【技术实现步骤摘要】
本专利技术公开了一种希氏乳杆菌来源的可降解生物胺的多铜氧化酶及其应用，属于分子生物学。
技术介绍
1、生物胺是具有生物活性的低分子量含氮有机碱，主要集中在乳制品、鱼制品、肉制品、发酵蔬菜以及酒精饮料等发酵食品中，含量差异较大且普遍相对较高，主要包括腐胺、酪胺、组胺、尸胺、苯乙胺、色胺、精胺和亚精胺。已有研究描述了因摄入含有生物胺的食物而导致的若干毒理学问题，食用含有过量生物胺的食物会产生毒理学效应。这些问题在负责胺降解的单胺氧化酶和二胺氧化酶活性低的敏感消费者中可能更为严重。此外，酒精摄入会增加生物胺造成的生理不良影响，即生物胺是导致酒精饮料醉酒上头的关键物质之一。因此提高此类发酵食品的品质，控制其已有的主要的生物胺含量就显得愈发必要。
2、研究表明生物胺不能通过加热烹饪去除，只能在发酵过程中控制和减少。目前能够减少食品中已有的生物胺最有发展前景和对发酵食品风味影响最小的方法是微生物酶解法来催化降解。多铜氧化酶(multicopper oxidase,mco)是一类能够将多种物质氧化并将o2还原成h2o的酶。其底物范围广泛，可氧化多种酚和非酚类底物，如多酚、抗坏血酸、芳族胺等。已有研究发现，mco中的一些酶具有与胺氧化酶或胺脱氢酶一样的可以降解生物胺的能力。相对于胺氧化酶和脱氢酶等，多铜氧化酶的优势在于底物谱较为广泛，可同时降解多个生物胺。
3、目前分离获得的具有耐受发酵食品体系高酸，非水相(乙醇)以及高渗透压等胁迫因素的降解生物胺作用的多铜氧化酶研究较少且效果较差，因此，获取可降解发酵食品中的生物胺的多
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于解决现有传统发酵食品中生物胺含量普遍较高的问题，提供一种希氏乳杆菌来源的可降解生物胺的多铜氧化酶，并用多铜氧化酶降解生物胺的方法来降低黄酒、酱油、低盐酱油、醋、料酒、虾酱和鱼露等发酵食品中的生物胺含量，提升传统发酵食品的品质。
2、本专利技术提供了一种多铜氧化酶，为(a)或(b)：
3、(a)由seq id no.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
4、(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有多铜氧化酶活性的由(a)衍生的蛋白质。
5、本专利技术还提供编码所述多铜氧化酶的基因。
6、在本专利技术的一种实施方式中，所述基因含有seq id no.1所示的核苷酸序列。
7、本专利技术还提供了携带上述基因的重组质粒。
8、在本专利技术的一种实施方式中，所述重组质粒是以pet系列质粒为表达载体。
9、在本专利技术的一种实施方式中，所述表达载体为pet28a(+)质粒。
10、本专利技术还提供表达上述多铜氧化酶的基因工程菌。
11、在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌是以大肠杆菌、芽孢杆菌或酵母菌为宿主细胞。
12、本专利技术还提供一种基因工程菌，所述基因工程菌是以大肠杆菌为宿主细胞，表达氨基酸序列如seq id no.2所示的多铜氧化酶。
13、在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌是以大肠杆菌bl21为表达宿主。
14、在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌是以pet系列质粒为表达载体。
15、在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌是以pet28a(+)为表达载体，表达了氨基酸序列如seq id no.2所示的多铜氧化酶。
16、本专利技术还提供上述基因工程菌的构建方法，所述方法为，将核苷酸序列如seq idno.1所示的基因序列与载体连接，转化至大肠杆菌细胞中。
17、本专利技术还提供一种多铜氧化酶的生产方法，所述方法是将上述基因工程菌接种至培养基中进行培养，收集菌体细胞，破碎细胞获得粗酶液后进行纯化。
18、在本专利技术的一种实施方式中，所述菌株培养方法为，将所述基因工程菌接种至lb培养基中，培养至od600为0.6-0.8时，加入iptg进行诱导16h。
19、在本专利技术的一种实施方式中，所述纯化方法为镍柱亲和层析。
20、本专利技术还提供所述多铜氧化酶在食品领域降低生物胺方面的应用。
21、在本专利技术的一种实施方式中，所述应用包括降低发酵食品中的生物胺含量。
22、在本专利技术的一种实施方式中，所述应用是将重组多铜氧化酶添加至黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、虾酱和鱼露中，降解其中的主要生物胺含量。
23、在本专利技术的一种实施方式中，所述应用是将所述重组多铜氧化酶以800mg蛋白/l的量加入黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、虾酱和鱼露中，于20～45℃反应至少48h。
24、在本专利技术的一种实施方式中，所述应用是将所述重组多铜氧化酶以比酶活为225±3.8u/mg的量加入黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、虾酱和鱼露中，于20～45℃反应至少48h。
25、在本专利技术的一种实施方式中，所述生物胺包括但不限于色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺。
26、本专利技术提供了一种降解生物胺的酶制剂，所述酶制剂中含有氨基酸序列如seq idno.2所示的多铜氧化酶。
27、本专利技术提供了一种降解环境体系中生物胺的方法，所述方法为，利用希氏乳杆菌来源的多铜氧化酶或表达所述多铜氧化酶的基因工程菌降解生物胺，所述多铜氧化酶的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述环境体系非体内环境。
28、在本专利技术的一种实施方式中，所述环境体系包括食品、药品、保健品、化学品环境系统。
29、在本专利技术的一种实施方式中，所述环境体系包括不限于乳制品、鱼制品、肉制品、发酵食品。
30、在本专利技术的一种实施方式中，所述环境体系包括不限于黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、果酒、虾酱和鱼露。
31、在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌是以细菌或真菌为宿主细胞。
