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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子标记及其育种的,具体涉一种与湖羊尾脂重性状相关的分子标记及其检测方法。
技术介绍
1、绵羊尾部脂肪属于白色脂肪,在极端恶劣的环境中能够通过消耗尾部脂肪来提供能力,起到“保命”作用(safdarian m,zamiri mj,hashemi m,noorolahi h.relationshipsof fat-tail dimensions with fat-tail weight and carcass characteristics atdifferent slaughter weights of torki-ghashghaii sheep.meat sci.2008nov;80(3):686-9.)。但是随着集约化舍饲养羊生产系统的完善和人们消费观念的改变,过多的尾部脂肪沉积将会影响饲料效率、肉质、动物的交配和正常运动等(wang x y,fang c,he h y,caoh,liu ll,jiang l,ma y h,liu w j.2021c.identification of key genes in sheepfat tail evolution based on rna-seq.gene,781.)。尾脂重是绵羊的重要经济性状,是衡量尾部脂肪沉积程度的直接指标,并且属中高等遗传力性状,受遗传控制且能够通过选择改良。同时分子标记辅助选择(marker-assisted selection,mas)被广泛应用于畜禽的选种选育工作中,因此筛选与绵羊尾脂重相关的分子标记,从遗传角度减少绵羊尾部脂肪沉积对提
2、肿瘤抑制候选基因5(tusc5,也称为脑内皮细胞衍生基因-1或bec-1)是一种在棕色脂肪组织(bat)转录组分析中发现的含有cd225结构域的抗冻基因,在脂肪细胞成熟中起着重要作用(oort pj et al.characterization of tusc5,an adipocyte gene co-expressed in peripheral neurons.mol cell endocrinol.2007sep 30;276(1-2):24-35.)。研究报道tusc5基因在鼠的脂肪组织中高度表达,可以增强脂肪细胞分化,脂肪酸摄取和脂滴中脂肪酸的储存,从而抑制异位脂质沉积并提高全身的胰岛素敏感性。(shibata,t,molecular cloning and characterization of rat brain endothelial cellderived gene-1(tumor suppressor candidate 5)expressing abundantly in adiposetissues.mol cell.endocrinol.263,38–45.),但是tusc5基因与湖羊的尾部脂肪沉积有没有关系,有何关系并不清楚,本专利技术以衡量尾部脂肪沉积的直接指标尾脂重为目标性状,通过pcr扩增、dna测序和序列分析,探讨其不同基因型与湖羊尾脂重性状的相关性,以期为减少绵羊尾部脂肪沉积提供一个新的分子标记。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种与湖羊尾脂重性状相关的分子标记、其检测方法和应用。本专利技术的分子标记是从湖羊tusc5基因中扩增得到,其具体核苷酸序列如seq id no.1所示。通过扩增湖羊tusc5基因的dna序列并测序,筛选tusc5基因的多态性位点,分析不同的基因型与湖羊尾脂重性状的相关性,并建立湖羊尾脂重性状相关的分子标记的检测方法,为减少尾部脂肪沉积,增加养羊业经济效益提供一个新的分子标记。
2、为实现上述目的,本专利技术采用以下的技术方案为:
3、一种与湖羊尾脂重性状相关的分子标记,该分子标记的核苷酸序列如seq idno.1所示,该序列的第191bp位的y示c或t,由于上述序列在第286位碱基处有一个c/t突变,从而导致了湖羊tusc5基因在该位点的c/t多态性。
4、seq id no.1:tgcccttcaaggtgatatccgaggggcaccgggaagccttg caccccctctcatcctcccgggccagctccaggcgggcgtcctccacagccaccacctcgtatgcccaggacggagaagttcccaaagattatctcatccttgccatcgcctcctgcttctgccccgtctggcccctcaacctcatgccyctcatcttttccatcatggtaagtgctgctcttcatcgctgggttggggctggttttggtcagcagccatgcttccctggcaggcaccagtcaccctacctagggtgttgagagaaaaactgggatcccggggggtggggaggggagactccccatcttagccggcctattactcccccttggagaggggtccagcgcccccggagcttcagtttcctgtcctccttcatctctgctcctggacatcacagcttgactttgcacacatccctgctgggaaggggatcccagagaggtgcccagagctaaatcctgcccagaaaggacagccagcttgggggtccggcctttgcaggggccgggggctttgtcgcaaggagtcattcctgagtggggctgtgaatcagcagagattgcagccaatatggggtctcagggccccgtgttctcaggaggggagccaggcatcacctccccaccccatccccagggcctcctgggtgttctaacagcttctggca
5、一种用于检测上述分子标记的pcr引物对,优选地,其包括核苷酸序列如seq idno.2所示的上游引物m-f和核苷酸序列如rseq id no.3所示的下游引物m-r。
6、一种用于检测上述分子标记的kaspar引物对,其包括如seq id no.4所示的正向引物a1、如seq id no.5所示的正向引物a2和如seq id no.6所示的反向引物c。
7、一种检测上述分子标记的试剂盒,所述试剂盒中包含了检测上述分子标记的pcr引物对或kaspar引物对。
8、一种检测上述分子标记的方法,具体检测方法包括如下步骤:
9、a)使用上述的pcr引物对、kaspar引物对或包含上述引物对的试剂盒,对湖羊基因组dna进行扩增;
10、b)对步骤a)获得的扩增产物的多态性位点进行鉴定。
11、其中,在步骤b)中,上述分型鉴定的方法包括但不限于直接测序法、探针法、基因芯片法、高分辨率溶解曲线法。
12、如上所述的方法,优选地,在步骤a)中,pcr引物对如seq id no.2和seq id no.3所示,在步骤b)中,基因分型鉴定采用直接测序法。
13、利用上述引物检测分本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与湖羊尾脂重性状相关的分子标记,其特征在于,所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,该序列的第191bp位的Y表示C或T,该突变导致了湖羊TUSC5基因在该位点的C/T多态性。
2.用于检测权利要求1所述分子标记的PCR引物对,其特征在于,核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的上游引物M-F和核苷酸序列如RSEQ ID NO.3所示的下游引物M-R。
3.用于检测权利要求1所述分子标记的KASPar引物对,其特征在于,其包括如SEQ IDNO.4所示的正向引物A1、如SEQ ID NO.5所示的正向引物A2和如SEQ ID NO.6所示的反向引物C。
4.包含权利要求2所述PCR引物对或权利要求3所述KASPar引物对的检测试剂盒。
5.一种检测权利要求1所述分子标记的方法,其特征在于,其包括如下步骤:
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,在步骤a)中,先以湖羊全血为样品提取基因组DNA,利用PCR引物对如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的引物对提取的基因组DNA进行PCR扩增
7.如权利要求5所述的方法,其特征在于,在步骤a)中,
8.权利要求1所述与湖羊尾脂重性状相关的分子标记、权利要求2所述的PCR引物对、权利要求3所述的KASPar引物对或权利要求4所述的检测试剂盒或权利要求5-7中任一项所述方法在湖羊辅助育种中的应用。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述应用为挑选出具有较低尾脂重性状的湖羊品种,当基因型为TT型时,其具有较低的尾脂重。
...【技术特征摘要】
1.一种与湖羊尾脂重性状相关的分子标记,其特征在于,所述分子标记的核苷酸序列如seq id no.1所示,该序列的第191bp位的y表示c或t,该突变导致了湖羊tusc5基因在该位点的c/t多态性。
2.用于检测权利要求1所述分子标记的pcr引物对,其特征在于,核苷酸序列如seq idno.2所示的上游引物m-f和核苷酸序列如rseq id no.3所示的下游引物m-r。
3.用于检测权利要求1所述分子标记的kaspar引物对,其特征在于,其包括如seq idno.4所示的正向引物a1、如seq id no.5所示的正向引物a2和如seq id no.6所示的反向引物c。
4.包含权利要求2所述pcr引物对或权利要求3所述kaspar引物对的检测试剂盒。
<...【专利技术属性】
技术研发人员:王维民,曹佩亮,李发弟,张小雪,田慧彬,张德印,徐丹,李晓龙,马宗武,韩坤潮,何丽娟,
申请(专利权)人:兰州大学,
类型:发明
国别省市:
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