【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种il-2突变体。
技术介绍
1、白介素-2(il-2)，于1976年被发现，当时被称为t细胞生长因子(tcgf)，是一种在维持t淋巴细胞和nk细胞的正常功能中起着重要作用的球状糖蛋白。il-2是通过结合il-2受体(il2r)来介导其作用的，il-2受体由3个亚基组成，分别为α(cd25)、β(cd122)和γ(cd132)受体亚基，其中α受体主要表达在t抑制细胞(treg)表面，而β和γ受体亚基则高表达于效应性t细胞(teff)和nk细胞。il-2对不同受体亚基的复合物形式的亲和力是不同的，il-2对α、β和γ受体亚基组成的复合体的亲和力是最高的，对由β和γ受体亚基组成的复合体的亲和力则为中等(约降低100倍)，而il-2与两种形式的受体亚基组合结合后均能传递信号(minami等，annu rev immunol 11，245-268(1993))。
2、近年来已有研究表明，临床上在低剂量的il-2治疗条件下，对一些自身免疫性疾病是有益处的。其原因是低剂量下il-2会优先和treg细胞表面上带有α链的高亲和力受体结合，维持和促进treg增殖而达到治疗的效果。但是剂量高时il-2也会通过激活大量的效应t细胞从而中和treg激活带来的免疫抑制，出现更多的毒副作用。由此可以看到il-2高低剂量所导致不同类型的t免疫细胞增殖量也有所不同，在临床使用中用于自身免疫性疾病也会受限。
3、因此，如何使il-2更具有选择性的激活treg细胞，增大用于自免疾病的剂量边界，还是需要
技术实现思路
1、有鉴于现有技术中的il-2高低剂量所导致不同类型的t免疫细胞增殖量的不同导致自免疾病的剂量边界有限问题，本专利技术提供了一种il-2突变体。
2、本专利技术的一个方面提供了一种il-2突变体，在一个具体实施方式中，il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上具有如下至少一种突变：
3、1)在t10和q11位之间插入至少1个侧链较小的氨基酸残基；
4、2)在p82和r83位之间插入至少1个非极性氨基酸残基。
5、在t10和q11位、p82和r83位中插入氨基酸，减弱了il-2突变体与β受体的结合。
6、可选地，侧链较小的氨基酸残基包括丙氨酸残基、甘氨酸残基和丝氨酸残基；非极性氨基酸残基包括谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸。
7、可选地，在t10和q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基；在p82和r83位之间插入1个亮氨酸残基或异亮氨酸残基。
8、可选地，il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上，在t10和q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基；
9、或者，所述il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上，在p82和r83位之间插入1个亮氨酸残基或异亮氨酸残基；
10、或者，所述il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上，在t10和q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基，并且在p82和r83位之间插入1个亮氨酸残基或异亮氨酸残基。
11、可选地，il-2突变体还包括在a1位前添加s或g等小侧链氨基酸，以改善il-2突变体在大肠杆菌中表达n端甲硫氨酸脱落不均一的现象。
12、可选地，il-2突变体还包括如下位点中的一个或多个的突变：
13、n29、y31、k35、t37、t41、y45、k48、p65、v69、n71、l72、q74、n88和i89。
14、进一步地，上述突变为插入、删除或替换。
15、可选地，所述突变为替换；所述替换为：n29s、y31h、k35r、t37a、t41e、y45h、k48e、p65s、p65t、v69a、n71r、l72h、q74p、q74r、n88d和i89v。可选地，il-2突变体包括如下位点中的至少两个的突变：n29、y31、k35、t37、k48、v69、n71、q74、n88和i89。
16、可选地，所述突变为替换，所述位点的替换为：n29s、y31h、k35r、t37a、k48e、v69a、n71r、q74p、n88d、i89v。
17、可选地，前述替换后的氨基酸残基还可以是同类型的氨基酸残基，例如替换后为侧链较小的氨基酸残基s的，也可以替换为其他侧链较小的氨基酸残基如g、a；例如替换后为侧链带正电荷的氨基酸残基r的，也可以替换为其他侧链带正电荷的氨基酸残基，如k、h；例如替换后为侧链带负电荷的氨基酸残基d的，也可以替换为其他侧链带负电荷的氨基酸残基，如e。
18、可选地，il-2突变体包括如下突变组合中的一种：1)k35、t37、k48、n71和q74；2)k35和n71。
19、可选地，所述突变为k35r、t37a、k48e、n71r和q74p。
