【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒及其制备方法。
技术介绍
1、猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，ped)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,pedv)引起的一种以腹泻、呕吐、脱水和对仔猪高致死率为主要特征的高度接触性传染病。1978年，比利时报道了ped的发生，并将分离获得的病毒命名为cv777。随后该病传播到欧洲与亚洲一些国家。
2、目前针对pedv，市场上使用的多为灭活苗或弱毒苗，但这类疫苗存在保护率低、安全性差以及未能实现对ped净化的缺点。故安全性好，能够达到猪场净化的疫苗至关重要。能达到此目的的疫苗包括亚单位疫苗和核酸疫苗。针对兽用疫苗目前核酸疫苗开发较少；而亚单位疫苗又分为原核、酵母、cho、昆虫-杆状病毒4个表达系统，原核表达系统具有缺乏翻译后修饰、易形成包涵体、内毒素去除工艺繁琐等缺点。酵母表达系统有一定的翻译后修饰，但相对来说没有cho细胞翻译修饰效果好。昆虫细胞-杆状病毒目前的话表达量较低且修饰功能也没有cho细胞好。故采用翻译后修饰良好、表达量较高的cho表达系统来进行表达。
3、pedv orf2区的纤突糖蛋白s蛋白主要负责病毒与宿主细胞的吸附和膜融合，其中间优势抗原coe区是核心中和表位区。而铁蛋白是由24个亚基自组装形成的球形空心笼状结构，其表面可用于展示抗原蛋白，是一种理想的抗原递呈和疫苗开发平台。而铁蛋白和sars-cov2可自组装形成纳米颗粒，增强
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒及其制备方法，所制备的铁蛋白纳米颗粒免疫小鼠后，其产生的igg水平高，其中和抗体水平可达到1:128。
2、本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的：
3、本专利技术提供了一种猪流行性腹泻病毒核酸序列，所述猪流行性腹泻病毒核酸序列如seq id no.4所示。
4、本专利技术还提供了一种重组载体，所述重组载体包括所述的猪流行性腹泻病毒核酸序列。
5、进一步的，所述重组载体中所用空白载体包括但不限于pce1.2载体。
6、本专利技术还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括所述重组载体，所述宿主细胞包括但不限于cho-k1细胞。
7、本专利技术还提供了一种蛋白，所述蛋白由所述的猪流行性腹泻病毒核酸序列或所述的重组载体或所述的宿主细胞制备得到。
8、本专利技术还提供了一种携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒，所述铁蛋白纳米颗粒包括所述蛋白。
9、本专利技术还提供了一种所述的携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒的制备方法，包括将所述蛋白进行纯化，以及将纯化后的蛋白与isa206佐剂以1:1比例混合，配制成铁蛋白纳米颗粒的步骤。
10、本专利技术有益效果在于：
11、1.目前针对pedv，市场上使用的多为灭活苗或弱毒苗，但这类疫苗存在保护率低、安全性差以及未能实现对ped净化的缺点。故安全性好，能够达到猪场净化的疫苗至关重要。能达到此目的的疫苗包括亚单位疫苗和核酸疫苗。针对兽用疫苗目前核酸疫苗开发较少；而亚单位疫苗又分为原核、酵母、cho、昆虫-杆状病毒4个表达系统，原核表达系统缺乏翻译后修饰、易形成包涵体、内毒素去除工艺繁琐等缺点。酵母表达系统有一定的翻译后修饰，但相对来说没有cho细胞翻译修饰效果好，昆虫细胞-杆状病毒目前的话表达量较低且修饰功能也没有cho细胞好。故采用cho表达系统来进行。
12、2.目前针对pedv的cho表达技术，因表达的蛋白是s蛋白，其本身比较大，故表达量不是很高，若只表达具有中和能力的coe区，免疫效果又不是很好。故本专利根据铁蛋白和pedv-2coe蛋白融合表达后，可自组装形成纳米颗粒且能增强抗原的免疫原性来制备表达量高且免疫原性良好的疫苗。
13、3.本专利技术使用携带pedv-2coe的铁蛋白纳米颗粒，免疫小鼠后，其产生的igg水平高，其中和抗体水平可达到1:128。
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1.一种猪流行性腹泻病毒核酸序列，其特征在于，所述猪流行性腹泻病毒核酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒核酸序列。
3.如权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体中所用空白载体包括但不限于PCE1.2载体。
4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括权利要求2-3任一项所述重组载体，所述宿主细胞包括但不限于CHO-K1细胞。
5.一种蛋白，其特征在于，所述蛋白由权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒核酸序列或权利要求2-3任一项所述的重组载体或权利要求4所述的宿主细胞制备得到。
6.一种携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒，其特征在于，所述铁蛋白纳米颗粒包括权利要求5所述蛋白。
7.如权利要求6所述的携带猪流行性腹泻病毒抗原表位的铁蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括将权利要求5所述蛋白进行纯化，以及将纯化后的蛋白与ISA206佐剂以1:1比例混合，配制成铁蛋白纳米颗粒的步骤。
【技术特征摘要】
1.一种猪流行性腹泻病毒核酸序列，其特征在于，所述猪流行性腹泻病毒核酸序列如seq id no.4所示。
2.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包括权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒核酸序列。
3.如权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体中所用空白载体包括但不限于pce1.2载体。
4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括权利要求2-3任一项所述重组载体，所述宿主细胞包括但不限于cho-k1细胞。
5.一种蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：王建超，高耀荣，
申请(专利权)人：上海杰威医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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