32、在本专利技术的一种实施方式中，所述生物胺包括但不限于色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺。
33、本专利技术还提供了上述酶制剂或上述氨基酸序列如seq id no.2所示的多铜氧化酶或表达了氨基酸序列如seq id no.2所示的多铜氧化酶的基因工程菌在制备降解环境体系中生物胺的产品中的应用。
34、在本专利技术的一种实施方式中，所述环境体系包括食品、药品、保健品、化学品环境体系。
35、在本专利技术的一种实施方式中，所述环境体系包括不限于乳制品、鱼制品、肉制品、发酵食品。
36、在本专利技术的一种实施方式中，所述环境体系包括不限于黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、果酒、虾酱和鱼露。
37、在本专利技术的一种实施方式中，所述生物胺包括但不限于色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺。...
【技术保护点】
1.一种降解环境体系中生物胺的方法，其特征在于，所述方法为，将希氏乳杆菌(Lactobacillus hilgardii)来源的多铜氧化酶或表达所述多铜氧化酶的基因工程菌，添加至含有生物胺的环境体系中进行降解，所述多铜氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述环境体系非体内环境。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环境体系为食品、药品、保健品、化学品环境体系；优选的，所述环境体系包括不限于乳制品、鱼制品、肉制品、发酵食品。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环境体系包括不限于黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、果酒、虾酱和鱼露。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌是以细菌或真菌为宿主细胞。
5.根据权利要求1～4任一所述的方法，其特征在于，所述生物胺包括但不限于色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺。
6.氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多铜氧化酶或表达了氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多铜氧化酶的基因工程菌在制备降解环境体系中生物胺的产品中
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述环境体系为食品、药品、保健品、化学品环境体系；优选的，所述环境体系包括不限于乳制品、鱼制品、肉制品、发酵食品。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述环境体系包括不限于黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、果酒、虾酱和鱼露。
9.根据权利要求6～8任一所述的应用，其特征在于，所述生物胺包括但不限于色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺。
10.氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多铜氧化酶或表达了氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多铜氧化酶的基因工程菌在制备发酵食品中的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述发酵食品包括不限于发酵饮品、发酵蔬菜、酒精饮料。
12.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述发酵食品包括不限于黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、果酒、虾酱和鱼露。
13.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述基因工程菌是以细菌或真菌为宿主细胞。
14.氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多铜氧化酶或表达了氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多铜氧化酶的基因工程菌在食品领域中降解生物胺方面的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种降解环境体系中生物胺的方法，其特征在于，所述方法为，将希氏乳杆菌(lactobacillus hilgardii)来源的多铜氧化酶或表达所述多铜氧化酶的基因工程菌，添加至含有生物胺的环境体系中进行降解，所述多铜氧化酶的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述环境体系非体内环境。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环境体系为食品、药品、保健品、化学品环境体系；优选的，所述环境体系包括不限于乳制品、鱼制品、肉制品、发酵食品。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环境体系包括不限于黄酒、酱油、醋、低盐酱油、料酒、果酒、虾酱和鱼露。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌是以细菌或真菌为宿主细胞。
5.根据权利要求1～4任一所述的方法，其特征在于，所述生物胺包括但不限于色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺。
6.氨基酸序列如seq id no.2所示的多铜氧化酶或表达了氨基酸序列如seq id no.2所示的多铜氧化酶的基因工程菌在制备降解环境体系中生物胺的产品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。