20、可选地，il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上，在t10和q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基，且包括以下突变组合中的一种：1)k35r、t37、k48e、n71r和q74p；2)k35r和n71r；
21、或者，il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上，在p82和r83位之间插入1个亮氨酸残基或异亮氨酸残基，且包括以下突变组合中的一种：1)k35r、t37、k48e、n71r和q74p；2)k35r和n71r；
22、或者，il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上，在t10和q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基，并且在p82和r83位之间插入1个亮氨酸残基或异亮氨酸残基，且包括以下突变组合中的一种：1)k35r、t37、k48e、n71r和q74p；2)k35r和n71r。
23、可选地，il-2突变体包括如下位点中的一个的突变：t41、q74、l72、y45和p65。
24、可选地，所述突变为替换，所述位点的替换为：t41e、q74r、l72h、y45h、p65s、p65t。
25、可选地，il-2突变体还包括c125位的突变，所述c125位的突变为c125a、c125g或c125s。
26、可选地，il-2突变体还包括l19r、l19q、l19e、l19a或l19h的突变，和/或在n末端或者c末端引入亲水性多肽。引入亲水性多肽可以提高il-2突变体的水溶性。
27、可选地，亲水性多肽具体为sepatsgsetpgsepatsgsetpg(seq id no:32)。
28、可选地，il-2的氨基酸序列选自下方任一种：
29、1)如seq id no:1或seq id no:2所示的氨基酸序列；
30、2)包含如seq id no:1或seq id no:2所示的氨基酸序列；
31、3)与seq id no:1或seq本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体为在IL-2的氨基酸序列上具有如下至少一种突变：
2.如权利要求1所述的IL-2突变体，其特征在于，所述侧链较小的氨基酸残基包括丙氨酸残基、甘氨酸残基和丝氨酸残基；所述非极性氨基酸残基包括谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸。
3.如权利要求2所述的IL-2突变体，其特征在于，在T10和Q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基；在P82和R83位之间插入1个亮氨酸残基或异亮氨酸残基。
4.如权利要求3所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体为在IL-2的氨基酸序列上，在T10和Q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基；
5.如权利要求1所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体还包括如下位点中的一个或多个的突变：
6.如权利要求5所述的IL-2突变体，其特征在于，所述突变为插入、删除或替换。
7.如权利要求5所述的IL-2突变体，其特征在于，所述突变为替换；
8.如权利要求
9.如权利要求8所述的IL-2突变体，其特征在于，所述突变为替换，所述位点的替换为：N29S、Y31H、K35R、T37A、K48E、V69A、N71R、Q74P、N88D、I89V。
10.如权利要求8所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体包括如下突变组合中的一种：1)K35、T37、K48、N71和Q74；2)K35和N71。
11.如权利要求10所述的IL-2突变体，其特征在于，所述突变为K35R、T37A、K48E、N71R和Q74P。
12.如权利要求11所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体为在IL-2的氨基酸序列上，在T10和Q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基，且包括以下突变组合中的一种：1)K35R、T37、K48E、N71R和Q74P；2)K35R和N71R；
13.如权利要求5所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体包括如下位点中的一个的突变：T41、Q74、L72、Y45和P65。
14.如权利要求13所述的IL-2突变体，其特征在于，所述突变为替换，所述位点的替换为：T41E、Q74R、L72H、Y45H、P65S、P65T。
15.如权利要求1所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体还包括C125位的突变，所述C125位的突变为C125A、C125G或C125S。
16.如权利要求1、4和12中任一项所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体还包括L19R、L19Q、L19E、L19A或L19H的突变，和/或在N末端或者C末端引入亲水性多肽；可选地，所述亲水性多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示。
17.如权利要求1所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2的氨基酸序列选自下方任一种：
18.如权利要求1所述的IL-2突变体，其特征在于，在所述IL-2突变体的N端连接有PEG、脂肪酸链或IgG Fc，或C端连接IgG Fc。
19.如权利要求18所述的IL-2突变体，其特征在于，所述PEG为直链PEG或支链PEG。
20.如权利要求19所述的IL-2突变体，其特征在于，所述直链PEG的分子量为10～40kD，所述支链PEG的分子量为10～60kD。
21.如权利要求1所述的IL-2突变体，其特征在于，在所述IL-2突变体的N端连接有PEG。
22.如权利要求1所述的IL-2突变体，其特征在于，所述IL-2突变体的氨基酸序列如SEQID NO:3、5、6、7、8、9、10、11、12、13、33、35、37、39、41、43、45、47、49和51中的任一个所示。
23.一种分离的多核苷酸，其特征在于，其编码如权利要求1～22中任一项所述的IL-2突变体。
24.如权利要求23所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ IDNO:18、20、21、22、23、24、25、26、27、28、34和36中任一个所示、或者包含如SEQ ID NO:18、20、21、22、23、24、25、26、27、28、34、36、38、40、42、44、46、48、50和52...
【技术特征摘要】
1.一种il-2突变体，其特征在于，所述il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上具有如下至少一种突变：
2.如权利要求1所述的il-2突变体，其特征在于，所述侧链较小的氨基酸残基包括丙氨酸残基、甘氨酸残基和丝氨酸残基；所述非极性氨基酸残基包括谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸。
3.如权利要求2所述的il-2突变体，其特征在于，在t10和q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基；在p82和r83位之间插入1个亮氨酸残基或异亮氨酸残基。
4.如权利要求3所述的il-2突变体，其特征在于，所述il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上，在t10和q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基；
5.如权利要求1所述的il-2突变体，其特征在于，所述il-2突变体还包括如下位点中的一个或多个的突变：
6.如权利要求5所述的il-2突变体，其特征在于，所述突变为插入、删除或替换。
7.如权利要求5所述的il-2突变体，其特征在于，所述突变为替换；
8.如权利要求5所述的il-2突变体，其特征在于，所述il-2突变体包括如下位点中的至少两个的突变：n29、y31、k35、t37、k48、v69、n71、q74、n88和i89。
9.如权利要求8所述的il-2突变体，其特征在于，所述突变为替换，所述位点的替换为：n29s、y31h、k35r、t37a、k48e、v69a、n71r、q74p、n88d、i89v。
10.如权利要求8所述的il-2突变体，其特征在于，所述il-2突变体包括如下突变组合中的一种：1)k35、t37、k48、n71和q74；2)k35和n71。
11.如权利要求10所述的il-2突变体，其特征在于，所述突变为k35r、t37a、k48e、n71r和q74p。
12.如权利要求11所述的il-2突变体，其特征在于，所述il-2突变体为在il-2的氨基酸序列上，在t10和q11位之间插入1个丙氨酸残基、甘氨酸残基或丝氨酸残基，且包括以下突变组合中的一种：1)k35r、t37、k48e、n71r和q74p；2)k35r和n71r；
13.如权利要求5所述的il-2突变体，其特征在于，所述il-2突变体包括如下位点中的一个的突变：t41、q74、l72、y45和p65。
14.如权利要求13所述的il-2突变体，其特征在于，所述突变为替换，所述位点的替换为：t41e、q74r、l72h、y45h、p65s、p65t。
15.如权利要求1所述的il-2突变体，其特征在于，所述il-2突变体还包括c125位的突变，所述c125位的突变为c125a、c125g或c125s。
16.如权利要求1、4和1...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵耀，魏婷婷，张玉，张建军，王国永，谭伟，朱笑婷，王礼翠，张天赋，高翔，张维，
申请(专利权)人：北京志道生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。