流体是液体。在一些实施例中，液体是溶液。在一些实施例中，溶液是缓冲液。在
5、在一些实施例中，加压步骤(c)和步骤(d)包括将该储器加压至10psi至100psi之间。在一些实施例中，应用步骤(d)包括将5ml至15ml流体施用至该储器。
6、在另一方面，本专利技术的特征在于一种装置，该装置包括：储器，该储器具有由过滤器隔开的滤液腔室和废物收集腔室；以及与压力进入端口接触的可拆卸盖帽；其中，该装置与正压源流体连通。
7、在一些实施例中，储器是管。在一些实施例中，管是离心管。在一些实施例中，滤液腔室是漏斗状的。在一些实施例中，盖帽进一步包括流体进入端口。在一些实施例中，储器的容积为5ml至100ml。在一些实施例中，滤液腔室的容积为5ml至15ml。在一些实施例中，过滤器为2kda至200kda。在一些实施例中，滤液腔室和过滤器堆叠在储器上、拧入储器中、或嵌套在储器中。在一些实施例中，压力进入端口是密封的。
8、在一些实施例中，装置进一步包括传感器(例如，液体检测传感器)。在一些实施例中，液体检测传感器选自由以下组成的列表：光学传感器、振动传感器、超声传感器、浮子传感器、电容传感器、雷达传感器、电导率传感器、或电阻传感器。在一些实施例中，传感器是光学传感器。
9、在另一方面，本专利技术的特征在于一种系统，该系统包括(i)过滤托盘、(ii)具有压力进入端口的盖、(iii)废物储器，该过滤托盘具有样本储器，该样本储器包括具有过滤器的滤液腔室，该过滤托盘设置在该盖与废物储器之间；其中，压力进入端口与(iv)正压源流体连通。
10、在一些实施例中，滤液腔室是漏斗状的。在一些实施例中，滤液腔室的容积为5ml至15ml。在一些实施例中，废物储器包括重力或真空排放口。在一些实施例中，系统进一步包括液体检测传感器。在一些实施例中，系统进一步包括通气口。在一些实施例中，过滤托盘、盖、以及废物储器密封地连接在一起。在一些实施例中，滤液腔室堆叠在样本储器上、拧入样本储器中、或嵌套在样本储器中。在一些实施例中，盖进一步包括流体进入端口。在一些实施例中，过滤托盘包括多个样本储器。
11、定义
12、本专利技术将针对特定实施例并参考某些附图进行描述，但是本专利技术不限于此，而是仅由权利要求来限定。除非另有说明，否则通常应以其常见意义来理解下文中所阐述的术语。
13、如本文使用的，术语“环状多核糖核苷酸”或“circrna”或“环状rna”可互换使用，并且意指具有无游离端(即，没有游离3'和/或5'端)的结构的多核糖核苷酸分子，例如通过共价键或非共价键形成环状或无端结构的多核糖核苷酸分子。在一些实施例中，环状多核糖核苷酸是通过共价键形成环状或无端结构的“共价闭合的多核糖核苷酸”。
14、如本文使用的，术语“环状多核糖核苷酸样本”、“circrna样本”、以及“环状rna样本”可互换使用并且意指包含circrna分子和溶液的组合物。
15、如本文使用的，术语“表达序列”是指对产物(例如肽或多肽或调控核酸)进行编码的核酸序列。
16、“多肽”和“蛋白”可互换使用并且是指通过共价键(例如酰胺键)连接的两个或更多个氨基酸的聚合物。如本文所述的多肽可以包括全长蛋白(例如，完全加工的蛋白)以及较短的氨基酸序列(例如，天然存在的蛋白的片段或合成的多肽片段)。多肽可以包括天然存在的氨基酸(例如，天然合成的肽中常见并且已知以一个字母缩写(a、r、n、c、d、q、e、g、h、i、l、k、m、f、p、s、t、w、y和v)的二十种氨基酸之一)和非天然存在的氨基酸(例如，不是天然合成的肽中常见的二十种氨基酸之一的氨基酸，包括合成的氨基酸、氨基酸类似物和氨基酸模拟物)。
17、如本文使用的，术语“适配体序列”或“适配体”是指特异性结合至靶分子的非天然存在、或合成的寡核苷酸。典型地，适配体是20至250个核苷酸。典型地，适配体通过二级结构而非序列同源性结合至其靶。
18、如本文所用，术语“结合位点”是指环状多核糖核苷酸的与另一实体(例如化合物、蛋白、核酸等)相互作用的区域。结合位点可以包含适配体序列。
19、如本文使用的，“缓冲液”是在添加酸性或碱性成分后可抵抗ph值变化的溶液。“缓冲液”的示例包括用于配制组合物的“配制缓冲液”、用于储存组合物的“储存缓冲液”、以及用于纯化的“纯化缓冲液”等。
20、如本文使用的术语“缓冲液交换”是指从第一缓冲液移除分子或颗粒(比如多核糖核苷酸)以掺入第二缓冲液中的过程。
21、如本文使用的术语“流体连通”是指在至少两个装置元件(例如储器、压力源等)之间的连接，这允许流体在这样的装置元件之间移动，不论穿过还是不穿过一个或多个中间装置元件。
22、如本文使用的“溶液”是两种更多种物质的均匀混合物，包括溶剂和溶质。
23、通过援引并入
24、本说明书中提到的所有公开、专利和专利申请通过援引并入本文，其程度如同明确地和单独地指明将各篇公开、专利或者专利申请通过援引并入本文。
25、例如在美国专利公开号us2020/0306286、以及在pct专利公开号wo 2020/181013和wo 2020/023655中描述了环状多核糖核苷酸，将其通过援引并入本文。
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1.一种加工环状多核糖核苷酸的方法，该方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，该方法进一步包括重复步骤(d)和步骤(e)1至5次的步骤。
3.如权利要求1或2所述的方法，该方法进一步包括在步骤(e)之后从该过滤器抽吸该环状多核苷酸的步骤(f)。
4.如权利要求3所述的方法，其中，从该过滤器抽吸50mg至150mg环状多核糖核苷酸。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，该第二流体通过流体进入端口被施用到该盖帽中。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，该流体进入端口与流体源流体连通。
7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，加压步骤(c)和步骤(d)包括将该储器加压至10-100PSI之间。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，应用步骤(d)包括将5mL至15mL流体施用至该储器。
9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，该第一和/或第二流体是液体。
10.如权利要求9所述的方法，其中，该液体是溶液。
11.如权利要
12.如权利要求11所述的方法，其中，该缓冲液是配制缓冲液、储存缓冲液、或纯化缓冲液。
13.一种装置，该装置包括：储器，该储器包括由过滤器隔开的滤液腔室和废物收集腔室；该储器进一步包括与压力进入端口接触的可拆卸盖帽；其中，该装置与正压源流体连通。
14.如权利要求13所述的装置，其中，该储器是管。
15.如权利要求14所述的装置，其中，该管是离心管。
16.如权利要求13至15中任一项所述的装置，其中，该滤液腔室是漏斗状的。
17.如权利要求13至16中任一项所述的装置，其中，该装置进一步包括传感器。
18.如权利要求17所述的装置，其中，该传感器是液体检测传感器。
19.如权利要求13至18中任一项所述的装置，其中，该盖帽进一步包括流体进入端口。
20.如权利要求13至19中任一项所述的装置，其中，该储器的体积为5至100mL。
21.如权利要求13至20中任一项所述的装置，其中，该滤液腔室的容积为5mL至15mL。
22.如权利要求13至21中任一项所述的装置，其中，该过滤器为2kDa至200kDa。
23.如权利要求13至22中任一项所述的装置，其中，该滤液腔室和该过滤器堆叠在该储器上、拧入该储器中、或嵌套在该储器中。
24.如权利要求13至23中任一项所述的装置，其中，该压力进入端口是密封的。
25.一种系统，该系统包括过滤托盘，该过滤托盘具有样本储器，该样本储器包括具有过滤器的滤液腔室，该过滤托盘设置在具有压力进入端口的盖与废物储器之间；其中，该压力进入端口与正压源流体连通。
26.如权利要求25所述的系统，其中，该滤液腔室是漏斗状的。
27.如权利要求25或26所述的系统，其中，该滤液腔室的容积为5mL至15mL。
28.如权利要求25至27中任一项所述的系统，其中，该废物储器包括重力或真空排放口。
29.如权利要求25至28中任一项所述的系统，其中，该系统进一步包括液体检测传感器。
30.如权利要求25至29中任一项所述的系统，其中，该系统进一步包括通气口。
31.如权利要求25至30中任一项所述的系统，其中，该过滤托盘、该盖、以及该废物储器密封地连接在一起。
32.如权利要求25至31中任一项所述的系统，其中，该滤液腔室堆叠在该样本储器上、拧入该样本储器中、或嵌套在该样本储器中。
33.如权利要求25至32中任一项所述的系统，其中，该盖进一步包括流体进入端口。
34.如权利要求25至33中任一项所述的系统，其中，该过滤托盘包括多个样本储器。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种加工环状多核糖核苷酸的方法，该方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，该方法进一步包括重复步骤(d)和步骤(e)1至5次的步骤。
3.如权利要求1或2所述的方法，该方法进一步包括在步骤(e)之后从该过滤器抽吸该环状多核苷酸的步骤(f)。
4.如权利要求3所述的方法，其中，从该过滤器抽吸50mg至150mg环状多核糖核苷酸。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，该第二流体通过流体进入端口被施用到该盖帽中。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，该流体进入端口与流体源流体连通。
7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，加压步骤(c)和步骤(d)包括将该储器加压至10-100psi之间。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，应用步骤(d)包括将5ml至15ml流体施用至该储器。
9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，该第一和/或第二流体是液体。
10.如权利要求9所述的方法，其中，该液体是溶液。
11.如权利要求10所述的方法，其中，该溶液是缓冲液。
12.如权利要求11所述的方法，其中，该缓冲液是配制缓冲液、储存缓冲液、或纯化缓冲液。
13.一种装置，该装置包括：储器，该储器包括由过滤器隔开的滤液腔室和废物收集腔室；该储器进一步包括与压力进入端口接触的可拆卸盖帽；其中，该装置与正压源流体连通。
14.如权利要求13所述的装置，其中，该储器是管。
15.如权利要求14所述的装置，其中，该管是离心管。
16.如权利要求13至15中任一项所述的装置，其中，该滤液腔室是漏斗状的。
17.如权利要求13至16中任一项所述的装置，其中，该装置进一步包括传感器。
18.如权利要求17所述的装置，其中，该传感器是液体检测传感器。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：图斯哈尔·甘迪·米斯拉，奥尔加·塞尔策，丹尼尔·P·西尼科拉，
申请(专利权)人：旗舰创业创新第六有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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